一種新型過氧化物抑菌及殺菌效果試驗

趙彥華，張紀兵，薛暉

（1.江蘇省淡水水產研究所，江蘇 南京 210017；2.南京智億生物技術有限公司，江蘇 南京 211100）

嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）屬于弧菌科，氣單胞菌屬，是嗜溫、有動力的氣單胞菌群，是一種典型人-獸-魚共患病病原[1]。嗜水氣單胞菌目前已經在自然界被廣泛分離到，如在淡海水魚[2-3]，淡水蝦、蟹類[4]和養殖蛙體內[5-6]，被確認為多種水產動物重要的病原菌，給養殖生產帶來了巨大的經濟損失。雙氧水作為氧化性消毒劑，含有大量的過氧化氫，使用過程中能夠迅速釋放大量新生氧，對細菌組分發生氧化作用，干擾其酶系統從而發揮抑菌及殺菌作用[7]。近年來雙氧水作為控制魚類病原體的一種化學藥劑，在水產養殖方面得到了極高的重視[8]。該試驗的目的在于測試一種新型過氧化物在增氧的同時，對池塘水中細菌的抑制和殺滅效果。

1 材料與方法

1.1 材料

新型過氧化物（Na2SO2·Nacl·H2O2），由南京智億生物技術有限公司生產，LB營養肉湯培養基及胰蛋白胨生理鹽水溶液購自環凱生物制品有限公司，3M細菌培養計數片購自南京邁默瑞生物技術有限公司，供試菌株嗜水氣單胞菌標準菌株購自中國農業微生物保存中心。

1.2 方法

1.2.1 細菌懸液的制備 將嗜水氣單胞菌菌株用LB營養肉湯培養基進行搖床增菌培養，28℃，180 rad/min，培養5 h，離心，棄上清，用滅菌胰蛋白胨生理鹽水溶液洗下菌苔，制成菌懸液，按照倍比稀釋的方法，進行細菌計數，調整濃度，備用。

1.2.2 使用濃度為0.1 g/mL時抑菌效果試驗 按照使用說明書，將新型過氧化物使用濃度調整為說明書用量十分之一，即0.1 g/mL加入到菌懸液中，每隔15 min，吸取菌懸液并按照倍比稀釋方法進行稀釋，稀釋后不同濃度菌懸液各吸取1 mL加入3M細菌培養計數試紙片上進行壓片，連續監測6 h，試紙片放入28℃恒溫培養箱連續培養48 h進行細菌計數。

1.2.3 使用濃度為1 g/mL時殺菌效果試驗 將新型過氧化物按照使用濃度調整，即1 g/mL加入到菌懸液中，每隔15 min，吸取菌懸液并按照倍比稀釋方法進行稀釋，稀釋后不同濃度菌懸液各吸取1 mL加入3M細菌培養計數試紙片上進行壓片，連續監測6 h，試紙片放入28℃恒溫培養箱連續培養48 h進行細菌計數。

2 結果與分析

2.1 細菌懸液制備

嗜水氣單胞菌經肉湯培養基進行擴大培養后，制得菌懸液濃度為8.2×106CFU/mL。

2.2 抑菌試驗結果

過氧化物使用濃度為0.1 g/L時，檢測結果如表1所示，當加入過氧化物2 h 45 min時，細菌濃度最低，且濃度為3.1×106CFU/mL，細菌濃度下降明顯，隨著時間推移，細菌濃度隨即增加，表明此濃度抑菌效果較好，但并不能完全殺滅菌體。

2.3 殺菌試驗結果

過氧化物使用濃度為1 g/L時，檢測結果如表2所示，當加入過氧化物1 h 15 min時，細菌全部殺死，表明該過氧化物殺菌效果明顯。

表1 過氧化物抑菌試驗結果

表2 過氧化物殺菌試驗結果

2.4 抑菌及殺菌曲線圖

如圖1所示，A為抑菌曲線，B為殺菌曲線，隨著時間的推移，曲線A中細菌總數在2 h 45 min中時濃度最低，隨后細菌濃度上升；曲線B隨著時間的推移，細菌在1 h 15 min時被完全殺死，細菌數為零，且隨著時間的推移，并未檢測到細菌的存在。

圖1 過氧化物抑菌及殺菌曲線

3 討論

近年來，隨著水產養殖業的高密度、集約化飼養及種質資源的退化，水產病害日益增多，抗生素的過量使用，不僅僅造成耐藥株的產生，而且還會出現藥物殘留等食品安全問題，消毒劑不僅可以防治病害，又可以避免藥物殘留等問題的出現，因此在水產養殖中廣泛使用。池塘消毒作為養殖的第一步，也是最重要的一步，如何挑選一種效果好，用量少，無污染，無殘留以及不易產生耐藥性的消毒劑是制約水產養殖業發展的一大問題。

嗜水氣單胞菌普遍存在于水環境中，是重要的水生病原菌之一。池塘養殖水環境，細菌總數一般為106CFU/mL，因此，該試驗模擬水環境中細菌總數，培養嗜水氣單胞菌調整其濃度為8.2×106CFU/mL，通過固體過氧化物的溶解，進行氧化作用抑制和殺滅細菌。該次試驗通過低濃度及正常濃度過氧化物的使用，來驗證一種新型過氧化物的抑菌及殺菌效果，為水產養殖中使用消毒劑提供了一定的參考。