宮頸癌患者外周血調節性B細胞數量及血清IL-10、TGF-β表達水平

孫 會 王丙娟 孫慧霞

(南陽醫學高等專科學校，河南 南陽 473061)

宮頸癌發病率呈不斷上升趨勢，且在我國女性惡性腫瘤中位居第2位〔1,2〕。目前，對于宮頸癌具體發病機制尚不十分明確。調節性B細胞參與機體的免疫耐受調節，且主要與腫瘤免疫逃逸關系緊密〔3,4〕。近年來研究表明，腫瘤的發生、發展與外周血調節性B細胞、白細胞介素(IL)-10及轉化生長因子(TGF)-β相關〔5,6〕。本研究旨在探討宮頸癌患者外周血調節性B細胞的數量及血清IL-10、TGF-β的表達水平。

1 資料與方法

1.1一般資料 選自南陽醫學高等專科學校附屬醫院2015年1月至2016年12月收治的宮頸癌患者83例，年齡24～75歲，平均(57.42±6.57)歲；鱗癌47例、腺癌36例；TNM分期：Ⅰ、Ⅱ期32例，Ⅲ、Ⅳ期51例。入組標準：(1)均為初治，且通過病理學或細胞學證實為宮頸癌；(2)經醫院倫理委員會審核，簽訂知情同意書。排除標準：(1)合并肺癌、乳腺癌、肝癌等其他惡性腫瘤者；(2)伴自身免疫性疾病；(3)精神疾病者；(4)合并肺、腎、肝等功能嚴重異常者。同期選擇我院健康志愿者59例對照組，均為女性，年齡24～75歲，平均(56.89±6.79)歲。兩組一般資料差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2主要試劑和儀器 IL-10試劑盒(上海依科賽生物制品有限公司)，TGF-β試劑盒(廣州蕊特生物科技有限公司)，CD5-FITC、CD1d-PE、CD19-Percp-Cy5.5單克隆抗體(美國BD公司)。美國BD公司FACSCalibur流式細胞儀。

1.3外周血B細胞亞群比例檢測 所有研究對象分別采集外周血2 ml。抗凝外周血淋巴細胞表面分子采用流式細胞多色熒光法標記，具體為CD5-FITC、CD1d-PE、CD19-Percp-Cy5.5標記外周血淋巴細胞，以BD FACS Diva軟件，CD19+設門識別B細胞，分析外周血B細胞各亞群比例，結果以其占CD19+B淋巴細胞百分比表示。

1.4血清IL-10、TGF-β檢測 所有研究對象分別采集外周血2 ml，以3 000 r/min，離心半徑15 cm離心10 min，分離血清，置于-20℃保存待測，采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測。

1.5觀察指標 觀察兩組CD19+CD5+/CD19+B和CD19+CD5+CD1d+/CD19+B比例；血清IL-10、TGF-β表達；宮頸癌不同分期CD19+CD5+/CD19+B和CD19+CD5+CD1d+/CD19+B比例及血清IL-10、TGF-β表達。

1.6統計學方法 應用SPSS16.0統計學軟件進行t檢驗。

2 結 果

2.1兩組CD19+CD5+/CD19+B和CD19+CD5+CD1d+/CD19+B比例及血清IL-10、TGF-β水平比較 宮頸癌組CD19+CD5+/CD19+B和CD19+CD5+CD1d+/CD19+B比例明顯高于對照組；血清IL-10、TGF-β表達顯著高于對照組(均P<0.05)，見表1。

2.2宮頸癌不同分期外周血B細胞亞群比例及血清IL-10、TGF-β水平比較 宮頸癌Ⅰ、Ⅱ期組CD19+CD5+/CD19+B和CD19+CD5+CD1d+/CD19+B比例顯著低于Ⅲ、Ⅳ期組(P<0.05)；血清IL-10、TGF-β表達顯著高于Ⅲ、Ⅳ期組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表1 兩組外周血B細胞亞群比例及血清IL-10、TGF-β水平比較

表2 宮頸癌不同分期外周血B細胞亞群比例及血清IL-10、TGF-β水平比較

3 討 論

宮頸癌是一種免疫原性腫瘤，主要與高危人乳頭狀瘤病毒亞型密切相關。近年來，調節性B細胞在腫瘤免疫耐受中越來越受重視〔7，8〕。調節性B細胞主要通過分泌IL-10、TGF-β等抑制性細胞因子，調控樹突細胞、調節性T細胞、自然殺傷(NK)細胞、細胞毒性T細胞及效應性T細胞等免疫活性細胞的功能，從而維持機體免疫功能〔9，10〕。現代醫學認為，在腫瘤、感染性疾病及自身免疫性等疾病中該免疫平衡通常有所失調〔11,12〕。近年來研究表明，除分泌抗體的致病性B細胞外，還存在分泌TGF-β和IL-10等細胞因子的調節性B細胞，分別稱為產生TGF-β1的Br3細胞或IL-10的Br1細胞〔13〕。其中IL-10具有免疫抑制作用，TGF-β具有直接抑制CD8+CTLs激活，明顯降低腫瘤免疫效果〔14，15〕。調節性B細胞通過分泌抑制性抗體或產生抑制性細胞因子影響其他免疫細胞功能，從而減輕炎癥。現代醫學認為調節性B細胞發揮腫瘤免疫逃逸可能調節機制主要涉及以下途徑：①調節性B細胞上的CD40與腫瘤細胞上的CD40L相互作用，從而抑制CD8+T細胞的生物學活性，誘導調節性B細胞分泌IL-10，下調CD8+T細胞和NK細胞分泌干擾素(IFN)-γ；②調節性B細胞大量分泌的TGF-β能夠誘導CD4+效應性T細胞轉化成調節性T細胞，從而促進腫瘤細胞的轉移和增殖。有研究報道，調節性B細胞免疫表型呈多樣性，而其中CD19+CD5+CD1d+的調節性B細胞最能代表B10的免疫表型，由于其表達標記均位于細胞膜，故而樣本處理簡單、快速，適用于臨床研究。本研究結果表明，宮頸癌患者CD19+CD5+CD1d+調節性B細胞增多，且隨著疾病進展而增高。此外，宮頸癌患者血清IL-10、TGF-β表達上升，且隨著疾病進展而增高。

綜上，外周血調節性B細胞及血清IL-10和TGF-β可能與宮頸癌進展相關。