術前血清PTX-3水平與結直腸癌根治術后復發的關系

高靈靈，管金磊，劉占輝，顏偉，李瑞池，李會允，耿玉蘭

(1 河北醫科大學第一醫院，石家莊050031；2 河北醫科大學第四醫院)

結直腸癌(CRC)是癌癥患者死亡的主要原因之一[1]。盡管早期診斷方法和外科根治手術應用大大減少了病死率，但是仍有半數以上患者根治術后發生轉移和繼發性死亡[2]。病理TNM分期是CRC患者疾病進展的金標準，但仍有局限性，無法識別復發高危患者[2～4]。臨床急需對CRC復發敏感的生物標志物，以便發現腫瘤逃逸的高危人群，并對其監測和早期干預。很多腫瘤的發生、發展都伴有慢性炎癥的發展過程，炎癥微環境中細胞因子等炎性應答介質能誘導DNA甲基化、抑癌基因突變等變化，最終導致癌癥的發生和發展。研究顯示，有高循環水平炎癥介質的個體發生CRC的風險高[5，6]。穿透素3(PTX-3)屬于炎癥急性期反應蛋白，通過與膠原和纖維蛋白原相互作用，促使膠原和纖維蛋白原包裹腫瘤細胞，擴大固有免疫的效應功能，使腫瘤細胞不為機體免疫系統識別，從而造成CRC轉移復發[7]。本研究對CRC患者根治術后行為期5年的隨訪，探討了術前血清PTX-3水平與術后CRC復發的關系。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2010年1月～2011年12月河北醫科大學第一醫院收治的CRC患者。納入標準：參照2012年衛計委公布的《結直腸癌診斷》標準(WS/T386-2012)，經結腸鏡組織病理學檢查證實；行CRC根治手術后隨訪5年；獲得醫院醫學倫理委員會批準，簽署知情同意書；排除胰腺疾病和其他系統原發惡性腫瘤；排除有其他腸道疾病；排除采血前放化療以及中成藥等抗腫瘤治療。共收集患者542例，男303例、女239例，年齡38～82(51.3±16.3)歲。隨訪期結束，復發68例(觀察組)、未復發474例(對照組)。觀察組男38例、女30例；年齡(49.3±17.2)歲；體質量指數(20.3±6.3)kg/m2；結腸腫瘤41例、直腸腫瘤27例；腫瘤直徑<4 cm 19例、≥4 cm 49例。對照組男265例、女209例；年齡(53.2±23.1)歲；體質量指數(23.1±5.2)kg/m2；結腸腫瘤305例、直腸腫瘤169例；腫瘤直徑<4 cm 162例、≥4 cm 312例。兩組性別、年齡、體質量指數、腫瘤部位、腫瘤直徑差異均無統計學意義(P均>0.05)。觀察組外周血白細胞(WBC)、中性粒細胞(N)、淋巴細胞(L)、血小板(PLT)、癌胚抗原(CEA)、血管內皮生長因子(VEGF)均高于對照組(P均<0.05)。見表1。

1.2 術前血清PTX-3檢測方法 所有CRC患者于根治術前隔夜空腹采集靜脈血3 mL，置于促凝真空采血管室溫凝集，并在1 h內3 000 r/min離心10 min，取上清于-70 ℃冰箱貯存待檢。將血清樣本室溫融解，使用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測血清PTX-3。所用試劑購自美國R&D Systems公司，檢測儀器為奧地利Tecan Sunrise酶標儀。操作嚴格按試劑盒說明書進行，平行測定2次，求均值。

表1 兩組血常規、CEA、VEGF比較

2 結果

2.1 兩組術前血清PTX-3水平比較 觀察組、對照組的術前血清PTX-3分別為(8.68±2.64)、(5.23±2.09)ng/mL，觀察組高于對照組(P<0.05)。

2.2 術前血清PTX-3與術后CRC復發的關系 將兩組差異有統計學意義的臨床病理參數通過多因素Logistic回歸法分析，發現CEA(OR=3.995，95%CI為1.326～13.882，P<0.01)、VEGF(OR=4.127，95%CI為2.034～13.633，P<0.01)、PTX-3(OR=6.238，95%CI為4.019～19.235，P<0.01)均為CRC患者根治術后復發的獨立危險因素。使用CEA、VEGF校正后，發現術前血清PTX-3升高患者，術后CRC復發的危險升高1.3倍(OR=1.309，95%CI為0.931～3.017，P<0.01)。

3 討論

CRC是常見的消化道惡性腫瘤之一，世界范圍內其發病率和病死率常年居高不下，目前惟一可根治的方法就是手術切除。TNM分期Ⅰ期、Ⅱ期CRC患者外科根治術后5年生存率為95%、60%～80%，但是Ⅲ期、Ⅳ期患者5年生存率僅為35%和10%[8,9]，約30%的Ⅰ～Ⅲ期CRC患者最終死于術后復發及轉移[10]。一旦出現復發及轉移，其5年生存率﹤5%，平均生存期僅為7個月[11]。復發是造成生存期縮短的主要原因之一，本研究發現，行根治術后CRC患者5年復發率為12.5%；Willam等[12]研究顯示，行根治術后CEA升高的CRC患者，隨訪2年7個月復發率為59.6%。也有資料顯示，CRC根治術后5年復發率超過90%[13]。導致差異存在的原因，可能是入組人群不同、術后生活方式和隨訪時間不同造成的。

腫瘤微環境中的炎性細胞釋放的化學因子(即炎癥介質)等，能夠激活局部免疫網絡，促進腫瘤細胞增殖、逃逸和血管生成，從而實現促進惡性細胞的發生和成長[14～16]。炎癥介質與血管生成因子協同增強腫瘤細胞的侵襲能力，促使腫瘤細胞運動和遷移，并最終導致復發及轉移的發生。在機體受到感染的情況下，腫瘤血管生成，VEGF和炎癥介質CCL2、CXCL8等使得白細胞在腫瘤位置聚集，反過來又生成VEGF和炎癥介質，通過自分泌和旁分泌，最終加強了腫瘤生成信號途徑[17]。炎癥介質和細胞因子都廣泛地存在于腫瘤微環境中，研究顯示白細胞介素1b(IL-1b)、腫瘤壞死因子α和IL-6炎癥介質體外可直接促進CRC腫瘤進展[18]。血清中炎癥介質可以反映腫瘤部位感染反應的發展，故可成為監測CRC患者有無浸潤的標志物[19]。但是，目前少有研究這些炎癥介質在CRC患者根治術后復發和轉移中的作用[20]。PTX-3是一種免疫調節子，類似于抗體的功能祖先，為人體所必需。其與C反應蛋白同屬于穿透素家族，作為炎癥介質在組織重建、血管生成和急性炎癥、免疫應答等維持機體穩態方面起重要作用，并涉及腫瘤相關的感染。有研究發現，動物和人腫瘤內血管上的內皮細胞高水平表達PTX-3[21]。在患脂肪肉瘤[22]、神經膠質瘤[23]、肺癌[24]、前列腺癌[25]時，血清PTX-3的水平明顯升高。另有研究顯示，PTX-3包含在脂肪酶/Toll樣受體信號途徑中，而這一途徑可誘導CXCL-8的表達，而CXCL8升高與CRC患者根治術后復發有關[26]。以上研究提示，PTX-3可能是CRC復發的獨立變量，與其他變量沒有相關性。

本研究根據REMARK指南來評估腫瘤預后標志物[27]，選擇術前血清PTX-3水平作為評價指標，主要考慮到以下幾點：首先，用術前的血清水平來研究，以避免手術方式變化帶來的影響；其次，選擇術后未復發者為對照組，而不是健康人群，可更多地避免除根治手術本身外其他因素對PTX-3的影響；最后，生物標志物的選擇也依賴于預后情況對標志物影響的程度[28]。同時，患者數量和個體差異的限制可能會導致研究結果產生偏倚，還需要增大樣本量以達到一致性[29]。本研究發現，術前血清PTX-3與CRC復發有關，復發患者術前血清PTX-3水平較高，且其復發的風險是低水平的1.3倍，提示PTX-3是較好的預后因子，可根據其術前血清水平的高低，對患者進行分級管理。