p140Cap在乳腺癌中的表達及其臨床意義

童 輝

江西省鷹潭市人民醫院腫瘤科，江西鷹潭 335000

p140Cap基因目前被認為是一種抑癌基因，在乳腺癌細胞如MCF7和T47D中有表達，通過去除和獲得p140Cap，發現影響乳腺癌細胞運動、侵襲和體內腫瘤生長。p140Cap蛋白在多種腫瘤組織和細胞株中表達減弱或者消失，包括腎癌、肺癌、前列腺癌等[1-2]。

乳腺癌的發生、發展是一個復雜過程，乳腺癌浸潤性生長和遠處轉移導致患者預后差，乳腺癌切除術后容易引起肝臟和肺臟轉移，單純的手術技巧改善無法降低乳腺癌復發的風險。乳腺癌的化療目前處于一個瓶頸期，研究發現p140Cap在乳腺癌組織中的表達明顯降低或缺失，提示p140Cap可能是一個抑癌基因，其在乳腺癌的發生、發展中起著重要的作用。

p140Cap蛋白通過調節整合素和生長因子受體在腫瘤的形成中起著抑制腫瘤的作用[3]。整合素是細胞表面重要受體，通過將細胞外基質的化學成分和力學狀態信息傳入細胞，介導細胞和細胞間及細胞外基質間相互作用。對于癌癥，整合素也為腫瘤遷徙性散布所必需，如腫瘤細胞轉移、侵襲和目標組織的定植[4]。p140Cap蛋白作為整合素下游重要的接頭分子蛋白，可能起著調節腫瘤轉移和侵襲作用，因此通過研究p140Cap蛋白在乳腺癌中的表達，不但能預測乳腺癌的預后，而且有可能作為乳腺癌治療的潛在靶點。本研究通過免疫組化技術檢測p140Cap在乳腺癌中的表達及臨床預后意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取符合納入標準的2012年6月～2017年6月在鷹潭市人民醫院就診住院的246例原發性乳腺癌患者作為病例組，選取60例乳腺癌旁組織作為對照組。

1.2 實驗方法

應用免疫組化技術檢測p140Cap在246例乳腺癌組織和60例乳腺癌旁組織的表達水平，利用統計學方法分析p140Cap在乳腺癌和癌旁組織中的表達水平、在臨床參數（年齡、腫瘤大小、淋巴結轉移、臨床分期）中及在分子生物學指標[雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、人表皮生長因子受體（HER-2）]中的表達水平和相關性。

1.3 實驗試劑

用于免疫組織化學染色的一抗多克隆兔抗人p140Cap抗體購自Novus，即用型快捷免疫組織化學MaxVision試劑盒、DAB顯色試劑盒購于福州邁新生物技術公司。

1.4 免疫組織化學的步驟

按照抗體及免疫組織化學試劑盒說明書進行，將組織切片脫蠟和水化，放置枸櫞酸鈉緩沖液中高溫抗原修復，PBS溶液沖洗3次，滴加1︰50稀釋滴度的一抗，PBS溶液沖洗5次，滴加辣根過氧化物酶二抗，室溫30 min，最后，經PBS洗滌后DAB顯色，蘇木素復染，封片。

1.5 免疫組化結果分析

光學顯微鏡下觀察每張切片，選擇4個不同視野，按照染色程度，計算p140Cap陽性和陰性細胞。每個視野的得分按照細胞染色強度和染色陽性細胞所占范圍乘積來判斷。評分標準：①染色強度計分中，不染色記為0分，淡黃色記為1分，淺褐色記為2分，深褐色記為3分。②染色面積計分中，0～25%細胞染色記為1分，＞25%～＜50%細胞染色記為2分，50%～75%細胞染色記為3分，＞75%細胞染色記為4分。結果取兩者評分之乘積，染色強度與陽性細胞百分比乘積≥6分為免疫反應高表達，乘積＜6分判為低表達[5]。

1.6 統計學方法

采用SPSS 17.0統計學軟件對數據進行分析，計數資料以率（%）表示，采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 p140Cap在乳腺癌組織和癌旁組織中表達的比較

p140Cap在乳腺癌組織中的陽性表達率為33%，在乳腺癌旁組織中的陽性表達率為70%，p140Cap在乳腺癌組織中的表達降低。p140Cap在乳腺癌組織和乳腺癌旁組織中表達陽性率比較，差異有統計學意義（P＜0.05）（表1）。

表1 p140Cap在乳腺癌組織和癌旁組織中表達的比較[n（%）]

2.2 免疫組化檢測p140Cap在乳腺癌旁組織中表達圖像

p140Cap在乳腺癌組織中的高表達和低表達如下圖（圖 1）。

圖1 免疫組化檢測乳腺癌中p140Cap蛋白表達（細胞質×200）

2.3 免疫組化檢測p140Cap在乳腺癌旁組織中表達圖像

p140Cap在乳腺癌旁組織中的高表達和低表達見圖2。

圖2 免疫組化檢測乳腺癌旁組織中p140Cap蛋白表達（細胞質×200）

2.4 p140Cap在乳腺癌組織中的表達同臨床病理參數關系分析

p140Cap的表達同乳腺癌患者的腫瘤直徑、年齡、腋窩淋巴結轉移、組織學分級、ER狀態、PR狀態、HER-2狀態有關（P＜0.05），而與患者的腫瘤分期無關（P＞0.05）（表2）。

表2 p140Cap在乳腺癌組織中的表達同臨床病理參數關系分析[n（%）]

3 討論

p140Cap由srcin1基因編碼，在人類、小鼠、大鼠、狗、牛和斑馬魚srcin1基因編碼是保守的[6-7]。在乳腺癌中，p140Cap通過激活Csk的Src負性調節物，影響乳腺癌的侵襲和遠處轉移[8-11]。

細胞凋亡指的是在內環境穩定狀態下，由基因控制的細胞的自主的、有序的死亡。既往研究發現在大腸癌中，惡性腫瘤細胞出現凋亡，可以對腫瘤治療起重要作用，p140Cap表達降低會引起大腸癌凋亡，促進腫瘤細胞生長，增強了癌細胞的侵襲和轉移的能力[12]。

體外實驗顯示，p140Cap降低乳腺癌細胞在ECM蛋白中的擴散能力、遷移和侵襲能力。p140Cap靜默加速細胞在ECM上早期擴散，誘導成纖維細胞樣變形，并且增加細胞移動和侵襲[13]。在乳腺癌細胞中，p140Cap可能通過Src和Rac激活表達控制非依賴性生長，p140Cap高表達抑制體內腫瘤生長，p140Cap低表達增加體內腫瘤的形成[14-15]。

p140Cap在乳腺癌中的表達程度同乳腺癌患者的腫瘤直徑、年齡、腋窩淋巴結轉移、組織學分級、ER、PR、HER-2狀態有關，而與患者的腫瘤分期無關。結合本實驗研究，p140Cap在乳腺癌中作為一種腫瘤抑制劑，在細胞增殖、腫瘤生長中具有廣泛的作用。

綜上所述，目前p140Cap與乳腺癌的研究甚少，本研究提示p140Cap在乳腺癌中起著負性調節作用，其作用機制尚需進一步研究。