百香果莖段培養(yǎng)技術(shù)探究

牛俊樂 黃斌政 潘彩娟 蘇仕林 晉文金

摘 要：以紫果百香果幼嫩莖段作為試驗(yàn)材料，MS培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，進(jìn)行外植體的誘導(dǎo)和培養(yǎng)，探究外植體適宜的滅菌方法，初代、繼代及生根培養(yǎng)過程中適宜的激素種類及濃度。結(jié)果表明，75%的酒精滅菌30s+0.1%的升汞滅菌12min滅菌效果最好；初代培養(yǎng)以2.5mg/L的6-BA在芽的誘導(dǎo)中效果最好；繼代培養(yǎng)以1.0mg/L的6-BA+0.3mg/L的IBA適宜芽的增殖且利于壯苗；生根培養(yǎng)以1/2 MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，加入0.1mg/L的NAA+0.1mg/L的IBA形成的苗健壯，生根率高達(dá)100%。

關(guān)鍵詞：百香果；組織培養(yǎng)；激素誘導(dǎo)

中圖分類號 Q943.1 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-7731（2018）15-0024-03

百香果，又名愛情果，學(xué)名：西番蓮（拉丁文名：Passiflora edulis Sims），包括黃色百香果、紫色百香果、紫紅色百香果，屬西番蓮科西番蓮屬的草質(zhì)藤本植物。百香果富含人體所需的17種氨基酸、多種維生素和類胡蘿卜素以及各種微量元素，可溶性固形物15%～16%，總酸量3.8%～4.0%，甜酸適中，素有“果汁之王”的美稱[1]。

百香果主要栽培地為廣西、廣東和福建等地，其繁殖方法主要有3種：一是用種子直接播種繁殖；二是用蔓條扦插繁殖；三是種子播種苗再嫁接高產(chǎn)無病毒母本。嫁接苗雖然穩(wěn)產(chǎn)，但成本高；常年的種子繁殖，延長了勞作時(shí)間，增加不必要的成本；無選擇的進(jìn)行扦插壓條繁殖，加快了品種的退化，且病害加劇；另外，扦插苗的壽命短于實(shí)生苗、分株苗、嫁接苗；扦插移栽苗的根系普遍較弱、生根淺，抗逆性弱，在移栽種植過程中，需要投入大量的人力和物力[2-3]。百香果的經(jīng)濟(jì)壽命為8～10年，作為經(jīng)濟(jì)作物在于穩(wěn)產(chǎn)的同時(shí)還要有較長的經(jīng)濟(jì)壽命。而通過組織培養(yǎng)，可以在不受植物體其它部分干擾下研究被培養(yǎng)部分的生長和分化的規(guī)律，并且可以利用各種培養(yǎng)條件影響它們的生長和分化，以解決理論上和生產(chǎn)上的問題。

本研究通過對百香果的組織培養(yǎng)方法進(jìn)行探究，目的是在短時(shí)間內(nèi)培育出健康易成活的高質(zhì)量的百香果種植苗，為百香果快繁提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 供試材料為健壯紫果百香果嫩枝，采摘于百色市森林公園園圃內(nèi)。采摘的外植體修剪感長度2cm左右有腋芽的莖段，備用。

1.2 培養(yǎng)條件 溫度：（25±1）℃；光照度：2000lx、12h/d。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 外植體的滅菌 將外植體放入燒杯內(nèi)，洗去污漬，加入適量洗衣粉，浸泡3～10min；用雙層紗布封住燒杯口，用自來水流水沖洗1h后置于超凈工作臺(tái)內(nèi)；用75%濃度的酒精滅菌10、20、30、40、50s，無菌水沖洗3次，再用0.05、0.1、0.15、0.2、0.25%濃度的升汞滅菌10min；無菌水沖洗3次[4]，接種，培養(yǎng)25～30d，分析結(jié)果，選出合適的酒精滅菌時(shí)間、升汞滅菌濃度組合，對選出的不同升汞滅菌濃度，依次滅菌6、7、8、9、10、11、12、13min，挑選出最佳滅菌時(shí)間。

1.3.2 初代培養(yǎng) 在超凈工作臺(tái)上將準(zhǔn)備好的外植體接種到加入了濃度為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mg/L的KT和6-BA以及MS培養(yǎng)基中，25～30d后觀察結(jié)果，記錄分析。

1.3.3 繼代培養(yǎng) 在初代培養(yǎng)后，以MS+0.5、1.0、1.5、2.0mg/L配合6-BA，0.1、0.2、0.3、0.4mg/L的IBA進(jìn)行繼代培養(yǎng)，接入無菌芽，培養(yǎng)25～30d后，記錄分析。

1.3.4 生根誘導(dǎo)培養(yǎng) 挑選健康、粗壯、長勢均勻長度2～3cm的增殖芽，將嫩芽從基部切下，接入0.05、0.1、0.15、0.2mg/L的NAA配合0.05、0.1、0.2mg/L的IBA的MS、1/2MS的培養(yǎng)基中培養(yǎng)進(jìn)行壯苗生根培養(yǎng)，培養(yǎng)25～30d進(jìn)行結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 外植體滅菌處理 由表1可知，隨著酒精滅菌時(shí)間的增加，外植體的污染率也隨著降低，增加升汞濃度的同時(shí)，外植體的污染率也隨著降低，成活率隨著升高。但是，隨著酒精滅菌時(shí)間增加，升汞濃度增加，外植體的成活率會(huì)隨著降低，當(dāng)酒精滅菌時(shí)間到50s，升汞濃度達(dá)到0.2%、0.25%時(shí)，外植體無污染，但外植體發(fā)黃、褐化死亡非常嚴(yán)重。結(jié)合表2可知：紫果百香果外植體的滅菌以75%的酒精30s+0.15%濃度的升汞滅菌12min效果最好。

2.2 初代芽誘導(dǎo) 由表3可知，外植體出芽率的高低受細(xì)胞分裂素濃度的影響，濃度低時(shí)，出芽率明顯偏低，誘導(dǎo)效果不明顯；隨著濃度的提高，出芽率明顯增加，但超過一定濃度后，芽的誘導(dǎo)率會(huì)呈下降趨勢，并伴隨著愈傷組織的形成。KT誘導(dǎo)出的芽顏色淡黃，弱小，不均勻。加入2.5mg/L的6-BA，誘導(dǎo)芽發(fā)生的效果最好，出芽率高，芽均勻健壯。

2.3 繼代培養(yǎng) 從表4可以看出，高濃度的6-BA則會(huì)抑制芽的的增殖，隨著6-BA的激素濃度量的遞減，芽的增殖明顯增加；6-BA濃度為1.0mg/L時(shí)，芽的增殖率最高；當(dāng)6-BA的素濃度過低時(shí)，芽的誘導(dǎo)不均勻，芽出現(xiàn)兩極分化，芽的長勢比較弱；相同6-BA濃度下，加入濃度為0.3mg/L的IBA后，芽的增殖率和長勢可以得到明顯的改善，形成粗壯健康的芽體系。因此，繼代培養(yǎng)以1.0mg/L的6-BA配合0.3mg/L IBA的效果最佳。

2.4 生根培養(yǎng) 從表5可以看出，芽的生根受NAA濃度的影響，隨著NAA濃度的降低，根的誘導(dǎo)率增加，但濃度過低時(shí)，誘導(dǎo)效果會(huì)變差。相同NAA濃度下，加入IBA可以增強(qiáng)植株的長勢，當(dāng)加入0.1mg/L的IBA時(shí)，植株長勢最好。對比MS、1/2MS培養(yǎng)基中植株的長勢，1/2MS培養(yǎng)基中植株的長勢要遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于MS培養(yǎng)基。由此可知，在1/2MS培養(yǎng)基中加入0.1mg/L的NAA配合0.1mg/L的IBA，利于芽生根的誘導(dǎo)，同時(shí)能夠起到很好的壯苗作用。

3 結(jié)論

研究結(jié)果表明，外植體在洗衣粉液中浸泡3～10min，經(jīng)自來水沖洗1h，再用75%的酒精滅菌30s，0.15%的升汞滅菌12min，在不影響成活率的前提下，可以起到有效的滅菌效果。初代培養(yǎng)中，加入了2.5mg/L 6-BA，誘導(dǎo)芽的發(fā)生效果最好，出芽率高，芽均勻健壯；繼代培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基內(nèi)加入1.0mg/L 6-BA配合0.3mg/L IBA，利于芽的增殖，芽長勢均勻、健壯。生根培養(yǎng)中，以1/2MS培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，加入0.1mg/L NAA配合0.1mg/L IBA，利于芽生根的誘導(dǎo)，誘導(dǎo)率高達(dá)100%。

參考文獻(xiàn)

[1]張小平.百香果種植技術(shù)[J].農(nóng)村實(shí)用技術(shù)，2014（5）：20-21.

[2]楊冬業(yè)，張麗珍，徐淑慶.百香果組織培養(yǎng)及植株再生[J].北方園藝，201（3）：125-127.

[3]楊冬業(yè)，張麗珍.百香果的扦插種植研究[J].北方園藝，2015，9：38-40.

[4]蔡蕊，徐民澤，段浩楠，等.紫色甘薯試管苗穩(wěn)定高效快繁技術(shù)研究[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012（22）：16-18.

（責(zé)編：張宏民）