流式細胞術(shù)在149例急性白血病免疫分型中的應(yīng)用

李銘杰

【摘 要】目的：分析急性白血病免疫分型中流式細胞術(shù)的應(yīng)用價值。方法：以149例急性白血病患者為研究對象，利用流式細胞術(shù)檢測其免疫表型，觀察檢測結(jié)果。結(jié)果：149例患者中，分型診斷率94.6%（141/149）；在AML患者中，CD13、CD33抗原呈現(xiàn)出多表達，且CD13>CD33；在ALL患者中，]抗原表達率由高到低依次為CD19、CD10、CD13、CD20；免疫分型與形態(tài)學分型比較，AML符合率90.6%，ALL符合率76.6%。結(jié)論：急性白血病免疫分型中，流式細胞術(shù)具有較為準確的診斷結(jié)果，可廣泛應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】流式細胞術(shù)；急性白血病；免疫分型

【中圖分類號】R69 【文獻標識碼】B 【文章編號】2095-6851（2018）09--02

臨床治療急性白血病患者時，化療方案的選擇、預(yù)后的判斷均需要依據(jù)其分型。通常，利用FAB分類法進行分型，但在確定急性淋巴細胞白血?。ˋLL）與急性非淋巴細胞白血?。ˋNLL）時，只有60%～80%的符合率，且預(yù)后預(yù)測及危險因素評估并無法進行[1]。近年來，臨床檢測急性白血病免疫分型時，越來越多的應(yīng)用流式細胞術(shù)，尤其是成熟的發(fā)展一系列細胞單克隆抗體標記技術(shù)后，流式細胞術(shù)成為一種較為可靠的分型方法。本研究以149例急性白血病患者為研究對象，利用流式細胞術(shù)檢測其免疫表型，檢測效果較為理想。

1 資料與方法

1.1 一般資料 以149例急性白血病患者為研究對象，收治時間2017年1月～2018年5月，均與急性白血病診斷標準相符合，患者如入院后經(jīng)相應(yīng)檢查及多科室會診確診，其中，男81例，女68例；年齡12～73歲，平均（48.3±6.4）歲。

1.2 方法

1.2.1 形態(tài)學檢查 化療前，采集3～5ml骨髓，肝素抗凝，骨髓涂片后利用瑞氏染色處理，之后計數(shù)分類200個細胞，同時實施一系列的細胞化學檢查，包含過氧化物歧化酶、糖原染色等，按照FAB分類法進行形態(tài)學分型。

1.2.2 免疫學檢查 分析方案采取CD45-PC5/FITC/PE四色標記方案。用三種熒光抗體同時標記細胞表面抗原檢測。各管不僅要標記CD45-PC5，同時，還要進行CD2-FITC/CD7-PE/34-APC、CD5-FITC/CD19-PE/CD20-APC、CD10-FITC/CD22-PE/CD38-APC、CD13-FITC/CD33-PE、CD15-FITC/CD117-PE/CD14-APC的標記，在CD45-PC5標記完細胞內(nèi)抗原后實施處理，處理試劑采用IntraPrep通透化試劑，CD79a-PE、CD3-FITC、MPO-FITC標記同時進行。完成標記后，溶血經(jīng)自動溶血儀進行，檢測利用流式細胞儀。異常細胞采用CD45/SSC設(shè)門定位，之后再進行樣本分析，陽性判定標準為陽性細胞超過20%，按照EGIL積分標準診斷免疫表型：①2分：cyCD3、、MPOcyCD79a陽性；②1分：CD2、CD20、CD10、CD5、CD33、CD19、CD13陽性；③0.5分：CD7、CD14陽性。至少2種系列積分2分以上時，可判斷為急性混合性白血病。

2 結(jié)果

2.1 CD45/SSC設(shè)門結(jié)果 在各種細胞中，具有最強的CD45抗原表達的為淋巴細胞，最弱表達的為成熟粒細胞，單核細胞表達僅次于淋巴細胞，原幼細胞表達居于單核細胞之后，紅細胞中無該抗原的表達；在細胞顆粒性方面，最強的為成熟粒細胞，單核細胞次之，原幼細胞表達強度居于第三位，接著是淋巴細胞，表達最弱的為紅細胞。

2.2 免疫分型結(jié)果 149例患者中，髓系白血?。ˋML）89例，占59.7%；ALL41例，占27.5%；混合型（MAL）8例，占5.4%；未分化型（AUL）3例，占2.0%；剩余8例系列積分不足2分，難以確定結(jié)果；總診斷率94.6%（141/149）。在89例AML患者中，CD13、CD33抗原呈現(xiàn)出多表達，且CD13>CD33；在41例ALL患者中，表達率較高的抗原為CD10、CD19、CD20、CD13，由高到低依次為CD19、CD10、CD13、CD2。

2.3 免疫分型與形態(tài)學分型符合情況 形態(tài)學分型結(jié)果顯示，AML患者96例，ALL患者47例。AML患者兩種分型符合率為90.6%（87/96）；ALL患者兩種分型的符合率為76.6%（36/47）。

3 討論

對于白血病，免疫學分型認識其細胞克隆特點及分化階段時，以分化抗原的表達為依據(jù)，將白血病劃分為不同的類型。近年來，臨床上廣泛的采用流式細胞儀確定急性白血病患者的免疫分型，此種儀器具有較高的敏感性、包含大量的信息，短時間內(nèi)就能夠定量分析大量的細胞，從而將細胞來源、生物學特性準確的反映出來，促進白血病診斷準確率的提高[2]。本研究定位異常細胞時，采用CD45/SSC設(shè)門法，該方法分析時參照多種參數(shù)，每種細胞的抗原表達強度各不相同，據(jù)此將具有較低分化程度的白血病細胞精確的區(qū)別于正常細胞，使白血病患者能夠盡早的接受治療。另外，本研究免疫分型結(jié)果顯示，不同型的白血病患者系列抗原陽性表達率存在明顯差別，在AML患者中，陽性表達率最高的為CD13，其次為CD33，前者不僅表達在髓系中，且成熟粒細胞中也存在，后者可標記髓前體細胞，且較高的表達于粒細胞和單核細胞內(nèi)，因而依據(jù)白血病細胞的來源是否是髓系能夠準確的劃分免疫分型。

綜上，急性白血病應(yīng)用流式細胞術(shù)開展免疫分型診斷時，能夠有效的補充傳統(tǒng)的形態(tài)學分型，特別是能夠?qū)⑻厥忸愋兔鞔_的診斷出來，有助于更為精確的分型，從而科學的選擇治療方案，并準確的判斷患者預(yù)后。

參考文獻

翟冬芝，田亞寧，白英英，等.急性髓細胞白血病形態(tài)學及免疫學分型相關(guān)研究[J].世界最新醫(yī)學信息文摘，2018（45）：27-29.

呂浩，黃宣，張智熊，等.試論多色流式細胞術(shù)在分析急性白血病患者免疫學表型中的應(yīng)用價值[J].當代醫(yī)藥論叢，2016，14（03）：37-38.