miRNA-124在上皮性卵巢癌組織中的表達及臨床意義

楊佩濃，虞義建，徐偉銘，張曉婷

(1.浙江省臺州醫院病理科，浙江 臺州 317000；2.臺州恩澤醫療中心(集團)恩澤醫院病理科，浙江 臺州 318050)

MicroRNA(miRNA)是內源性非編碼RNA分子，由18～22個核苷酸組成，轉錄后調節基因的表達[1]。卵巢癌是婦科常見的腫瘤，是腫瘤致女性死亡的重要原因之一。我國卵巢癌的發病率約為4.91/10萬，且有逐年上升的趨勢[2]。近年來，越來越多的研究表明，miRNA與卵巢癌的發病和發展密切相關[3-5]，miRNA-124是近年來研究較多的miRNA之一，其在肝癌、胃癌、大腸癌、口腔癌和宮頸癌中表達水平下降，發揮著類似抑癌基因的作用[6-8]。然而，miRNA-124在卵巢癌中的研究較少，本研究采用實時熒光定量逆轉錄-聚合酶鏈式反應(real-time reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)檢測上皮性卵巢癌組織中miRNA-124的表達水平，分析了其與臨床病理特征的相關性，探討了其在卵巢癌發生和發展中的作用，現將結果報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

2013年2月至2014年11月在浙江省臺州醫院行手術治療的卵巢癌患者85例，所有患者術前均未接受過放化療，術后經過病理檢查以明確診斷，排除因保存不當而導致RNA降解的標本。85例患者中，年齡35～71歲，平均(56.32±5.67)歲。按照國際婦產科聯盟 (International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO)的標準進行分期[9]，其中Ⅰ期11例，占12.94%；Ⅱ期23例，占27.06%；Ⅲ期44例，占51.76%；Ⅳ期7例，占8.23%。病例分級為G1期16例，占18.82%；G2期45例，占52.94%；G3期24例，占28.24%。另外，選取同期與卵巢癌患者年齡匹配的良性上皮卵巢腫瘤組織35例和正常卵巢組織45例作為對照，所有標準本均于液氮中保存。本研究已經過我院倫理委員會批準，患者均知情同意。

1.2 miRNA-124的定量檢測

采用trizol法提取癌組織中的總RNA，使用反轉錄試劑盒(新海基因有限公司，貨號：D1801)將RNA反轉錄為cDNA第一鏈，在以cDNA為模板，使用RT-PCR檢測試劑盒(上海信裕生物科技有限公司，貨號：131042-25)檢測miRNA-124的表達水平。miRNA-124上游引物序列為5′-GCTAAGGC￣ACGCGGTG-3′，下游引物序列為5′-GTGCA￣GGGTCCGAGGT-3′；內參照U6上游引物序列為5′-CTCGCTTCGGCAGCACATATACT-3′，下游引物序列為5′-ACGCTTCACGAATTTGC￣GTGTC-3′(引物由天根生化科技有限公司設計)。PCR反應條件：第1步，95℃ 30s；第2步，95℃5s、60℃20s，共40個循環。PCR擴增結束后，繪制熔解曲線，以2-ΔΔCt值表示miRNA-124的相對表達水平。

1.3隨訪

手術治療后對患者進行隨訪，隨訪時間至2017年11月6日。采取門診隨訪和電話隨訪相結合，觀察患者的總體生存率和中位生存時間。

1.4統計學方法

2結果

2.1 miRNA-124在卵巢癌、良性卵巢腫瘤和正常組織中的表達量差異

卵巢癌組織中miRNA-124相對表達量為2.35±1.11，良性卵巢腫瘤組織中的表達量為5.13±2.01，正常組織中為6.29±2.12。采用單因素方差分析發現，三組間的比較有明顯差異(F=8.371，P<0.001)。卵巢癌組織中miRNA-124相對表達量明顯低于良性卵巢腫瘤組織和正常組織(t值分別為7.123、11.650，均P<0.001)；良性卵巢腫瘤組織中miRNA-124相對表達量低于正常組織(t=2.499，P=0.007,見圖1。

注：*與正常組織組比較，P<0.05；#與良性卵巢組織組比較，P<0.05。

圖1 miRNA的相對表達量

Fig.1 Relative expression of miRNA

2.2 miRNA-124的相對表達量與臨床特征的關系

臨床分期和組織分級越高，miRNA的相對表達量越低(P<0.05)；有淋巴結轉移者，miRNA的相對表達量越低(P<0.05)；組織學類型與miRNA的相對表達量無關(P>0.05)，見表1。

2.3 miRNA的相對表達量與生存期的相關性

如圖2所示，高表達組的總生存率明顯高于低表達組，差異有統計學意義(χ2=7.824，P=0.008)。低表達組中位生存期為(7.91±1.52)個月，95%CI：3.21～10.73；高表達組中位生存時間為(14.53±6.74)個月，95%CI：11.0～28.4，高表達組中位生存時間明顯較低表達量組高，差異有統計學意義(t=6.053，P<0.001)。低表達組總生存時間為(28.67±5.01)個月，95%CI：2.45～9.24；高表達組總生存時間為(32.81±4.27)個月, 95%CI：2.01～6.69，高表達組總生存時間高于低表達組，差異有統計學意義(t=4.112，P<0.001)。

圖2生存曲線

Fig. 2 Survival curve

3討論

3.1 miRNA-124的生物學作用

miRNA在機體內發揮著重要的生物學功能[10]。近年來研究發現，miRNA在腫瘤的發生和發展中起到重要作用，并且對腫瘤的診斷和預后的判斷也有意義[11]。作為新型的分子標志物，miRNA可用于惡性腫瘤的早期診斷和預后預測，其具有廣闊的應用前景[12-14]。既往研究發現，miRNA-124是神經系統發育過程中必不可少的miRNA之一[15-17]，miRNA-124在多種腫瘤組織中的表達下降，并且對細胞的增值、分化、凋亡、遷移和侵襲起著重要作用[6-7,18]。舒錦等[19]發現卵巢癌組織中的miRNA-124表達量下降，在體外實驗中，卵巢癌 SKOV3 細胞中 miR-124 過表達可明顯抑制細胞的增殖、 遷移和侵襲并誘導細胞凋亡。

3.2 miRNA-124在上皮性卵巢癌組織中的表達及意義

miRNA可能為致癌基因，也可能是抑癌基因，可通過多個環節調控腫瘤的發生和發展，對腫瘤組織中miRNA表達量的檢測對疾病的早期診斷和治療有重要意義。本組研究中，臨床分期和組織分級越高，miRNA的相對表達量越低；有淋巴結轉移者，miRNA的相對表達量越低；組織學類型與miRNA的相對表達量無關。miRNA高表達組的總生存率明顯高于低表達組(P<0.05)，且高表達量組中位生存時間明顯較低表達量組高(P<0.05)。上述研究結果表明，miRNA-124的相對表達量與腫瘤的預后和轉歸有關。

綜上，本研究結果表明，上皮性卵巢癌組織中miRNA-124的相對表達量降低，提示其可能在卵巢癌的發病機制中起到抑癌基因的作用，另外，miRNA-124的表達量與卵巢癌的進展和轉歸有關。本研究的局限性在于樣本量較小，且為單中心研究，miRNA-124的具體生物學機制需要進一步研究。