PCNA和CyclinD1在腮腺惡性多形性腺瘤組織中的表達(dá)和臨床意義

蔣尚飛，劉洪，顏成東，董海島

江蘇醫(yī)藥職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇鹽城 224000

腮腺混合瘤又稱多形性腺瘤，含有腮腺組織、黏液和軟骨樣組織等多種組織。腮腺混合瘤為口腔頜面部最常見(jiàn)的腫瘤之一，好發(fā)于年輕人，起其組織來(lái)源于腮腺上皮，腫瘤內(nèi)除上皮成分外，還常有黏液、軟骨樣組織等[1-2]。一般無(wú)明顯自覺(jué)癥狀，生長(zhǎng)緩慢，病程可達(dá)數(shù)年甚至數(shù)十年之久。目前認(rèn)為多數(shù)多形性腺瘤為良性腫瘤，但是研究發(fā)現(xiàn)，多形性腺瘤的包膜不完整，手術(shù)切除后容易復(fù)發(fā)，因此，臨床上更加傾向于把多形性腺瘤作為一種臨界瘤[3-4]。關(guān)于多形性腺瘤的發(fā)病原因目前尚不清楚，目前的研究認(rèn)為多種細(xì)胞因子如β-連環(huán)蛋白（β-catenin）[5]、p53[6]在多形性腺瘤以及惡性多形性腺瘤的表達(dá)水平出現(xiàn)了異常。該次研究使用免疫組織化學(xué)染色的方法對(duì)從2016年1月—2017年12月在鹽城市第一人民醫(yī)院病理科37例正常腮腺組織、37例多形性腺瘤組織和59例惡性多形性腺瘤組織檢測(cè)增殖細(xì)胞核抗原 （Proliferating Cell Nuclear Antigen，PCNA）以及細(xì)胞周期蛋白 D1（Cyclin D1）的表達(dá)水平，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集鹽城市第一人民醫(yī)院口腔科收治的腮腺腫瘤患者96例，96例患者中男性患者49例，女性患者47例，年齡31～78歲。上述患者中最終確診為腮腺多形性腺瘤37例，惡性多形性腺瘤59例，所有患者診斷經(jīng)過(guò)病理診斷最終確認(rèn)，并且在37例多形性腺瘤患者并選取腺瘤旁正常組織作為對(duì)照，上述腮腺組織根據(jù)組織學(xué)類型分為正常腮腺組、腮腺多形性腺瘤組和惡性多形性腺瘤組3個(gè)組別。所有患者術(shù)前均未進(jìn)行任何抗腫瘤治療。該研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)通過(guò)，患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 免疫組織化學(xué)染色

所用病理標(biāo)本均經(jīng)過(guò)4%多聚甲醛固定24 h后，梯度酒精脫水，石蠟包埋，使用石蠟切片機(jī)切片，片厚5 m，梯度酒精脫蠟后，使用微波進(jìn)行抗原修復(fù)，一抗采用鼠抗人PCNA單克隆抗體和鼠抗人Cyclin D1單克隆抗體（均為美國(guó)Santa Cruz公司生產(chǎn)）孵育過(guò)夜，清洗后二抗采用兔抗鼠IgG二抗（美國(guó)Santa Cruz公司生產(chǎn)）孵育30 min，清洗后使用 Elite-ABC（英國(guó)Vector公司生產(chǎn)）孵育30 min，清洗后加DAB溶液（中杉金橋公司生產(chǎn)）室溫避光孵育5 min，蘇木素復(fù)染20 sec，常規(guī)脫水透明，中性樹(shù)膠封片，光學(xué)顯微鏡下觀察攝片，計(jì)算陽(yáng)性面積比例。

1.3 免疫組織化學(xué)結(jié)果判定

每張切片隨機(jī)選擇10個(gè)高倍鏡視野，每視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞。光鏡下觀察Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)定位于胞核，PCNA表達(dá)定位于胞質(zhì)或胞核。分為4級(jí)(-):腫瘤或腺上皮細(xì)胞無(wú)棕黃色陽(yáng)性染色。(+):陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜25%。(+++):陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＞50%。(++):陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在 25%～50%之間。 把(+)、(++)、(+++)均視作陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

所有統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)輸入SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，分別進(jìn)行確切概率法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，相關(guān)性分析采用Spearman分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PCNA與Cyclin D1在腮腺不同組織學(xué)類型中陽(yáng)性表達(dá)比較

正常腮腺組中，PCNA的陽(yáng)性表達(dá)率為10.81%，多形性腺瘤組中，PCNA的陽(yáng)性表達(dá)率為45.95%，惡性多形性腺瘤組中，PCNA的陽(yáng)性率為83.05%。PCNA在正常腮腺組中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于多形性腺瘤組和惡性多形性腺瘤組，均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05），PCNA在多形性腺瘤組中的陽(yáng)性表達(dá)率也明顯低于惡性多形性腺瘤組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）。正常腮腺組中，Cyclin D1的陽(yáng)性表達(dá)率為2.77%，多形性腺瘤組中，Cyclin D1的陽(yáng)性表達(dá)率為43.24%，惡性多形性腺瘤組中，Cyclin D1的陽(yáng)性率為86.44%。Cyclin D1在正常腮腺組中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于多形性腺瘤組和惡性多形性腺瘤組，均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05），Cyclin D1在多形性腺瘤組中的陽(yáng)性表達(dá)率也明顯低于惡性多形性腺瘤組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 見(jiàn)表 1。

表1 PCNA與Cyclin D1在腮腺不同組織學(xué)類型中陽(yáng)性表達(dá)比較

2.2 PCNA與Cyclin D1在不同臨床特征的惡性多形性腺瘤組織表達(dá)情況

PCNA與Cyclin D1在不同年齡、不同性別的惡性多形性腺瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。 PCNA 與 Cyclin D1在腫瘤直徑＞4 cm、TNM分期為III，IV期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的惡性多形性腺瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)率高于腫瘤直徑≤4 cm、TNM分期為I，II期、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的惡性多形性腺瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 Cyclin D1與PCNA在惡性多形性腺瘤的表達(dá)相關(guān)性

在46例Cyclin D1陽(yáng)性病例中，PCNA陽(yáng)性有40例，陰性有6例；在13例Cyclin D1陰性病例中，PCNA陽(yáng)性9例，陰性4例。Cyclin D1與PCNA在惡性多形性腺瘤的表達(dá)成正相關(guān)（r=0.821，P＜0.05）。

3 討論

越來(lái)越多的臨床研究結(jié)果表明，盡管腮腺多形性腺瘤是一種良性腫瘤，但是其包膜不完整，手術(shù)后容易復(fù)發(fā)，反復(fù)發(fā)作后易于惡變，因此被認(rèn)為是一種“臨界瘤”[7-8]。盡管目前病因尚未完全清楚，但是研究表明細(xì)胞周期對(duì)于腫瘤的發(fā)生、發(fā)展均起到了重要的作用[9]。而PCNA、Cyclin D1都是細(xì)胞周期調(diào)節(jié)的重要的因子，這些細(xì)胞因子蛋白表達(dá)異常往往是腫瘤發(fā)生的重要原因之一。

表2 PCNA與Cyclin D1在不同臨床特征的惡性多形性腺瘤組織表達(dá)情況

該次研究通過(guò)使用免疫組織化學(xué)染色的方法檢測(cè)了正常腮腺組織、腮腺多形性腺瘤組織和腮腺惡性多形性腺瘤3種組織中的PCNA、Cyclin D1陽(yáng)性表達(dá)情況，該次的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在正常腮腺組織中，PCNA、Cyclin D1的陽(yáng)性表達(dá)率明顯的低于腮腺多形性腺瘤組織和腮腺惡性多形性腺瘤組織，并且在良性的多形性腺瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)率也明顯的低于惡性多形性腺瘤組織（P＜0.05）。此外還針對(duì)惡性腮腺混合瘤組織的臨床病理指標(biāo)結(jié)合PCNA、Cyclin D1的陽(yáng)性表達(dá)情況進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PCNA、Cyclin D1的陽(yáng)性表達(dá)率和腫瘤直徑大小、腫瘤TNM分期以及是否有淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，PCNA是一種核蛋白，能促進(jìn)細(xì)胞DNA合成，在細(xì)胞增殖的啟動(dòng)上起重要作用[10]，被認(rèn)為是反映細(xì)胞增殖狀態(tài)的良好指標(biāo)[11]，并且在多種惡性腫瘤組織如肺癌[11]、乳腺癌[12-13]、十二指腸癌[14]等組織中陽(yáng)性表達(dá)率均明顯的高于正常組織，因此，PCNA被認(rèn)為是判斷腫瘤預(yù)后的一個(gè)重要指標(biāo)。該次的研究結(jié)果也發(fā)現(xiàn)，PCNA在腫瘤直徑較大、TNM分期較晚和遠(yuǎn)處淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織中的陽(yáng)性表達(dá)率更高，表明PCNA的陽(yáng)性表達(dá)可能與惡性腮腺混合瘤的預(yù)后密切相關(guān)。該次的研究結(jié)果和呂祥瑞等人[15]的研究結(jié)果相似。Cyclin D1主要功能激活細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶 4（CDK4）[16]，CDK4 使成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤蛋白（Rb）磷酸化，磷酸化的 Rb與E2F轉(zhuǎn)錄因子上解離，E2F轉(zhuǎn)錄因子活化，起始轉(zhuǎn)錄活細(xì)胞周期的基因，從而推動(dòng)細(xì)胞周期由G1時(shí)期進(jìn)入到S時(shí)期[17]。研究表明，在多種腫瘤中發(fā)現(xiàn)了Cyclin D1表達(dá)異常[18-20]。該次的研究結(jié)果中，Cyclin D1的陽(yáng)性表達(dá)和腫瘤的大小、分期以及是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

此外，還發(fā)現(xiàn)，Cyclin D1與PCNA在惡性多形性腺瘤的表達(dá)成正相關(guān)。表明了惡性腮腺混合瘤中CyclinD1和PCNA過(guò)表達(dá)同時(shí)存在，并且可能通過(guò)正反饋調(diào)節(jié)參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。

綜上所述，CyclinD1、PCNA蛋白在惡性腮腺混合瘤中的陽(yáng)性表達(dá)明顯增加，表明其異常表達(dá)與惡性腮腺混合瘤發(fā)生可能密切相關(guān)，并可能對(duì)預(yù)測(cè)惡性腮腺混合瘤預(yù)后有重要意義。