凍融卵裂期胚胎當日解凍與提前解凍移植對臨床妊娠結局的影響

李維娟,李彥奇,張 坤

(新疆佳音醫院IVF胚胎實驗室，烏魯木齊 830001)

凍融胚胎移植(FET)是將胚胎置于超低溫的液氮(-196 ℃)中冷凍保存，并在適宜時間解凍胚胎，進行分期、分批、可多次移植的一項技術，胚胎冷凍-解凍的過程稱之“凍融”。1983年世界上首例凍融胚胎成功妊娠，1985年世界首例由FET獲得的健康嬰兒誕生。目前FET技術已廣泛應用于臨床，并成為輔助生殖技術中不可缺少的一部分。有研究表明，該技術不僅可以減少卵巢過度刺激綜合征，使患者可以選擇在更適合的時期進行移植,降低多胎妊娠率、促排卵次數及患者費用，還可減輕患者的身心壓力和提高體外受精(IVF)的累積妊娠率[1-2]。對于延長凍融胚胎復蘇后體外培養時間是否有助于改善妊娠結局尚有爭議[3]。本研究通過對解凍移植周期中卵裂期胚胎當天解凍移植和提前解凍過夜培養后移植的臨床妊娠結局進行回顧性分析，探討解凍移植周期中卵裂期胚胎當天解凍移植和提前解凍過夜培養后移植對IVF結局的影響。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性分析2017年1-4月在本院生殖中心接受凍融卵裂期胚胎移植治療的277例患者，即277個凍融卵裂期胚胎移植周期，均為玻璃化冷凍。本研究中卵裂期胚胎FET周期移植胚胎數≥1個，接受移植患者年齡22～49歲，平均(32.63±5.56)歲。納入標準:(1)子宮正常，既往無子宮手術史；(2)均為不超過3次的IVF移植周期。排除標準：(1)程序化冷凍胚胎移植周期；(2)囊胚移植周期；(3)解凍后繼續培養成囊胚再移植周期。根據解凍后胚胎培養時間的不同分為當日解凍組(A組)和提前解凍組(B組)。其中移植當日解凍胚胎162個周期(A組)，接受移植患者平均年齡(32.27±4.02)歲，平均解凍胚胎數(1.91±0.59)個；提前解凍115個周期(B組)，接受移植患者平均年齡(30.11±3.43)歲，平均解凍胚胎數(1.92±0.50)個，2組一般情況比較，差異無統計學意義(P>0.05)。根據患者的年齡，可將A組和B組分別分成3組，即A1、B1：年齡<30歲；A2、B2：年齡30～<35歲；A3、B3：年齡≥35歲。

1.2方法

1.2.1胚胎冷凍-復蘇 依照本院常規的促排卵方案，在IVF后第3天進行胚胎冷凍。本院胚胎冷凍標準：(1)第3天細胞數≥7個細胞，卵裂球大小均勻，無空泡，碎片≤10%；(2)第3天細胞數≥4個細胞，碎片≤10%，且與第2天相比卵裂球數目有所增加。采用玻璃化凍融法對胚胎進行冷凍和復蘇。胚胎復蘇后，觀察胚胎的透明帶和卵胞漿，選擇復蘇后卵裂球≥50%的胚胎進行移植。

1.2.2復蘇的胚胎分組 A組當日解凍，即在移植當天進行胚胎復蘇，體外培養1～3 h后進行移植。B組提前解凍，在移植的前一天下午進行胚胎復蘇，體外培養18～20 h后進行移植。

1.2.3內膜準備 采用人工周期，于月經第3天口服戊酸雌二醇2～6 mg/d，B超顯示子宮內膜厚度為8～15 mm時，加用黃體酮40 mg/d肌肉注射和黃體酮軟膠囊(安琪坦)，第3天或第2天下午解凍胚胎。胚胎移植均在B超引導下進行，移植后給予常規黃體支持。

1.2.4臨床妊娠標準 胚胎移植后14 d，尿人絨毛膜促性腺激素(HCG)陽性，血HCG≥25 mIU/mL，可定為生化妊娠。胚胎移植三周后行B超可見孕囊，判斷為臨床妊娠。臨床妊娠率=臨床妊娠周期數/移植周期數×100%，胚胎著床率=著床胚胎數/移植胚胎數×100%。

2 結 果

2.1當日解凍和提前解凍移植結局比較 A組與B組的臨床妊娠率分別為38.27%、43.48%，著床率分別為24.68%、26.98%，2組之間差異均無統計學意義(P>0.05)。

2.2年齡與FET結局的關系 A3、B3分別與A1、B1，A2、B2相比，其臨床妊娠率和著床率均明顯降低，差異有統計學意義(P<0.05)。即隨著女性年齡增高，臨床妊娠率和著床率均隨之下降，見表1。

表1 年齡與FET結局的關系

3 討 論

FET在經歷30多年的發展后，已成為輔助生殖技術的重要手段之一。因此，影響FET臨床妊娠結局的相關因素也成了國內外學者共同探討的問題。影響FET臨床妊娠結局的因素很多，包括患者年齡、胚胎質量、移植時子宮內膜是否適宜、凍融胚胎復蘇后體外培養時間等[4-5]。李偉等[6]認為卵裂球的完整性是影響凍融胚胎種植率的重要因素，移植前提早解凍觀察復蘇后胚胎有無進一步生長，有助于評價凍融胚胎的發育潛能。有報道認為，延長解凍后的培養時間對胚胎臨床妊娠結局沒有好處，縮短體外培養時間則可以明顯提高種植率和活產率[7]。另外一些學者則發現延長凍融胚胎體外培養時間并不影響凍融卵裂期胚胎的發育潛能，也不能提高FET的妊娠率和著床率[8-10]。本研究也表明提前解凍并未明顯改善妊娠結局。但是，有研究表明將第3天卵裂期胚胎凍融后培養至囊胚移植，可以明顯提高臨床妊娠率[11]。因此，臨床可通過適量增加囊胚的移植數目，從而改善FET的臨床妊娠結局。

隨著年齡的增長，在FET周期中卵母細胞的數量及質量逐漸下降，臨床妊娠率也隨之下降。因此，女性的年齡是影響FET臨床妊娠的因素之一。本研究結果顯示，年齡≥35歲患者臨床妊娠率和著床率明顯低于年齡<35歲患者，年齡≥35歲患者臨床妊娠率較低可能是因為卵巢儲備能力、卵子數量和質量，以及子宮內膜容受性均降低，并且染色體異常概率增加，從而導致臨床妊娠率下降，這與已有研究結論相一致[12-13]。

綜上所述，凍融卵裂期胚胎提前解凍培養后再進行移植并不能改善妊娠結局，但年齡是影響凍融胚胎妊娠率和著床率的重要因素，隨著女性年齡的增高，臨床妊娠率和著床率均會隨之下降。因此，在臨床工作中應根據患者的具體情況選擇恰當的時間進行移植，從而提高臨床妊娠率。