老年大腸癌患者外周血CD44v5、CD44v6表達及其對化療的影響

張明元 黃佳媛

(鄞州人民醫院，浙江 寧波 315040)

大腸癌是臨床中最為常見的一種消化系統腫瘤，其發病率位居所有惡性腫瘤疾病的第三位。癌細胞侵襲及腫瘤細胞的轉移、擴散是造成大腸癌高死亡病例的重要原因，故有效評估大腸癌轉移機制和潛能在延長患者生命、改善預后生活質量具有極其重要的意義〔1〕。近年來有研究顯示，腫瘤轉移基因CD44變異體有利于促進人體血管內皮細胞、細胞及基底膜的浸潤與黏附，進而能夠增強大腸癌腫瘤細胞的轉移及侵襲能力，且其表達率較未發生腫瘤轉移者明顯增高〔2〕。本研究分析老年大腸癌患者外周血CD44v5、CD44v6表達及其對化療的影響。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2013年7月至2016年4月鄞州人民醫院確診的62例老年大腸癌患者為觀察組，男35例，女27例；年齡61～75歲，平均(67.68±4.63)歲，其中直腸癌41例，結腸癌21例，國際抗癌聯盟(UICC)分期〔3〕：Ⅰ期14例，Ⅱa期18例，Ⅱb期13例，Ⅲ期9例，Ⅳ期8例。50例非老年大腸癌患者為對照組，男28例，女22例；年齡37～58歲，平均(45.13±6.46)歲；UICC分期：Ⅰ期12例，Ⅱa期15例，Ⅱb期11例，Ⅲ期8例，Ⅳ期4例。另選同期于我院行體檢的38例健康老年人為正常組，男22例，女16例；年齡61～74歲，平均(66.18±4.07)歲。

1.2化療方法 觀察組接受XELOX化療方案：第1天靜脈滴注奧沙利鉑2 h，130 mg/m2；第1～14天：口服卡培他濱1 000 mg/m2，2次/d，21 d為1個周期。

1.3制備標本 CD44v5檢測：取2 ml外周靜脈血，肝素(1∶9)抗凝，加入2 ml淋巴細胞分離液，1 500 r/min離心5 min，提取淋巴細胞分離層，采用磷酸進行漂洗，收集淋巴細胞。將100 μl懸液與10 μl CD44v5鼠抗人單克隆抗體加入試管中，均勻混合后放入4℃冰箱反應30 min；再將10 μl羊抗鼠IgG1-FITC標記的二抗加入，并放入冰箱中反應30 min；再將溶紅細胞液2 ml加入，混合均勻反應5 min；后利用磷酸緩沖液進行漂洗，將二抗加小鼠IgG1作為對照，實施上機檢測。CD44v6檢測：用小鼠IgG1-FITC設為同型對照，用鼠抗人CD44v6-FITC直接免疫熒光標記單克隆抗體，不加二抗，其余與CD44v5檢測方式相似。

1.4儀器與試劑 FACS Calibur型流式細胞儀購自美國BD公司，陰性對照液羊抗鼠IgG1-FITC、鼠抗人單克隆抗體購自上海晶美生物工程公司。

1.5檢測方法 采用美國BD公司提供的Cell Quest軟件對CD44v5、CD44v6免疫熒光陽性細胞百分率進行分析，去除同型對照標記的非特異性免疫熒光陽性細胞百分率。

1.6統計學方法 采用SPSS21.0軟件進行χ2檢驗、t檢驗及非參數檢驗。

2 結 果

2.1外周血CD44v5、CD44v6表達 觀察組與對照組CD44v5、CD44v6水平差異無統計學意義(t=0.753、0.810，P=0.186、0.248)；觀察組CD44v5、CD44v6顯著高于正常組(t=8.795、19.447，均P<0.05)。觀察組化療后CD44v5、CD44v6水平較化療前明顯降低(t=9.602、8.850，均P<0.05)，但仍顯著高于正常組(t=4.523、5.959，均P<0.05)。見表1。

表1 各組外周血CD44v5、CD44v6表達水平對比

與觀察組比較：1)P<0.05；與化療前比較：2)P<0.05

2.2臨床病理特征與外周血CD44v5、CD44v6表達的關系 CD44v5、CD44v6表達水平與患者腫瘤大小、浸潤深度、臨床分期及淋巴結轉移情況相關(P<0.05)，見表2。

表2 觀察組患者臨床病理特征與外周血CD44v5、CD44v6表達的關系

3 討 論

黏附分子CD44為一種透明質酸的受體，也是分布較廣泛的多功能、多結構的細胞表面糖蛋白之一〔4〕。其可對細胞外基質(層黏連蛋白、Ⅰ型膠原、纖黏連蛋白)、腫瘤細胞的結合能力產生直接影響〔5〕。臨床研究發現，當血行出現轉移時，腫瘤細胞可透過血管壁進入組織，并在淋巴歸巢中發揮重要作用。CD44基因由10個變異型外顯子及10個組成型外顯子組合，其中CD44v5、CD44v6是其常見的變異體，均屬于促進腫瘤轉移的相關基因〔6，7〕。有研究報道，黏附分子與結直腸癌、胃癌等疾病的進展、轉移、預后存在明顯相關性〔8〕。本研究結果表明，外周血黏附分子與大腸癌之間關系密切，但并不是老年大腸癌患者所獨有〔9〕。大腸癌包括直腸癌及結腸癌，是臨床較為常見的一種消化系統惡性腫瘤，從癌變發病率分析，依次為直腸、盲腸、乙狀結腸、升結腸及橫結腸等〔10〕。大腸癌具有發病率、致死率高的特征，雖早期無明顯癥狀，但是隨著癌變腫瘤的不斷發展，癥狀會逐漸出現，包括腹痛、便血、包塊、腹痛、腸梗阻等癥狀。與此同時，由于大腸癌細胞的轉移，會以局部侵犯的浸潤形式轉移至周圍器官組織。研究發現，大腸癌細胞轉移的方式主要有兩種，(1)淋巴轉移：浸潤的腫瘤細胞會穿過淋巴管壁，脫落后隨人體的淋巴液轉移至淋巴結，并以淋巴結為中心重新生長出腫瘤〔11〕；(2)血行轉移：血行轉移是大腸癌轉移、擴散的另一種途徑，腫瘤細胞會通過人體血管途徑，擴散到腫瘤組織以外的器官和組織(如肝臟、肺部、胃及骨等)〔12〕。一旦腫瘤細胞出現轉移和擴散現象，會極大增加臨床治療的難度，導致病死率大幅提升。臨床統計數據顯示，大腸癌的致死率極高，已成為危害人類生命安全的國際性醫學難題〔13〕。在世界范圍內，平均每年有超過120萬人確診大腸癌，并有超過65萬人死亡。研究結果顯示，由于大腸癌的侵襲、轉移和擴散等原因，導致其5年生存率極低，不足50%，而在非洲、中北美洲及亞洲部分發展中國家，由于醫療水平的欠缺，大腸癌的5年生存率更低，嚴重威脅人類生命安全。另外，隨著人口老年化趨勢的不斷加劇，大腸癌的患病率與致死率還在不斷增加，亟需引起人們關注〔14〕。研究顯示，大腸癌細胞的轉移是一系列復雜過程，需要癌細胞同細胞外間質及人體內的其他系統進行復雜的相互作用〔15〕。大腸癌腫瘤細胞外表面的黏附分子起到至關重要的作用。CD44又可稱為Hermes抗原因子，屬于細胞表面黏附分子，能夠特異性結合人體基質透明質酸及膠原蛋白細胞表面跨膜糖蛋白，得以參與腫瘤細胞組織與人體正常細胞、基質間的黏附過程，從而在大腸癌腫瘤細胞浸潤、轉移及擴散過程中起到至關重要的作用〔16〕。CD44也是一種跨膜透明質酸受體細胞，能夠促使大腸癌細胞獲得細胞浸潤和轉移能力。基因學研究顯示，CD44基因位于人類第11號染色體中，其分子量約為50 kb，存在20個具有高度保守特性的外顯子；根據其外顯子表達不同，臨床可以將CD44分為標準型(CD44s)及變異型(CD44v)，其中CD44v5與CD44v6是屬于CD44的變異型，同大腸癌腫瘤分型及癌細胞浸潤深度密切相關〔17〕。進一步研究發現，CD44v6能夠通過促進大腸癌細胞同人體正常血管內皮細胞的黏附，增加腫瘤細胞的侵襲能力。并且通過對于腫瘤細胞蛋白聚集分布的干擾，達到影響大腸癌細胞轉移和運動的能力，進一步促進腫瘤細胞轉移和擴散的形成〔17〕。CD44v6的表達可在一定程度上促進腫瘤細胞表面黏附分析的功能與結構出現變化，從而促使腫瘤細胞存在侵襲轉移能力；而CD44v6高表達的癌細胞可逃避人體免疫系統的殺傷與識別，獲取淋巴細胞的“偽裝”，更利于進入淋巴結，進而形成轉移〔18〕。本研究結果提示，中晚期老年大腸癌患者更易轉移，CD44v5、CD44v6表達水平可反映腫瘤細胞轉移潛能，且其表達水平越低患者預后越佳。另外，老年大腸癌患者接受化療可對部分內皮細胞黏附作用及腫瘤細胞產生抑制作用，可阻礙腫瘤細胞從血液循環中游出，進而達到抑制腫瘤細胞血行擴散、轉移的目的，但無法完全阻止腫瘤細胞轉移。

綜上，CD44v5、CD44v6表達與老年大腸癌患者細胞血行轉移密切相關，檢測其水平可為臨床判定該病發生、預后提供科學理論參考；化療具有腫瘤轉移、抗黏附作用，有利于降低外周血黏附分子表達水平。