不同精粗比日糧對綿羊瘤胃微生物蛋白濃度和細菌數的影響

永榮，姜向宏

（1.內蒙古鄂爾多斯市動物衛生監督所，內蒙古 鄂爾多斯 017000；2.內蒙古鄂托克旗家畜改良工作站，內蒙古 鄂托克 010018）

反芻動物的瘤胃是一個龐大的發酵罐，飼料中大部分有機物質、纖維物質和淀粉的消化都是依靠瘤胃微生物來完成的[1]。瘤胃微生物在反芻動物營養代謝方面起著舉足輕重的作用。本試驗擬通過飼喂3種不同纖維水平的日糧來研究日糧結構對瘤胃微生物蛋白和瘤胃細菌數量的影響，并通過相關性分析來研究瘤胃細菌濃度、細菌數量與微生物蛋白濃度間的相關關系。

1 材料與方法

1.1 試驗設計 選擇體況良好、體重50kg左右的鄂爾多斯細毛羊30只，統一驅蟲，安裝永久性瘤胃瘺管和十二指腸瘺管進行試驗。試驗羊隨機均分為3組（1組、2 組和 3組），分別飼喂精粗比為 1∶9、3∶7、5∶5 的日糧。

1.2 試驗日糧 日糧配制參照中國美利奴羊飼養標準[2]，綿羊的能量維持需要為 450kJ/kg·BW0.75，蛋白質需要為350mgN/kg·BW0.75，飼喂水平為1.3倍的維持需要。

1.3 飼養管理 通過控制采食量來控制各試驗組綿羊對營養成分的攝入量。試驗羊采食的青干草從呼倫貝爾市購進，經打草機一次性打碎備用。試驗日糧一次備齊，分別于7：00和19：00飼喂，自由采食，自由飲水，單圈飼養。

1.4 測定指標及方法

1.4.1 瘤胃微生物蛋白測定 進入正式試驗后連續采樣3 d，分別在以下時間點上采樣：早晨飼喂后0、2、4、8、12h，每次采集瘤胃液約 50mL。瘤胃液用 2 層紗布過濾后，濾液于4000r/min離心15 min，取上清液測定瘤胃微生物蛋白含量。所有上清液樣品均在-20℃下冷凍保存，待測。

將不同采樣時間點的冷凍上清液樣品解凍，用移液管移取20.0mL，在高速冷凍離心機上以12000r/min離心30min，取沉淀用0.9%氯化鈉溶液沖洗2遍，每次沖洗后均以12000r/min離心30min，棄掉上清液，將沉淀小心無損地轉移到消化管中，用凱氏定氮法測定含氮量，然后折算出菌體蛋白含量。

1.4.2 瘤胃細菌計數 分別于飼喂后0、2、4、8、12 h用采樣管從瘤胃不同部位快速吸取瘤胃液50mL左右，裝入事先預熱到39℃并通入二氧化碳氣體的小瓶中，密封，39℃保溫，取回后迅速勻漿15s，用兩層紗布過濾，濾液用來進行細菌計數。

1.5 數據分析 數據采用SAS軟件和Excel2003軟件進行統計分析。

2 結果與分析

2.1 不同精粗比日糧對綿羊瘤胃微生物蛋白濃度的影響 結果見表1。

表1 不同精粗比日糧對綿羊瘤胃微生物蛋白濃度的影響 mg/100mL

由表1可見，不同精粗比日糧對綿羊瘤胃微生物蛋白濃度的影響無顯著差異（P＞0.05），但數值上呈現一定趨勢，即：3組＞2組＞1組。從瘤胃微生物蛋白濃度的動態變化來看，3個組的變化趨勢相同，均是飼喂前微生物蛋白濃度最高，飼喂后4h最低。

影響瘤胃微生物蛋白濃度的因素很多，日糧中精料比例、飼喂頻率、飼喂水平、取樣時間以及動物的個體差異等都會對其產生影響。本試驗各組之間差異不顯著可能就是多種因素影響的結果。

2.2 不同精粗比日糧對瘤胃細菌數量的影響 結果見表2。

表2 不同精粗比日糧對瘤胃細菌數量的影響

由表2可見，隨著日糧中精料比例的增加，瘤胃細菌數量有增加的趨勢，說明日糧精料比例高能夠促進瘤胃細菌生長。從不同處理組各時間點的平均值可以看出，3組的瘤胃細菌數量（11.00×109個/mL）高于1 組（8.73×109個/mL）和 2 組（9.22×109個/mL），但經統計分析差異不顯著（P＞0.05）。

由圖1細菌變化趨勢圖可見，各組瘤胃細菌數量的動態變化規律基本一致。瘤胃細菌濃度在飼喂前最高，而后隨著飼喂時間的變化呈現一定的波動，基本上在2h或4h時最低。在飼喂后2h或4h時細菌數量最少，以后逐漸上升，8h時出現峰值，之后又開始下降直到第2次飼喂前。1組瘤胃細菌數量的變化較明顯，在第2次飼喂前出現最低值，但變化趨勢與其他各組一致。說明不同精粗比日糧對瘤胃細菌的影響有一些相似性。各組最高值和最低值出現的時間點不一致，說明不同精粗比日糧對瘤胃細菌的生長周期是有一定影響的。

結合表1和表2來看，同一試驗組的瘤胃微生物蛋白濃度和細菌數的動態變化趨勢基本一致。同一試驗組在不同精粗比日糧條件下，瘤胃微生物蛋白濃度和細菌數的動態變化呈現出相同的趨勢：飼喂前最高，飼喂后2h出現最低值，以后逐漸上升，在10h或12h出現第2次峰值。這跟前人報道的結果一致[3-4]。

圖1 瘤胃細菌濃度和數量間的關系

2.3 瘤胃細菌濃度和細菌數量間的相關關系 關于瘤胃細菌濃度和細菌數量間的相關性研究結果見圖1。由圖1可見，瘤胃細菌濃度與瘤胃細菌數量呈現很高的相關性（y=0.4209x，R2=0.9972）。說明對于同一動物來說，細菌濃度就是衡量細菌數量的一個很好的指標，今后可以只通過測定細菌濃度即可知曉細菌數量的變化規律。

2.4 瘤胃微生物蛋白濃度與細菌濃度間的相關性 結果見圖2。由圖2可見，瘤胃微生物蛋白濃度與細菌濃度之間的相關性很低（R2=0.2271）。說明瘤胃微生物蛋白與瘤胃細菌菌群之間沒有很高的相關性。原因可能是：（1）有許多研究表明，實驗室條件下可培養的細菌數量只占到瘤胃細菌數量的1%～10%，這對結果的分析具有一定的影響；（2）本試驗測定的微生物蛋白是粗蛋白含量，包括了活的細菌蛋白和部分已經死了的菌體蛋白，這對微生物蛋白濃度產生了一定的影響；（3）微生物分離過程中存在誤差；（4）試驗動物數量也會對試驗結果產生影響。

圖2 瘤胃微生物蛋白濃度與細菌濃度間的關系

3 結論

不同精粗比日糧對綿羊瘤胃微生物蛋白濃度和細菌數量的影響差異不顯著（P＞0.05）；本日糧條件下，瘤胃細菌數量和瘤胃細菌濃度間存在高度正相關關系，瘤胃微生物蛋白濃度和細菌濃度間的相關性很低。