高倍鏡視野下血涂片估測法在血小板計數檢測中的價值

趙 杰，趙春陽

（天津市第三中心醫院 天津市肝膽疾病研究所 天津市人工細胞重點實驗室衛生部人工細胞工程技術研究中心，天津 300170）

血小板（platelet，PLT）計數是衡量止血和凝血功能的重要指標，其檢測結果的準確性對化療患者和PLT輸注患者以及血液疾病的診療都有著十分重要的作用。雖然全自動血液分析儀操作簡單、快速、準確性高、重復性好，可彌補傳統顯微鏡手工計數法操作繁瑣、耗時等不足，但其在方法學方面存在一定的缺陷，不能完全排除干擾因素對檢測結果的影響。當PLT計數出現假性增高或降低的異常情況時，血涂片檢測和顯微鏡手工計數法復查就顯得十分重要。如果血涂片PLT分布均勻，且無異常聚集，血涂片檢測可作為PLT計數估測的有效方法[1]。本研究在高倍鏡視野下估測血涂片PLT計數，將估測結果與全自動血液分析儀檢測結果進行比較，評估血涂片估測法在PLT計數中的臨床價值。

1 材料和方法

1.1 研究對象

收集天津市第三中心醫院2016年12月—2017年4月血常規檢驗標本100份。根據血液分析儀PLT計數檢測結果，將標本分為：＜100×109/L組（30例）、（100～300）×109/L組（35例）、＞300×109/L組（35例）。

1.2 儀器與試劑

采用ADVIA 2120i全自動血液分析儀（德國Siemens公司）及配套試劑、校準品和質控品；CX-31型普通光學顯微鏡（日本Olympus公司）。

1.3 方法

1.3.1 儀器法 采用ADVIA 2120i全自動血液分析儀進行PLT計數。使用E-cal校準，每天進行3個水平E-check質控，均在控。所有標本均在采集后2 h內完成檢測。

1.3.2 血涂片估測法 取混勻后新鮮血液標本1滴，置于載玻片一端1 cm處或整片3/4處；左手持載玻片，右手持推片從血滴前方向后移、接觸血滴，使血滴沿推片邊緣展開。按血涂片推片與載玻片角度（30°、45°、60°），制備3張血涂片，分別編號為A、B、C，并進行瑞氏-吉姆薩染色。待血涂片干燥后，在每張血涂片體尾交界處紅細胞平均分布且細胞間無重疊區用顯微鏡油鏡（100×）計數10個視野，記錄每個視野的PLT計數，并計算其均值。

1.3.3 相關性分析 將儀器法與血涂片檢測結果進行線性回歸分析，計算Z值：Z=儀器法PLT計數/血涂片每高倍鏡視野下PLT計數均值。

1.3.4 驗證 每份標本都制備1張頭體尾分明、厚薄適宜、制片及染色良好的血涂片，分別對4個顯微鏡油鏡下視野的PLT進行計數，并計算得到血涂片估測值（×109/L），將血涂片估測值與儀器計數值進行比較。

1.4 統計學方法

采用Excel 2007軟件及SPSS 17.0軟件對數據進行統計分析。相關性分析采用線性回歸進行評估；驗證結果采用配對t檢驗進行分析。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 相關性分析

A組、B組、C組3組儀器法PLT計數與血涂片每高倍鏡視野下PLT計數均值呈高度相關（P＜0.001），Z值分別為10.00、10.07、9.98，取整數位10。見圖1。

圖1 儀器法PLT計數與血涂片每高倍鏡視野下PLT計數均值的相關曲線

2.2 驗證結果

經驗證，儀器法和血涂片估測法檢測結果具有較好的相關性（P=0.650）。見圖2。

3 討論

圖2 儀器法與血涂片估測法PLT計數的相關曲線

PLT在生理性止血和某些病理過程中發揮著重要的作用。對手術患者而言，當PLT計數 ＞50×109/L 且PLT功能正常時，手術過程中一般不會出現明顯出血；當PLT計數＜50×109/L時，可導致皮膚黏膜紫癜，患者術后可能會出現出血等現象；當PLT計數＜20×109/L時，可發生自發性出血，需預防性輸注PLT，患者不宜進行手術[2]。

電阻抗法和熒光化學染色法（光學法）是目前全自動血液分析儀常規檢測PLT的主要方法。然而，全自動血液分析儀無法對凝集體結構、PLT計數進行確認，這會使得儀器法PLT計數出現假性減少的現象[3]。冷球蛋白血癥患者血漿中存在冷球蛋白，這些小顆粒往往會被誤認為PLT，從而使PLT計數假性增加；另外，小紅細胞及巨大PLT也會影響PLT計數[4]。因此，當全自動血液分析儀PLT計數減少時，應考慮PLT假性減少的情況；當出現PLT相關儀器報警提示時，應進行血涂片檢測和顯微鏡手工計數法復查估測PLT計數。

血涂片檢測和顯微鏡手工計數法復查除了可以對PLT進行計數之外，還可在血涂片染色后觀察到PLT的形態、聚集性和分布情況。血涂片估算法可在一定程度上減少標本的復檢頻率，降低成本，減少標本周轉時間。本研究計算出的儀器法與血涂片估測法PLT計數Z值為10。相關性分析結果顯示，儀器法PLT計數與血涂片每高倍鏡視野下PLT計數均值呈高度相關（P＜0.001）。通過對100份標本進行反向驗證，得到血涂片估測值與儀器計數值差異無統計學意義（P=0.650）。

綜上所述，在血涂片PLT分布均勻，且無PLT異常聚集的情況下，可利用Z值估測PLT計數。高倍鏡視野下血涂片估測法估測PLT計數具有十分重要的意義，當出現非PLT聚集因素導致PLT計數假性增加或減少的現象時，可利用Z值估測PLT計數，同時應利用血涂片檢測和顯微鏡手工計數法進行復查。