白細胞CD35和CD11b表達在診斷細菌感染中的價值

王維維， 郝 軍， 袁向亮， 章黎華， 鄭培明， 費奇力， 奚 迪， 沈立松

（1.上海交通大學醫學院附屬新華醫院檢驗科，上海 200092；2.威海市中心醫院檢驗科，山東 威海 264400）

細菌感染是常見的就診原因，也是臨床疾病常見的并發癥之一。感染后期可以引起敗血癥、膿毒血癥、器官衰竭等嚴重后果，甚至死亡。為早期干預治療，指導抗菌藥物的使用，細菌感染的早期快速、準確診斷尤為重要。目前，細菌培養是診斷細菌感染的金標準，但細菌培養耗時較長，而且培養結果與樣本取材關系密切。診斷感染的常用實驗室指標有白細胞計數、中性粒細胞計數、C反應蛋白（C-reactive protein，CRP）等，但這些指標的特異性和敏感性都有待提高。因此，臨床亟需一種可以特異且敏感地鑒別細菌感染的標志物或方法。補體受體（complement receptor，CR）1即CD35，可以促進吞噬細胞吞噬顆粒和免疫復合物等[1-2]。CR3即CD11b，又稱CD18，介導細胞黏附和調理吞噬，在炎癥過程中參與吞噬細胞與內皮細胞黏附[1-2]。CD35和CD11b在靜止期的中性粒細胞中僅微弱表達，發生感染后，中性粒細胞會釋放大量CD35和CD11b到細胞表面[3-4]。因此，本研究采用流式細胞術快速定量檢測白細胞CD35和CD11b的表達，以期能實現感染的快速診斷。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2014年5月—2016年2月上海交通大學醫學院附屬新華醫院感染疑似患者100例，另選取同期上海交通大學醫學院附屬新華醫院健康體檢者40名。采集所有對象肝素抗凝外周血4 mL，2 h內完成檢測。查詢感染疑似患者的血培養和臨床綜合診斷并進行比對，排除非感染患者，排除伴隨病毒感染的患者，剩余39例（男22例，女17例，年齡14～84歲）作為細菌感染組。40名健康體檢者排除血常規和免疫指標等異常者，剩余23名（男13名，女10名，年齡18～76歲）作為正常對照組。

1.2 方法

熒光抗體鼠抗人CD35-FITC、鼠抗人CD11b-PE及鼠抗人CD45-Pe-Cy5均購自美國Beckman-Coulter公司。取以上抗體各5 μL至流式專用試管內，加入外周血50 μL，避光孵育10 min，加入BD Lysing細胞裂解液（美國BD公司）1 mL，裂解紅細胞10 min，采用BD canto Ⅱ流式細胞儀（美國BD公司）檢測外周血白細胞（淋巴細胞、單核細胞和中性粒細胞）的CD35和CD11b平均熒光強度（mean fluorescence intensity，MFI）。分別計算細菌感染組和正常對照組中性粒細胞CD35 MFI /淋巴細胞CD35 MFI比值（簡稱CD35比值）、中性粒細胞CD11b MFI/淋巴細胞CD11b MFI比值（簡稱CD11b比值），并按公式[感染指數=中性粒細胞MFI2/（淋巴細胞MFI×單核細胞MFI）]計算CD35感染指數和CD11b感染指數。同時檢測CD64 MFI并計算CD64比值及CD64感染指數。

1.3 統計學方法

采用GraphPad Prism 5.0進行統計分析。呈正態分布的數據以表示，組間比較采用t檢驗。采用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線評估各項指標診斷細菌感染的價值。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 細菌感染組與正常對照組白細胞CD35、CD11b和CD64 MFI的比較

細菌感染組淋巴細胞CD35 MFI、CD11b MFI和CD64 MFI均低于正常對照組（P＜0.000 1、P＜0.01、P＜0.000 1），而中性粒細胞CD35 MFI、CD11b MFI和CD64 MFI均高于正常對照組（P＜0.000 1、P＜0.000 1、P＜0.01）；細菌感染組單核細胞CD11b和CD64的MFI均高于正常對照組（P＜0.000 1、P＜0.001），而2個組之間單核細胞CD35 MFI差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1～表3。

表1 細菌感染組和正常對照組淋巴細胞CD35 MFI、CD11b MFI和CD64 MFI的比較

表1 細菌感染組和正常對照組淋巴細胞CD35 MFI、CD11b MFI和CD64 MFI的比較

?

表2 細菌感染組和正常對照組中性粒細胞CD35 MFI、CD11b MFI和CD64 MFI的比較

表2 細菌感染組和正常對照組中性粒細胞CD35 MFI、CD11b MFI和CD64 MFI的比較

?

表3 細菌感染組和正常對照組單核細胞CD35 MFI、CD11b MFI和CD64 MFI的比較

表3 細菌感染組和正常對照組單核細胞CD35 MFI、CD11b MFI和CD64 MFI的比較

?

2.2 細菌感染組和正常對照組白細胞CD35比值、CD11b比值和CD64比值的比較

細菌感染組CD35比值、CD11b比值及CD64比值均明顯高于正常對照組（P＜0.000 1）。見表4。

表4 細菌感染組和正常對照組CD35比值、CD11b比值和CD64比值的比較

表4 細菌感染組和正常對照組CD35比值、CD11b比值和CD64比值的比較

?

2.3 細菌感染組和正常對照組CD35感染指數、CD11b感染指數和CD64感染指數的比較

細菌感染組CD35感染指數、CD11b感染指數及CD64感染指數均明顯高于正常對照組（P＜0.000 1）。見表5。

表5 細菌感染組和正常對照組CD35感染指數、CD11b感染指數和CD64感染指數的比較

表5 細菌感染組和正常對照組CD35感染指數、CD11b感染指數和CD64感染指數的比較

?

2.4 CD35比值、CD11b比值和CD64比值診斷細菌感染的ROC曲線分析

ROC曲線分析顯示，CD35比值、CD11b比值和CD64比值診斷細菌感染的曲線下面積（area under curve，AUC）差異無統計學意義（P＞0.05）。見表6、圖1。

2.5 CD35感染指數、CD11b感染指數、CD64感染指數診斷細菌感染的ROC曲線分析

ROC曲線分析顯示，CD11b感染指數診斷細菌感染的AUC大于CD64感染指數（P＜0.05），CD35感染指數與CD64感染指數之間AUC差異無統計學意義（P＞0.05）。見表7、圖2。

表6 CD35比值、CD11b比值和CD64比值診斷細菌感染的ROC曲線參數

圖1 CD35比值、CD11b比值和CD64比值診斷細菌感染的ROC曲線

表7 CD35感染指數、CD11b感染指數、CD64感染指數診斷細菌感染的ROC曲線參數

圖2 CD35感染指數、CD11b感染指數、CD64感染指數診斷細菌感染的ROC曲線

3 討論

補體是人和脊椎動物血清與組織中的一組不耐熱、經活化后具有酶活性的蛋白質，并非單一成分，而是由30多種活性成分組成，包含補體及其調節因子和相關膜蛋白以及CR，故稱為補體系統，其廣泛參與了機體微生物防御反應及免疫調節等[5]。CR是指細胞表面能與補體成分或補體片段特異性結合的糖蛋白分子，按其功能可以分為3類，其中CR1（CD35）和CR3（CD116）都屬于膜結合C3片段的受體[6]。CR1和CR3表達于中性粒細胞、巨噬細胞等細胞的表面，參與細胞的吞噬、黏附等[2，6-7]。

CD35和CD11b在正常情況下只弱表達于中性粒細胞表面。當機體發生感染時，在一些炎癥因子和趨化因子等的影響下，CR高表達于中性粒細胞表面[8]。本研究采用流式細胞術檢測白細胞CD35 MFI和CD11b MFI。結果顯示，與正常對照組比較，細菌感染組CD35和CD11b在中性粒細胞和單核細胞上呈明顯高表達，而在淋巴細胞呈低表達；細菌感染組CD35比值、CD11b比值、CD64比值、CD35感染指數、CD11b感染指數和CD64感染指數均明顯升高。

目前，臨床應用較廣泛的判斷細菌感染的指標是中性粒細胞CD64[9]，可作為新生兒膿毒血癥的診斷指標[10]，也可以作為院內感染的快速檢測指標[11]，亦可作為CRP等感染指標的補充[12]。目前，已有學者在探索CD64的即時檢驗（point-of-care testing，POCT）方法[13]。這也證實了CD64對細菌感染具有較高的診斷價值。本研究結果顯示，CD11b感染指數診斷細菌感染的AUC大于CD64感染指數（P＜0.05），即CD11b感染指數的診斷性能優于CD64感染指數。因此，CD11b可以作為診斷細菌感染的良好指標。但由于本研究最終入選的樣本量較少，因此得出的結論還需要擴大樣本量進一步驗證。