肺炎鏈球菌對大環內酯類抗生素耐藥機制研究

張倩 龐立強 畢曉琴

【摘要】目的 分析肺炎鏈球菌對大環內酯類抗生素的耐藥機制。方法 從我院收治的呼吸道感染患者的鼻咽部分分離出紅霉素耐藥鏈球菌176株進行研究，分別用K-B紙片擴散法和E試驗檢測其對于抗菌藥物的敏感度，然后用雙紙片法測定耐藥表型，最后用PCR技術擴增菌株耐藥基因和轉座子整合酶基因。

結果 通過對176株紅霉素耐藥鏈球菌進行檢測，結果顯示ermB耐藥基因的檢出率為90.91%，mefE耐藥基因的檢出率為37.50%，mefA耐藥基因的檢出率為0%，96.59%的紅霉素耐藥菌株中存在intTn轉座子整合酶。mefE（-）ermB（+）和mefE（+）ermB（+）的耐藥基因組合占比為91.48%，耐藥表型為cMLSB，mefE（+）ermB（-）的耐藥基因組合占比為8.52%，耐藥表型為M型。結論 我院分離的紅霉素耐藥鏈球菌中，耐藥性以ermB介導的cMLSB表型最為顯著，轉座子可能與耐藥基因水平轉移有關。

【關鍵詞】肺炎鏈球菌；大環內酯類抗生素；耐藥機制

【中圖分類號】R446.5 【文獻標識碼】B 【文章編號】ISSN.2095-6681.2018.28..01

肺炎鏈球菌是導致中耳炎、菌血癥、腦膜炎、兒童呼吸道感染的主要病原菌，隨著大環內酯類抗生素的使用，越來越多的肺炎鏈球菌產生了耐藥性，根據研究顯示，肺炎鏈球菌耐藥機制的主要基因是mef基因與ermB基因，且主要位于接合性轉座子[1]。為了更好的研究肺炎鏈球菌對大環內酯類抗生素的耐藥機制，本文特分離出了176例紅霉素耐藥菌株進行研究，現將主要結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

從我院收治的呼吸道感染患者的鼻咽部分分離出紅霉素耐藥鏈球菌176株進行研究，均經Omin血清和optochin紙片鑒定。

1.2 方法

首先，對分離出的176株紅霉素耐藥鏈球菌用K-B紙片擴散法和E試驗進行檢測，以測定其對于抗菌藥物的敏感度。其中，氧氟沙星、克林霉素、復方磺胺甲噁唑、四環素、氯霉素、苯唑西林等采用K-B紙片擴散法，頭孢曲松、頭孢呋辛、頭孢克洛、紅霉素、阿莫西林-克拉維酸、青霉素等采用E試驗檢測，結果按抗生素敏感試驗標準進行判斷。

耐藥表型的測定采用克林霉素、紅霉素雙紙片法進行測定，若兩個紙片上均未出現抑菌圈，則表示組成耐藥組合，紅霉素耐藥，克林霉素有缺損表示cMLSB型耐藥表型，紅霉素耐藥，克林霉素敏感表示M型耐藥表型。

耐藥基因的檢測方法為：先進行染色體DNA提取，然后進行PCR技術擴增，最后在94℃的條件下進行擴增反應。

2 結 果

通過對176株紅霉素耐藥鏈球菌進行檢測，結果顯示ermB耐藥基因的檢出率為90.91%，mefE耐藥基因的檢出率為37.50%，mefA耐藥基因的檢出率為0%，96.59%的紅霉素耐藥菌株中存在intTn轉座子整合酶。mefE（-）ermB（+）和mefE（+）ermB（+）的耐藥基因組合占比為91.48%，耐藥表型為cMLSB，mefE（+）ermB（-）的耐藥基因組合占比為8.52%，耐藥表型為M型。

3 討 論

導致兒童發生獲得性肺炎的主要病原體是肺炎鏈球菌，近幾年來，隨著抗生素的使用，越來越多菌體產生了耐性性，這對疾病的治療產生了非常大的阻礙。肺炎鏈球菌對大環內酯類抗生素的耐藥機制主要為核糖蛋白L4、L22變異，23SrRNA變異、主動外排機制顯著增強，核糖體靶位點改變等等[4]。MLSB耐藥表型的產生主要是由于ermB耐藥基因編碼核糖體的23SrRNA甲基化酶，也就是鏈陽菌素B、林克酰胺類、大環內酯類產生交叉耐藥，由于ermB耐藥基因的上游序列編碼是不同的，又可以將MLSB耐藥表型分為組成型和耐藥型，誘導型對克林霉素非常敏感，當大環內酯類抗生素存在時可以被激活，從而對外表現出對克林霉素的耐藥性。mef編碼的主動排外系統可以誘導M型耐藥表型，也就是說對于14元環、15元環內的大環內酯產生低水平耐藥，對16元環的鏈陽菌素B、克林霉素、大環內酯類比較敏感。除此之外，紅霉素耐藥菌株的耐藥基因和耐藥表型隨地區的不同而有所差異[3]。

在本次研究中，通過從呼吸道感染患者鼻咽部分分離出的176株紅霉素耐藥鏈球菌進行研究，發現耐藥性以ermB介導的cMLSB表型最為顯著，轉座子可能與耐藥基因水平轉移有關，這與張泓，吳文娟，李萬華的研究一致，進一步說明肺炎鏈球菌對大環內酯類抗生素的耐藥機制與核糖蛋白L4、L22變異，23SrRNA變異、主動外排機制顯著增強，核糖體靶位點改變有關。

參考文獻

[1] 吳文娟，張 泓，蔣燕群，等.肺炎鏈球菌對大環內酯類抗生素耐藥及傳播機制研究[J].中國感染與化療雜志，2006，（2）：85-88.

[2] 張 泓，吳文娟，李萬華，等.肺炎鏈球菌對大環內酯類抗生素耐藥機制研究[J].中國感染與化療雜志，2008，（1）：15-19.

[3] 康 悅，吳菊芳.肺炎鏈球菌對大環內酯類抗生素的耐藥狀況及耐藥機制研究進展[J].中國感染與化療雜志，2009，（6）：474-477.

[4] 宋 琳，瞿介明，何禮賢，等.肺炎鏈球菌對大環內酯類抗生素耐藥情況及耐藥基因研究[J].中國感染與化療雜志，2006，（2）：127-129.

本文編輯：劉欣悅