正交設計優選白芍的樟幫法炮制白芍工藝研究

羅晶 雷志強 王雅琪

摘 要 為探討樟幫法生白芍的最佳浸潤條件與切制工藝，以芍藥苷含量、芍藥內酯苷含量、水溶性浸出物含量為指標，選擇浸潤溫度、浸潤時間、悶潤時間和切片厚度4個因素，采用L9（34）正交設計，綜合評分法優選白芍的炮制工藝。結果表明，樟幫生白芍的最佳浸潤與切制工藝為加60 ℃的水，浸潤1 h，悶潤72 h，飲片切制厚度0.5 mm。

關鍵詞 白芍 ；正交設計 ；樟幫法 ；炮制工藝

中圖分類號 S511 ；R282 文獻標識碼 A Doi：10.12008/j.issn.1009-2196.2018.07.017

Abstract In order to investigate the best infiltration and slicing technology of Radix Paeoniae Alba processed by the Zhangbang method， a L9（34） orthogonal design was arranged with the content of paeoniflorin， albiflorin， water-soluble extractives in radix as indicators， and the infiltrating temperature， infiltrating time， moistening time and slice thickness as the factors to evaluate the processing technologies for Radix Paeoniae Alba. The results showed that the best infiltration and slicing technology was to infiltrate Radix Paeoniae Alba for 1 hr in the 60℃ water， moisten it for 72 hours， and slice it with a thickness of 0.5 mm.

Key words Radix Paeoniae Alba ； orthogonal design ； Zhangbang method ； processing technology

白芍為毛莨科植物芍藥（Paeonia lactiflora Pall.）的干燥根[1]，味苦、酸，性微寒。主要含有芍藥苷（paeoniflorin）、芍藥內酯苷（albiflorin）、羥基芍藥苷（hydroxy-paeoniflorin）、苯甲酰芍藥苷（benzoyl-paeoniflorin）和苯甲酰羥基芍藥苷（benzoylhy-droxypaeoniflorin）等單萜苷類和苯甲酸、沒食子酸、兒茶素、鞣質等多種化學成分[2-6]。《中國藥典》2015年版收載，白芍為芍藥根經去皮水煮后的加工炮制品[7-9]。白芍多用其炮制品入藥，而浸潤和切制是白芍炮制的必備過程。

江西的中藥飲片炮制歷史悠久，在長期發展過程中，形成了獨具區域特色的以“樟樹幫”為代表的江西中藥炮制技術[10-15]。然而，樟幫炮制飲片質量標準仍然處于空白狀態，判斷標準依然依賴于老藥工的經驗，尚無“炮制規范”可循，缺乏系統的研究。樟幫法收載的白芍以浸、泡、潤、切為其特點，生品薄片的悶潤程度尤其重要，其直接影響后面的切制工藝，實際操作起來往往因水浸時間長短不等造成藥材有效物質基礎的流失差別不一，按照藥材質量生產工藝規范化管理，很有必要對其數量化[16]。本文就樟幫法中的浸潤與切制工藝對白芍飲片質量的影響進行探討，以期建立一套規范的白芍炮制工藝。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器

高效液相色譜儀Agilent1200，HH-2數字顯示恒溫水浴鍋（常州國華儀器有限公司），金利牌超聲波清洗器，TG328 B分析天平（浙江象山縣石浦海天電子儀器廠）。

1.1.2 試劑

乙腈為色譜純，甲醇、95%乙醇、磷酸均為分析純，水為二次蒸餾水；藥品：芍藥苷（中國藥品生物制品檢定所，批號110736-200629），芍藥內酯苷（DELTA天然有機化合物信息中心，批號20070591）；樣品購自樟幫中藥飲片廠，安徽亳州產，由江西中醫藥大學中藥鑒定教研室褚小蘭教授鑒定為毛茛科植物芍藥（Paeonia lactiflora Pall.）的干燥根。白芍飲片切制委托江西中醫院中藥制劑科炮制室按實驗要求加工而成。

1.2 方法

1.2.1 浸潤與切制

依據《中國藥典》2005年版（一部）附錄ⅡD關于藥材炮制通則的有關規定，將藥材凈制后，加飲用水浸潤一定時間使其柔軟，少泡多潤，以防有效成分流失。按藥材的大小、粗細、軟硬程度等不同分別處理。以溶劑浸潤溫度、浸泡時間、悶潤時間和飲片切制厚度為因素，按照L9（34）正交設計表設計試驗，優選軟化切制工藝（表1）。

1.2.2 浸出物含量測定

按中國藥典浸出物含量測定方法熱浸法測定浸出物含量[2]。

1.2.3 供試品溶液制備

各樣品經粉碎后過4號篩，分別精密稱取各炮制品3份，每份0.2 g于50 mL量瓶，75%乙醇為溶劑，超聲提取30 min，放冷，加75%乙醇至刻度，搖勻，過濾。取供試品樣品溶液，分別進樣20 μL，記錄芍藥內酯苷、芍藥苷峰面積，計算含量。

1.2.4 芍藥苷、芍藥內酯苷含量測定

（1）色譜條件：Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈（B）、0.05%磷酸水溶液（A），梯度洗脫條件：分析時間0～20 min，A 15%～18%，B 85%～82%；流速1.0 mL/min；檢測波長230 nm；柱溫：室溫（25℃）；進樣量20 μL。

（2）線性范圍考察。精密吸取不同濃度的對照品溶液，分別進樣20 μL，按上述色譜條件測定，記錄峰面積。以峰面積吸收值為縱坐標（Y），以含量為橫坐標（X）繪制標準曲線。

（3）精密度試驗和重復性試驗。分別精密吸取2個對照品溶液20 μL入高效液相色譜儀，按上述色譜條件重復進樣6次，計算RSD值。重復上述方法，精密稱取同一樣品6份，每份0.1 g，按供試品溶液制備方法進行提取處理后，按上述色譜條件進行分析測定。

（4）穩定性試驗與回收率試驗。精密稱取樣品，按供試品溶液制備，分別放置2、4、8、16、24、48 h后，按上述色譜條件測定，確定芍藥苷和芍藥內酯苷在48 h內的穩定性。并且采用加樣回收法對樣品進行回收率試驗，準確加入芍藥內酯苷對照品溶液（60.21 μg/mL）、芍藥苷對照品溶液（75.02 μg/mL），按選定色譜條件測定。

1.2.5 驗證試驗

取藥材3份，按優選工藝進行重復驗證試驗，測定芍藥內酯苷、芍藥苷的含量及浸出物含量，求綜合評分值。

1.2.6 數據處理

運用Excel 2003和DPS 7.05軟件進行數據處理與統計分析。

2 結果與分析

2.1 芍藥苷、芍藥內酯苷含量測定

對芍藥苷和芍藥內酯苷線性范圍考察結果表明，芍藥苷在10.93～350 μg/mL線性關系良好，回歸方程為Y=19.534X-39.528，相關系數r=0.999 9；而芍藥內酯苷在6.25～200 μg/mL線性關系良好，回歸方程為Y=17.383X-25.16，相關系數r=0.999 4。芍藥內酯苷和芍藥苷RSD分別為1.8%和2.0%（圖1），重復實驗結果顯示：芍藥內酯苷平均含量為1.34%，RSD為2.12%；芍藥苷平均含量為1.99%，RSD為1.19%（圖2）。穩定性試驗結果發現，芍藥苷和芍藥內酯苷在48 h內穩定性良好，相對標準偏差RSD分別為1.74%和2.09%。同時，芍藥內酯苷平均加樣回收率為99.90%，RSD為1.70%，芍藥苷平均加樣回收率為98.01%，RSD為1.49%。

2.2 優選白芍飲片浸潤與切制工藝條件

白芍飲片浸潤與切制工藝條件的優選結果按照上述實驗方法，分別以芍藥苷含量、芍藥內酯苷含量、水溶性浸出物含量為指標（其綜合評分比例分別為4∶5∶1），進行正交試驗，實驗數據見表2，結果分析見表3。

直觀分析結果，影響因素的大小順序為：D>A>B>C。由方差分析可以看出，本實驗設計中，因素飲片切制厚度（D）對白芍的軟化切制有顯著影響，結合直觀分析和方差分析及生產實際，最佳工藝為D1A3B1C3，即白芍飲片軟化切制的最佳方案為：加60℃的水，浸潤時間1 h，悶潤時間72 h，飲片切制厚度為0.5 mm 。

按優選工藝進行重復驗證試驗，測定芍藥內酯苷、芍藥苷的含量及浸出物含量，結果分別為83.00、82.98、83.03，RSD小于2%。該驗證試驗表明，正交試驗優選的工藝較佳，實驗結果理想。

2.3 樟幫法生白芍工藝的確定

樟幫法生白芍分白芍薄片和普通白芍飲片，白芍薄片由于其自身薄的特點使其易碎不易保存只能作為生品入藥，而普通白芍飲片則不僅可作為生品，還可以進一步炮制（如酒炒等），由于試驗條件和實際操作的限制，故樟幫法生白芍薄片最佳工藝為：取原藥材，揀去雜質、大小分檔加60℃的水，浸潤時間1 h，悶潤時間72 h，飲片切制厚度為0.5 mm；樟幫法生白芍普通飲片最佳工藝為：取原藥材，揀去雜質、大小分檔加60℃的水，浸潤時間1 h，悶潤時間72 h，飲片切制厚度為2 mm。

3 結論

白芍藥材質地堅硬，需較長時間的浸潤才能潤透，但水量不宜過多，以免傷水。白芍切制時應大小分檔，《中國藥典》2005年版（一部）規定，白芍應切為薄片，因此考察的切片厚度定為0.5～4 mm。

不同規格的白芍飲片中芍藥苷、芍藥內酯苷含量變化明顯，可見細化飲片切制厚度，規范軟化工藝是直接控制有效物質流失關鍵。因此建立合理的浸潤切制工藝參數，有助于減少藥材有效物質基礎的流失。從而保證臨床用藥可獲得穩定的療效。

樟幫法以白芍（薄片）切至“白芍飛上天”的程度為最佳，也使其成為具有特色的“樟樹幫”炮制工藝的商品飲片。然而，樟幫炮制飲片質量標準仍然處于空白狀態，尚無“炮制規范”可循，判斷標準依然依賴于老藥工的經驗。本試驗選擇不同指標結合綜合評價優化炮制工藝條件，為白芍中藥軟化切制工藝優選提供了較為科學全面的思路，也符合中醫藥治療疾病多成分綜合作用的特點。

參考文獻

[1] 任默蓮. 白芍的化學成分與生物活性研究[D]. 沈陽：沈陽藥科大學，2009.

[2] Wang Q Y， Liu R X， Guo H Z， et al. Study on influence of processing methods on chemical constituents in Radix Paeoniae Alba[J]. China Journal of Chinese Materia Medica， 2006， 31（17）： 1 418-1 421.

[3] 高小榮，田庚元. 白芍化學成分研究進展[J]. 中國新藥雜志，2006，15（6）：416-418.

[4] 杜曉娟，張振秋，楊燕云，等. 多指標正交設計優選白芍甘草（炙）藥對提取物的最佳提取工藝[J]. 遼寧中醫藥大學學報，2016，18（2）：32-34.

[5] 楊燕云，許 亮，解 海，等. 白芍甘草藥對治療原發性痛經實驗研究[J]. 遼寧中醫藥大學學報，2014，16（5）：107-109.

[6] 郭珊珊，王 謙，白立川，等. 芍藥-甘草配伍的研究進展[J]. 中草藥，2014，45（10）：1 481-1 485.

[7] 國家藥典委員會編. 中華人民共和國藥典[S]. 北京：中國醫藥科技出版社，2015.

[8] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典（一部）[S]. 北京：中國醫藥科技出版社，2010：231-232.

[9] 暢洪昇，王慶國，梁吉春.《傷寒論》四逆散證治及組方研究[J]. 北京中醫藥大學學報，2004，27（5）：3-5.

[10] 李 洋，吳蜀瑤，吳志瑰，等. 淺談樟樹幫炮制輔料米酒[J]. 江西中醫藥，2017，48（8）：3-5.

[11] 鐘凌云，于 歡，祝 婧，等. 炮制技術流派——樟樹幫藥文化探究[J]. 中國實驗方劑學雜志，2017，23（2）：1-6.

[12] 龔千鋒，祝 婧，周道根. 樟樹藥幫的歷史與特色[J]. 江西中醫藥大學學報，2007，19（4）：27-28.

[13] 龔千鋒.“樟樹幫”中藥傳統炮制特色[N]. 中國中醫藥報，2006-09-28（007）.

[14] 王小平. 建昌幫與樟樹幫、中國藥典法炮制的熟地黃中微量元素含量比較[A]//江西省科學技術協會、江西省中醫藥學會. 首屆江西省科協學術年會江西省中醫藥學術發展論壇論文集[C]. 江西省科學技術協會、江西省中醫藥學會，2010：5.

[15] 龔千鋒. “樟樹幫”、“建昌幫”中藥炮制的傳統特色[A]//中華中醫藥學會中藥炮制分會、山東鼎立中藥材科技有限公司. 中華中醫藥學會第六屆中藥炮制學術會議論文集[C].中華中醫藥學會中藥炮制分會、山東鼎立中藥材科技有限公司，2006：4.

[16] He Y， Zhao H D， He B X， et al. Study on process of soak and softening in Radix Paeoniae Alba[J]. Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae， 2006， 12（1）： 18-19.