若爾蓋縣牦牛輪狀病毒和冠狀病毒感染的血清學(xué)監(jiān)測(cè)

澤旺塔 ，俄么當(dāng)周 ，達(dá)瓦塔 ，俄周王么 ，尚吉措 ，岳華

（1.四川省若爾蓋縣農(nóng)業(yè)畜牧和水務(wù)局，四川 若爾蓋 624500；2.西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，四川 成都 610041）

腹瀉是導(dǎo)致犢牛生長(zhǎng)不良和死亡的常發(fā)病，牛輪狀病毒（BRV）和牛冠狀病毒（BCoV）是常見的腹瀉病原[1]，BRV和BCoV在我國(guó)牛群中的感染比較普遍，危害嚴(yán)重。若爾蓋縣位于青藏高原東部邊緣地帶，是全國(guó)最重要的草原牧區(qū)之一，也是亞洲最好的天然牧場(chǎng)之一[2]。牦牛養(yǎng)殖是若爾蓋縣畜牧業(yè)的支柱產(chǎn)業(yè)，但犢牛腹瀉一直是制約當(dāng)?shù)仃笈I(yè)健康發(fā)展的一大問題，本研究旨在了解當(dāng)前四川省若爾蓋縣牦牛群中BRV和BCoV的感染情況，為牦牛腹瀉的防控提供參考。

1 材料

1.1 樣本采集及處理 2017年8～10月從四川省若爾蓋縣達(dá)扎寺鎮(zhèn)（32份）、阿西鄉(xiāng)（35份）、麥溪鄉(xiāng)（29份）、降扎鄉(xiāng)（30份）、嫩洼鄉(xiāng)（35份）、占哇鄉(xiāng)（28份）、巴西鄉(xiāng)（29份）、紅星鄉(xiāng)（30份）、阿西茸鄉(xiāng)（28份）9個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)無(wú)菌采集牦牛（未接種過任何BRV、BCoV疫苗）血清樣本276份，4℃傾斜靜置過夜，5000r/min離心10min，分離血請(qǐng)，-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 主要試劑與儀器 BCoV、BRV間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒；ELX 800酶標(biāo)儀，各量程微量移液槍。

2 抗體檢測(cè)

采用間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒分別對(duì)276份牦牛血清進(jìn)行BRV和BCoV特異性抗體檢測(cè)，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。每次檢測(cè)分別設(shè)置2個(gè)陰性和2個(gè)陽(yáng)性對(duì)照，并計(jì)算陰性孔OD平均值NCXˉ和陽(yáng)性孔OD平均值PCXˉ。試驗(yàn)成立的判斷標(biāo)準(zhǔn)為（PCXˉ-NCXˉ）≥0.5 且 NCXˉ≤0.3，如果試驗(yàn)無(wú)效則應(yīng)重新檢測(cè)。樣本S/P=（OD樣品-NCXˉ）/（PCXˉ-NCXˉ）。當(dāng)S/P值≥0.4，則判為抗體陽(yáng)性；當(dāng)S/P值＜0.4，則判為抗體陰性。

3 結(jié)果及分析

3.1 BRV抗體檢測(cè)結(jié)果 9個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)共計(jì)276份牦牛血清樣本中，有274份呈BRV陽(yáng)性，平均陽(yáng)性率為99.28%（表1）。其中阿西茸鄉(xiāng)的陽(yáng)性率最低，為92.86%（26/28），其余8個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的陽(yáng)性率均為100%。表明若爾蓋縣9個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)牦牛BRV的感染率都高。

表1 9個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)BRV、BCoV檢測(cè)結(jié)果

3.2 BCoV抗體檢測(cè)結(jié)果 276份血清樣本中共檢測(cè)出270份BCoV陽(yáng)性血清，平均陽(yáng)性率為97.83%（表1）。達(dá)扎寺鎮(zhèn)、阿西鄉(xiāng)、麥溪鄉(xiāng)、巴西鄉(xiāng)、紅星鄉(xiāng)、阿西茸鄉(xiāng)的陽(yáng)性率均為100%；隆扎鄉(xiāng)最低，為86.67%（26/30）；其次是占哇鄉(xiāng)（96.43%）、嫩洼鄉(xiāng)（97.14%）。表明若爾蓋縣9個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)牦牛BCoV的感染率均較高。

3.3 BRV、BCoV混合感染情況 有268份血清同時(shí)檢出了BRV和BCoV特異性抗體，平均混合感染率為97.1%，其中隆扎鄉(xiāng)的混合感染率最低（86.67%）。

4 結(jié)論與分析

BRV引起的腹瀉常見于新生犢牛，以1～10日齡最為易感，在牦牛中傳播已有30余年[5]。周芳等[6]采用RT-PCR方法分別對(duì)來(lái)自西藏、青海、云南、四川的234份牦牛腹瀉樣本進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果得出陽(yáng)性率分別為60%、95%、90%、85.19%。李凡等[7]利用熒光定量RT-PCR方法檢測(cè)川西北14個(gè)牧場(chǎng)的腹瀉樣本，得出BRV陽(yáng)性率為98.86%，可見BRV在牦牛群中廣泛流行。

BCoV也是引起犢牛腹瀉的重要病原，還可引起成年牛冬痢和呼吸道疾病綜合征[8]，該病毒對(duì)牦牛同樣易感。1990年姚火春等[9]證實(shí)BCoV存在于牦牛群中。2015年石琴等[10]對(duì)天山牦牛群抽查時(shí)發(fā)現(xiàn)，冠狀病毒（BCoV）陽(yáng)性率達(dá)到100%。這些資料都表明BCoV在牦牛中的感染已經(jīng)很普遍。疫苗免疫是防控BRV和BCoV的有效手段，但國(guó)內(nèi)目前還沒有商品化的BRV和BCoV疫苗。因此，有必要加快研制BRV和BCoV疫苗，以有效防控犢牦牛腹瀉。

本研究結(jié)果表明，BRV、BCoV兩種病毒感染在若爾蓋縣的9個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)均存在，BRV陽(yáng)性率為92.86%～100%，BCoV陽(yáng)性率為86.67%～100%，混合感染率為86.67%～100%。由于本次試驗(yàn)所選牦牛均未免疫過任何疫苗，故特異性抗體陽(yáng)性可視為病原體自然感染產(chǎn)生。BRV和BCoV在若爾蓋縣感染嚴(yán)重，且混合感染現(xiàn)象突出，與何美琳等[3]的調(diào)查結(jié)果相似。BRV和BCoV混合感染，可加重病情，病牛死亡率高達(dá)50%～100%[4]。若爾蓋縣犢牦牛腹瀉危害嚴(yán)重，當(dāng)?shù)貞?yīng)盡快制定防控BRV和BCoV的有效措施。