黃連聯(lián)合葛根用藥對大鼠的降血糖作用

陳丹丹 孫 琛 衛(wèi)培峰

(陜西中醫(yī)藥大學(xué)，咸陽，712046)

現(xiàn)今，糖尿病已經(jīng)成為世界性疾病，是除了癌癥及心腦血管疾病以外危害人類的第3大疾病。近年糖尿病的發(fā)病率逐年攀升并且越來越年輕化，在我國糖尿病患病率已上升至11.6%，有近5億人有早期糖尿病[1]。糖尿病在中醫(yī)中屬于“消渴”范疇，《黃帝內(nèi)經(jīng)》中早已提出消渴概念，如《素問·奇病論》曰：“此人必數(shù)食甘美而多肥也，肥者令人內(nèi)熱，甘者令人中滿，故其氣上溢，轉(zhuǎn)為消渴”。《黃帝內(nèi)經(jīng)》中記載的“消癉、肺消、膈消、消中”等，指消渴病的病機主要是肺燥、胃熱、腎虛，3者往往同時存在[2]。研究表明，葛根芩連湯有降血糖作用，其主要有效成分為“葛根-黃連”藥対[3-5]。葛根為豆科植物野葛Puerarialobata(Willd.)Ohwi或甘葛藤PuerariathomsoniiBenth.的干燥根，藥性為甘、辛，涼。歸脾、胃、肺經(jīng)。功效解肌退熱，生津止渴，透疹，升陽止瀉，通經(jīng)活絡(luò)，解酒毒。研究表明葛根的水煎劑可以明顯降低高血糖小鼠的血糖，并且抑制血糖的升高[6-7]。黃連為毛茛科植物黃連CoptischinensisFranch.、三角葉黃連CoptisdeltoideaC.Y.ChengetHsiao.或云連Coptisteetawall.的干燥根莖，藥性苦寒，功效清熱燥濕，瀉火解毒。現(xiàn)代研究表明，黃連可以降低糖尿病小鼠的血糖，其主要有效成分為其中的生物堿類[8]。目前黃連-葛根藥對在臨床上較多用于治療高血糖及糖尿病及其并發(fā)癥[9-11]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 SD大鼠，雄性體重180～200 g。由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，許可證號：SCXK(陜)2012-003。大鼠飼養(yǎng)于SPF動物實驗室，溫度(20±5)℃，濕度(55±5)%。

1.1.2 藥物 二甲雙胍(石家莊市華新藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字H20060164)。黃連與葛根購自陜西省藥材市場，經(jīng)鑒定為黃連和葛根。黃連與葛根水提液，本實驗室自制，制備方法為用蒸餾水煎煮藥材，得到水提液后濃縮成浸膏，再冷凍干燥為粉末，獲得率約為26%，劑量為2.5 g/d。

1.1.3 試劑與儀器 鏈脲佐菌素(STZ)(Sigma公司)；超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒(南京建成生物科技有限公司，生產(chǎn)批號：20160115)；谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)試劑盒(南京建成生物科技有限公司，生產(chǎn)批號：20160109)；過氧化氫酶(CAT)試劑盒(南京建成生物科技有限公司，生產(chǎn)批號：20160118)；丙二醛(MDA)試劑盒(南京建成生物科技有限公司，生產(chǎn)批號：20160113)；葡萄糖(成都蓉藥集團四川長威制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H51020441)。電子天平(賽多利斯，Practum-5101-1CN)；離心機(上海雅程儀器設(shè)備有限公司，TGL-20B)；血糖儀(三諾生物傳感股份有限公司)；血糖試紙(三諾生物傳感股份有限公司)，安準(zhǔn)血糖試紙。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 SD大鼠60只，體重180～200 g，在正常條件下喂養(yǎng)7 d，根據(jù)體重隨機分成6組(空白對照組與5組造模組)，每組10只。其中空白對照組喂養(yǎng)普通飼料，其余各組除喂養(yǎng)飼料外每天喂養(yǎng)葡萄糖水(30 g/kg)。造模組第1、7、17天腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)溶液30 mg/kg(在冰浴中用0.1 mol/mL檸檬酸-枸櫞酸鈉緩沖液配置)，空白對照組腹腔注射生理鹽水30 mg/kg。21 d后檢測空腹血糖，血糖值大于11.1 mmol/L為造模成功。取造模成功的大鼠，根據(jù)血糖值用隨機區(qū)組法分成5組每組10只，分別為模型組、二甲雙胍組、黃連-葛根大劑量組、黃連-葛根中劑量組、黃連-葛根小劑量組。空白對照組10只。

1.2.2 給藥方法 給藥期間各組大鼠喂以水和普通飼料，各組分別灌胃給藥劑量如下：二甲雙胍灌胃給藥(0.3 g/kg)，黃連-葛根大、中、小劑量組(0.2 g/kg、0.4 g/kg、0.8 g/kg)。空白對照組和模型組給予同樣劑量的生理鹽水。連續(xù)灌胃給藥27 d，每次灌胃給藥的體積以每100 g給予1 mL計算。

1.2.3 檢測指標(biāo)與方法 各組大鼠分別于給藥后7 d、17 d、27 d尾靜脈取血測定大鼠的空腹血糖并記錄實驗結(jié)果。實驗期間每天記錄大鼠體重。于灌胃給藥的第28天，禁食不禁水，并于第29天早上用3%的戊巴比妥鈉(45 mg/kg)麻醉大鼠，主動脈取血，靜置，用離心機離心(3 000 r/min)10 min，迅速分離血清，將血清置于冰箱(海爾，BCD-206LST)中貯存，分別測量其SOD、GSH-Px、CAT、MDA指標(biāo)。

2 結(jié)果

2.1 6組大鼠空腹血糖比較 各給藥組血糖和空白對照組比較發(fā)現(xiàn)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)說明造模成功。黃連-葛根大、中、小劑量組給藥后7、17、27 d均能顯著降低高血糖大鼠的空腹血糖(P<0.05)。二甲雙胍組在給藥后7、17、27 d和模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.2 對大鼠胰島素敏感指數(shù)(INS)的影響 胰島素敏感指數(shù)(INS)=In[1/(胰島素×空腹血糖)]。各給藥組與模型組比較，大鼠血清胰島素水平明顯下降，胰島素敏感指數(shù)明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

2.3 黃連-葛根聯(lián)合用藥對大鼠CAT、SOD、GSH-Px、MDA的影響 模型組的CAT、SOD、GSH-Px水平與空白對照組比較明顯降低(P<0.05)，MDA水平與空白對照組比較有顯著性升高(P<0.05)，說明造模成功。黃連-葛根大、中、小劑量組合和模型組比較均可顯著升高CAT、SOD、GSH-Px水平(P<0.05)，顯著降低MDA水平(P<0.05)；二甲雙胍組與模型組比較CAT、SOD、GSH-Px水平顯著升高(P<0.05)，MDA水平顯著降低(P<0.05)。見表3。

表1 黃連-葛根對高血糖大鼠空腹血糖的影響

注:與空白對照組比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05

表2 血清胰島素及胰島素敏感指數(shù)比較

注:與空白對照組比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05

表3 黃連-葛根對大鼠CAT、SOD、GSH-Px、MDA的影響

注:與模型組比較，*P<0.05；與空白對照組比較，△P<0.05

3 討論

黃連-葛根為古籍記載經(jīng)典藥對，自古在民間就用其治療消渴癥，關(guān)于黃連聯(lián)合葛根用藥的配比，在之前的研究中主要以《傷寒論》中的經(jīng)典名方葛根芩連湯為基礎(chǔ)，并運用基線等比法最終確定黃連-葛根的最佳配比為8∶3。

黃連-葛根具有較好的降血糖作用，其中黃連具有清熱燥濕、瀉火解毒的作用，其黃連水煎液、小檗堿均能抗糖尿病。葛根具有解肌退熱，生津止渴，透疹，升陽止瀉，通經(jīng)活絡(luò)，解酒毒的作用，葛根具有降血糖、降血脂、抗氧化作用。黃連-葛根聯(lián)用能夠增強其降血糖作用，具有很高的研究價值。

現(xiàn)代研究表明，造成2型糖尿病的因素有：缺乏鍛煉、攝入高熱量食品、肥胖、年齡增長等[12]。本實驗采用除喂養(yǎng)正常飼料外每天灌服高濃度葡萄糖水，并于實驗第1、7、17天腹腔注射鏈脲佐菌素，喂養(yǎng)21 d后測定空腹血糖值，發(fā)現(xiàn)大鼠空腹血糖值明顯上升,說明造模成功。模型大鼠表現(xiàn)為多飲、多食、多尿、情緒焦噪且皮毛不光滑等，明顯的高血糖癥狀。實驗結(jié)果表明黃連-葛根聯(lián)合用藥能夠明顯降低高血糖大鼠的血糖值并提高胰島素敏感指數(shù)，可顯著升高CAT、SOD、GSH-Px水平，降低MDA水平。說明降血糖作用可能與氧化應(yīng)激有所關(guān)聯(lián)，為今后進一步研究奠定了基礎(chǔ)。