淺析選擇不同的制備時機在制備新鮮冰凍血漿時對其冷沉淀質量的影響

朱愛維

(常州市中心血站，江蘇 常州 213004 )

新鮮冰凍血漿（fresh frozen plasma，FFP）是臨床上常用的血液成分之一，具有促進組織修復及止血的作用[1]。冷沉淀（cryoprecipitate，CP）是指將FFP在低溫（1-6℃）解凍后沉淀的白色絮狀物，是FFP中部分凝血因子的濃縮制品。冷沉淀主要含有纖維結合蛋白（fibronectin，Fn）、血管性血友病因子（von willebrand factor，vWF）、纖維蛋白原（fibrinogen，FIB）、凝血因子XIII等，其對甲型血友病、彌漫性血管內凝血及產婦大出血均具有良好的治療效果[2]。目前，如何提高新鮮冰凍血漿冷沉淀的產量及質量等問題已成為采供血機構的重要研究課題。本次研究主要探討選擇不同的制備時機在制備新鮮冰凍血漿時對其冷沉淀質量的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次研究的對象為將180份全血。這180份全血均來源于無償獻血的健康人群，每份全血的容量約為400 mL，其新鮮冰凍血漿的容量為200 ml。

1.2 研究方法

1）本次研究使用的儀器為全自動血凝分析儀（由德國美創公司生產，型號為1800）、聯排熱合機（由韓國森通公司生產，型號為SE260）和血漿速凍機（由盧森堡公司生產，型號為MBF21）。本次研究使用的試劑盒為纖維蛋白原測定試劑盒（由南京建成生物工程研究所提供，貨號為F010）和凝血因子Ⅷ測定試劑盒（由德國西門子公司提供，貨號為546585A）。2）制備新鮮冰凍血漿的方法是：⑴將400 ml的全血分2次進行離心后制備成血漿，即將溫度控制在2℃～6℃，第一次以3500 r的速度對全血進行6 min的離心處理，第二次以4000 r的速度對全血進行7 min的離心處理。⑵將血漿分別保存6 h、8 h和12 h，然后將其速凍40 min后制備成新鮮冰凍血漿，并將其移至溫度為-20℃的低溫冰箱中進行保存。100 mlFFP制備的冷沉淀為1個單位。3）制備冷沉淀的方法是：使用虹吸法制備冷沉淀，將新鮮冰凍血漿的容量控制在40 mL左右（上下不超過5 mL），對其進行熱合后立即轉移至-50℃的速凍機內，在速凍結束后立即將其轉移至-20℃的低溫冰箱中進行保存。4）對新鮮冰凍血漿冷沉淀進行檢測的方法是：按照試劑盒說明書中的方法測量新鮮冰凍血漿冷沉淀中纖維蛋白原和凝血因子Ⅷ的含量，并計算冷沉淀中凝血因子的合格率。

1.3 觀察指標

觀察在第6 h、第8 h和第12 h制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀中FIB的含量和凝血因子Ⅷ的含量及其冷沉淀的合格率。

1.4 統計學處理

將本次研究中的數據錄入到SPSS17.0軟件中進行處理，計量資料呈正態分布的定量數據用（±s）表示，采用t檢驗，計數資料以頻數%表示，采用χ2檢驗；組間比較采用t檢驗，若方差不齊，則采用校正t檢驗。P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 在不同的制備時間制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀中FIB含量和Ⅷ含量的比較

與在第12 h制備新鮮冰凍血漿冷沉淀相比，在第6 h和第8 h制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀中凝血因子Ⅷ的含量均更高，P＜0.05；在第6 h、第8 h和第12 h，制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀中FIB的含量相比，P＞0.05。詳見表1。

表1 在不同的制備時間制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀中FIB、Ⅷ含量的比較（±s ）

表1 在不同的制備時間制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀中FIB、Ⅷ含量的比較（±s ）

注：*與第12 h時相比，P＜0.05。

時間 份數 FIB的含量（g/L） Ⅷ的含量（IU/mL）第6 h 60 8.14±0.28 75.18±0.73*第8 h 60 8.20±0.46 74.99±0.81*第12 h 60 8.04±0.54 56.45±0.52

2.2 在不同的制備時間制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀合格率的比較

與在第12 h制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀相比，在第6 h和第8 h制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀的合格率均更高，P＜0.05；在第6 h和第8 h制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀的合格率相比，P＞0.05。詳見表2。

表2 在不同的制備時間制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀合格率的比較[n（%）]

3 討論

在2012年頒布的GB19469-2012《全血及成分血質量要求》中，新鮮冰凍血漿是指將存放于冷藏環境的全血在6 h（保養液為ACD）或8 h（保養液為CPDA-1或CPD）分離出血漿后速凍成固態的成分血[3]。血漿是血液內的非細胞成分，主要包含蛋白質、無機物、糖類、水分及非蛋白含氮化合物等[4]。臨床上應用的血漿主要由血站提供，血漿制品主要包括普通冰凍血漿、病毒滅活冰凍血漿及新鮮冰凍血漿等。相關的研究表明，以新鮮冰凍血漿為原材料制備的冷沉淀，其凝血因子Ⅷ會受到制備時間的影響，而影響冷沉淀質量的主要因素為不穩定的凝血因子[5]。有研究發現，凝血因子Ⅷ的半衰期約為8 h，超過此時間其易失去活性。另外，凝血因子Ⅷ的活性還可受到獻血者自身凝血因子的水平、采集血液的時間、全血運輸時的溫度、血漿制備的方法和時間等因素的影響[6]。本次研究的結果顯示，與在第12 h制備新鮮冰凍血漿冷沉淀相比，在第6 h和第8 h制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀中凝血因子Ⅷ的含量均更高，P＜0.05；在6 h、8 h和12 h制備所得的新鮮冰凍血漿冷沉淀中FIB的含量相比，P＞0.05。與在第12 h制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀相比，在第6 h和第8 h制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀的合格率均更高，P＜0.05；在第6 h和第8 h制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀的合格率相比，P＞0.05。此研究結果符合《血站技術操作規程》（2012版）中有關抽檢樣本質量控制指標的范圍，可作為血液采集及制備的受控要求。

綜上所述，在第6 h和第8 h制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀的質量較好。