肝細胞癌中磷脂酶CE1和血管內(nèi)皮生長因子的表達

于 敏 林哲洙 張 紅 (錦州醫(yī)科大學附屬第三醫(yī)院普外三科，遼寧 錦州 121001)

肝細胞癌是起源于肝細胞的惡性上皮性腫瘤，病變形成過程中細胞可發(fā)生一系列異型增生的特征〔1〕。磷脂酶Cε(PLCE)1是PLC基因編碼的蛋白，也是磷脂酰肌醇信號通路中有明顯作用的關鍵酶〔2〕。近年研究顯示PLCE1能被各種G蛋白水解，使細胞內(nèi)儲存的鈣離子釋放，并對一些基因的表達有一定影響，并協(xié)同調(diào)節(jié)腫瘤細胞的生長和遷移的進程〔3〕。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)在腫瘤中表達升高，其具有癌基因的作用，同時對腫瘤間質(zhì)的血管生成有一定的促進作用〔4〕。本文關注肝細胞癌中PLCE1和VEGF表達，分析其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2015年1月至2016年12月錦州醫(yī)科大學附屬第三醫(yī)院確診并行手術(shù)治療的肝細胞癌患者59例為觀察組，均經(jīng)病理學確診，并符合WHO中的診斷標準及分型。其中男31例，女28例，年齡46～79歲，平均(61.9±9.9)歲。患者術(shù)前均未行放、化療。選取距腫瘤邊緣＞3 cm的正常肝組織27例為對照組，其中男14例，女13例，年齡47～76歲，平均(60.4±8.6)歲。兩組在性別、年齡等常規(guī)因素的比較中無明顯差異，具有可比性。

1.2 免疫組化檢測PLCE1和VEGF的表達 兩組術(shù)后標本均應用中性甲醛溶液固定、脫水、石蠟包埋。PLCE1和VEGF兩種試劑均為濃縮液，按不同配比濃度進行稀釋，選擇最理想的濃度進行實驗。切取4 μm切片后應用免疫組化SP法檢測PLCE1和VEGF的表達、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)染色，按實驗說明書進行操作，做好質(zhì)控工作。

1.3 PLCE1和VEGF判讀 PLCE1和VEGF均定位于細胞質(zhì)中，以細胞質(zhì)中有不同程度的棕黃和棕褐色為陽性表達。結(jié)果以陽性著色強度和陽性細胞百分比評分之和來評定。著色強度評分:無著色為0分;弱著色為1分，中等程度著色為2分，強著色為3分。選擇5個高倍視野進行陽性細胞計數(shù)，取其平均值;陽性細胞百分比，以＜5%為0分，以5%～10%為1分，以11%～25%為2分，以26%～50%為3分，以＞50%為4分。兩項之和為最終評定結(jié)果。取兩項評分之和的值作為最終評分結(jié)果。≤3分為陰性，以＞3分為陽性。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用SAS6.12統(tǒng)計軟件進行χ2檢驗、線性相關分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組中PLCE1和VEGF蛋白的表達 兩組中PLCE1和VEGF表達陽性率差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。見表1。

2.2 PLCE1和VEGF在觀察組不同臨床特征中表達陽性率的比較 觀察組中PLCE1和VEGF的表達與腫瘤最大徑、增殖指數(shù)密切相關，PLCE1的表達與腫瘤的分化程度相關。二者均與神經(jīng)侵犯無明顯相關性。見表2。

2.3 觀察組中PLCE1和VEGF表達的相關性PLCE1和VEGF的表達無明顯相關性(P=0.143 2)。

表1 兩組PLCE1和VEGF蛋白的陽性表達〔n(%)〕

表2 PLCE1和VEGF在觀察組不同臨床特征中表達陽性率的比較〔n(%)〕

3 討論

肝細胞癌最常見的病因包括病毒因素、飲食因素及酗酒等。乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)的慢性感染是病變的最主要的病因。在上述因素的持續(xù)作用下，肝細胞發(fā)生異型增生，癌變，進而形成肝細胞癌。病變可以形成大小不等的結(jié)節(jié)，內(nèi)有匯管區(qū)和輸出靜脈，結(jié)節(jié)被寬而不規(guī)則的結(jié)締組織和瘢痕所分隔〔5〕。這些結(jié)節(jié)均由類似肝細胞的腫瘤細胞組成，間質(zhì)由襯覆單層內(nèi)皮細胞的血竇樣腔隙所組成，形成“毛細血管化”的特征。因此間質(zhì)的血管內(nèi)皮生成對腫瘤的形成和進展有明顯的促進作用〔6〕。PLCE1能通過催化多磷酸肌醇如磷脂酰肌醇4，5-二磷酸鹽水解，產(chǎn)生第二信使三磷酰肌醇和二酯酰甘油，促進鈣離子的釋放，引發(fā)蛋白激酶(PK)C過表達，并結(jié)合更多的PKC同工酶的目標蛋白〔7，8〕，參與細胞信號的傳導，調(diào)控基因表達，進而調(diào)節(jié)細胞的生長、分化、細胞凋亡及血管新生〔9，10〕。VEGF是血管生成的促進因子，可以促進內(nèi)皮細胞的繁殖和生長，同時對枝芽狀血管管腔形成有一定的促進作用〔11，12〕。VEGF是癌基因的一種，腫瘤細胞可以高度分泌，其表達上調(diào)后引發(fā)腫瘤間質(zhì)的血管生成，在作用過程中通過其受體VEGF受體2發(fā)揮作用，并能有效促進CD31、CD34等陽性血管內(nèi)皮生成〔13，14〕。

本研究結(jié)果提示PLCE1和VEGF二者高表達對肝細胞癌的發(fā)生有重要作用，PLCE1和VEGF在病變過程中可能具有促進上皮細胞異型增生和惡性轉(zhuǎn)化的作用。PLCE1和VEGF二者高表達可以促進腫瘤的生長及Ki67陽性的細胞增生，使細胞數(shù)量明顯增加，失控性增生明顯，細胞體積增大，腫瘤的侵襲能力升高，惡性潛能增加。Cheng等〔15〕在膀胱腫瘤中發(fā)現(xiàn)敲除細胞的PLCE1基因可以抑制腫瘤的增殖能力，降低增殖細胞核心抗原的表達水平和CylclinD1表達，并通過抑制PLCE/PKC通路來減少癌基因C-jun的表達，進而抑制細胞的增生和繁殖。本文結(jié)果提示PLCE1升高時可以調(diào)節(jié)細胞的分化進程。分化是細胞在發(fā)育過程中的一系列表現(xiàn)，也是細胞生長過程中不同時期細胞形態(tài)的反映，PLCE1表達升高可以使細胞停滯于幼稚階段，腫瘤細胞趨于原始，腫瘤細胞異型性明顯，核的染色深。本文結(jié)果提示PLCE1和VEGF不是促進腫瘤嗜神經(jīng)生長的因子。PLCE1和VEGF均有促進血管生成的作用，但是二者調(diào)節(jié)血管生成的機制可能完全不同，也不在同一通路上。PLCE1對血管的調(diào)控可能是間接的，與機體中其他蛋白協(xié)同作用后，進而促進內(nèi)皮細胞增殖。而VEGF對腫瘤血管生成的調(diào)節(jié)是直接的，通過分泌作用，直接促進內(nèi)皮細胞生長〔16，17〕。