洋桔梗葉盤組織培養技術研究

代勇 楊迪

洋桔梗，又名草原龍膽，為草原龍膽屬1～2年生草本植物，原產美國、墨西哥，因其花型優美，花色各異，深受世界人民的喜愛，用于生產栽培的洋桔梗種苗主要從日本等國進口，成本高，風險大，受制于人，進而影響了我國洋桔梗切花的大規模推廣種植。因此，我們開展了洋桔梗組培培養技術研究，旨在通過組培快繁技術，探尋洋桔梗的快速繁殖、規模化生產以及珍貴種質資源的保存的新途徑。

1 試驗材料

供試材料為洋桔梗品種“麗莎” ，由遼寧省農業科學院花卉研究所提供。

2 試驗方法

采集洋桔梗健康植株的葉片，將其置于燒杯中，按程序進行漂洗和消毒。將葉片橫切成2～3段，整理成5mm×5mm大小的葉盤后，接種于不定芽誘導培養基中（表1、表2）。誘導基本培養基以MS為基本培養基，附加細胞分裂素（BA、TDZ、2-ip），生長素（NAA），蔗糖30 g/L，瓊脂2.5g/L，培養基的pH值為5.8。每個處理組合接種葉盤30片，重復3次，培養條件為25℃，光照16h/d。40 d后統計誘導率，并觀察記錄幼苗的生長狀況

將葉盤上誘導產生的長約1.5～2cm的不定芽接種到生根培養基中，生根培養基以1/2MS為基本培養基，附加不同生長素（見表3），40 d后統計生根率。

選取健壯的生根植株和玻璃化植株各30株，洗凈根部瓊脂，然后將其移栽到裝有花卉專用營養土的缽中，覆蓋透明薄膜，于幼苗室培養5d后，逐步去掉薄膜，10 d后移到溫室中，15d后統計存活率。

3 結果與分析

3.1 不同激素配比對洋桔梗葉盤不定芽誘導的影響

將大小約為5mm×5mm的洋桔梗葉盤接種到不定芽誘導培養基中，約10 d左右，多數處理葉盤的切口邊沿出現淡黃綠色的愈傷組織，20 d左右，有綠色芽點出現，25d芽點長成不定芽，但也有葉盤切口形成的愈傷組織只是體積增大，并未產生芽點，或是沒有形成愈傷組織。

通過實驗表明，隨著BA濃度的增加，不定芽的誘導數也隨之增加，但當BA濃度為1mg/l時，植株出現嚴重玻璃化現象，故不定芽的誘導率也相對下降，且植株矮小，生長狀態較差；隨著NAA濃度的增加，不定芽的誘導數量也隨之增加，但當NAA濃度超過0.05mg/l時，不定芽的誘導數量開始下降；當BA為0.5mg/l，NAA為0.05mg/l時，不定芽的誘導數量達到最大，每葉盤產生的平均不定芽數為17.25，且植株長勢良好。

實驗表明，BA，TDZ和2-ip對不定芽的誘導作用依次增強，而且隨著細胞分裂素濃度的增加，除了2-ip外，每葉盤能產生的不定芽數也隨之增多。當2-ip濃度為0.5mg/l時，每葉盤產生的不定芽數最多，為2.9。

3.2 不同生長素對植株生根的影響

通過實驗表明，NAA和IBA都具有促進植物生根的作用，但NAA較IBA更利于愈傷組織的產生。在含有NAA的1/2MS培養基中，幼苗先在基部形成淡黃綠色的愈傷組織，后從愈傷組織上長出不定根，當NAA濃度為0.1mg/L時，根的誘導率為76%，平均根數為3.3條，平均根長為1.8cm，隨著NAA濃度的增加，形成的愈傷組織就越多，從愈傷組織上產生的不定根也就越多，而且細小，根系也有玻璃化現象產生，不定根很容易隨愈傷組織一起從莖基部脫落，故根的生長狀況未統計。

在含有IBA的生根培養基中，根系主要是從莖基部產生，并且隨著IBA濃度的增加，根的數量及根長度也先增加后降低。當IBA濃度為0.1mg/L時，根的誘導率為82%，平均根數為3.1條，平均根長為1.9cm；當IBA濃度為0.5mg/L時，根的誘導率為94%，平均根數為4.6條，平均根長為2.8cm；當IBA濃度為1.0 mg/L時，根的誘導率為88%，平均根數為3.6條，平均根長為2.2cm。因此，洋桔梗植株最佳生根培養基為1/2MS+IBA0.5mg/l

綜上所述，根據實驗可知，我們對在含有不同激素配比的培養基中，洋桔梗葉盤不定芽的誘導分化進行了研究，結果發現，隨著BA濃度的增加，不定芽的誘導數目也隨之增加，但過高的BA濃度，如本試驗中當BA濃度為1mg/l時，植株會出現嚴重的玻璃化現象，植株的生長狀態也較差。隨著NAA濃度的增加，不定芽的誘導數量也隨之增加，但當NAA濃度超過0.05mg/l時，不定芽的誘導數量開始下降，這表明：BA/NAA的比例對不定芽的誘導至關重要，決定不定芽產生的數目和狀態。其它研究認為，NAA是一種作用性極強的生長素，低濃度的NAA有利于根的形成，過高濃度更利于愈傷組織的誘導，本試驗亦證明了這一結論。

在只含有細胞分裂素（BA，TDZ和2-ip）的培養基中，無論是愈傷組織量，還是不定芽誘導的數目，均少于在含有細胞分裂素和生長素兩種激素的培養基中兩者的數量，這表明：細胞分裂素和生長素兩者的結合使用，對愈傷組織及不定芽的誘導具有重要作用；單獨使用細胞分裂素，不利于愈傷組織和不定芽的誘導。此外，由于BA，TDZ和2-ip三種細胞分裂素的活性依次增強，其產生的不定芽的數量也隨之增多。

（作者單位：1.113006遼寧省撫順市農業技術推廣中心；2.150040東北林業大學）