3種治療小瓜蟲病藥物對斑點叉尾鮰幼魚的急性毒性研究

張世勇，王明華，邊文冀，王 江，鐘立強，陳校輝*

(1 江蘇省淡水水產研究所，南京 210017；2 江蘇省農業種質資源保護與利用平臺，南京 210014；3 江蘇農牧科技職業學院，泰州 225300)

斑點叉尾鮰(Ictalurespunctatus)亦稱美洲鯰、溝鯰，原產于美國，自1984年引入我國以來，已推廣到湖北、四川、重慶、江蘇、安徽等 20 多個省市，養殖規模和產量逐年增加，已成為我國重要的出口魚類[1-2]。我國斑點叉尾鮰在長期養殖過程中缺乏系統選育，再加上美國對種源出口的限制，出現了較為嚴重的種質退化現象，最為直接的影響就是病害現象頻頻暴發。小瓜蟲病在我國斑點叉尾鮰苗種階段的發病率較高，是目前國內外最為棘手的魚類疾病之一。據美國2002年水產統計數據，受小瓜蟲病影響損失量在900kg以上的苗種生產企業占到總生產企業數的42%[3]，至今國內外仍沒有有效的治愈小瓜蟲病的藥物和措施。

眾多研究人員在不斷地探索研究中發現相對有效的藥物主要有孔雀石綠、亞甲基藍、甲醛、辣椒素[4-5]。孔雀石綠、亞甲基藍等藥物具有明顯的致癌作用，已被世界眾多國家列為水產禁用藥。最新研究發現，從中草藥中提取的桑黃酮(Kuwanons)[6]、直立白薇甙(Cynatratoside-C)[7]、白屈菜赤堿(Chelerythrine)和茵芋堿(Chloroxylonine)[8]等藥物具有較好地殺滅小瓜蟲掠食體的作用，但因其高昂的成本很難應用于實際的防治過程中。因此，在養殖過程中用到最多且相對有效的防治藥物主要有甲醛、硫酸銅與硫酸亞鐵合劑、辣椒素以及敵百蟲等。本試驗旨在探討不同劑量的甲醛、硫酸銅與硫酸亞鐵合劑和敵百蟲對斑點叉尾鮰幼魚的急性毒性，以期為預防和治療斑點叉尾鮰小瓜蟲病以及其他水產疾病科學用藥提供指導。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

2016年9月，從江蘇省淡水水產研究所揚中基地6—7月繁育的44個斑點叉尾鮰家系中隨機挑選體重為20.0—30.0 g的健康幼魚1 000尾于室內水槽中暫養一周，暫養期間水溫為27.0—28.0 ℃，pH 7.8—8.2，溶解氧質量濃度>5 mgL，光照200—1 200 lx，試驗期間不進行投喂。

1.2 藥物

甲醛為分析純，含量37.0%—40.0%，色度≤15黑曾單位，購自上海久億化學試劑有限公司。硫酸銅與硫酸亞鐵均為分析純，使用時按 5∶2比例混合，兩種藥品均購自國藥集團股份有限公司。敵百蟲購自山西康潔藥業有限公司，有效成分質量分數≥90%。

1.3 方法

試驗全程在室內進行，使用養殖容量為150 L的塑料缸，試驗用水為經曝氣處理24 h的自來水，pH在7.7—8.0，硬度為250 mgL (以CaCO3計)，溶解氧質量濃度>5.0 mgL，光照200—1 200 lx，水溫(25±1 )℃，每個塑料缸飼養斑點叉尾鮰幼魚30尾，各放置一個充氣頭。

采用靜態急性毒性方法進行試驗。在正式試驗開始前進行48 h預試驗，根據常用魚病防治用量進行調整，觀察斑點叉尾鮰幼魚的活動以及存活狀況，并進行記錄，得出正式試驗藥物使用區間。每組試驗設置5個濃度組以及1個對照組，每組3個重復，濃度梯度按照等對數間距設置。試驗藥品先配置母液，溶劑為純凈水。使用時根據實際用量逐步稀釋使用，每24 h更換試驗藥液一次。試驗開始后進行連續觀察，記錄24 h、48 h、96 h后斑點叉尾鮰幼魚的存活情況并及時撈出死亡個體。實驗魚死亡標準為對玻璃棒觸碰無任何反應。

1.4 統計分析

不同時間段斑點叉尾鮰幼魚的半致死濃度(Half-lethal concentration，LC50)分別按照Karber’s法和Turubell公式計算：lgLC50=XK- a∑(Pi+Pi+1)；SC=B×0.3(CB)2

(1)

式中：LC50是半致死質量濃度，mgL；XK是最大劑量的對數，a是相鄰劑量比值的對數，Pi、Pi+1是各劑量組的死亡率(%)；SC是安全質量濃度，mgL；B是48 h的LC50，mgL；C是24 h的LC50，mgL。

2 結果與分析

2.1 甲醛對斑點叉尾鮰幼魚的急性毒性研究

甲醛急性中毒的實驗魚表現為亂竄、不安穩、浮頭，后期身體側翻失去平衡，最終死亡。兩組低質量濃度組的實驗魚活動情況與對照組相似，實驗魚大多靜伏于實驗箱底部，少數緩慢游動。甲醛為較低質量濃度(10.0 mgL和17.8 mgL)時，歷經96 h實驗魚的死亡率為0；中等質量濃度(31.6 mgL)時，歷經28 h出現死亡現象；最高質量濃度(100.0 mgL)時，歷經24 h的死亡率達100%。實驗魚死亡前均出現鰓蓋擴張，鰓絲淤血且邊緣發白，體表粘液大量分泌的現象。數據分析得出：甲醛對斑點叉尾鮰幼魚24 h的半致死質量濃度為74.51 mgL，48 h的半致死質量濃度為49.20 mgL，安全質量濃度為6.45 mgL(表1)。

2.2 敵百蟲對斑點叉尾鮰幼魚的急性毒性研究

在試驗中觀察到實驗魚進入較高濃度組和高濃度組試驗液后，幾分鐘即處于半昏迷狀態，浮于水面不動，對刺激有反應，反應遲鈍，體色變淺，體表粘液分泌增多。斑點叉尾鮰幼魚死亡時，身體均彎曲；存活的實驗魚應激反應強烈。敵百蟲為最低質量濃度(1.00 mgL)時，歷經96 h死亡率為0；較低質量濃度(3.16 mgL)時，歷經10 h出現死亡，歷經96 h仍保持較低的死亡率；較高質量濃度(5.62 mgL)時，各時段死亡率均急劇上升；最高質量濃度(10.00 mgL)時，歷經24 h的死亡率達100%。數據分析得出：敵百蟲對斑點叉尾鮰幼魚24 h的半致死質量濃度為5.58 mgL，48 h的半致死質量濃度為3.84 mgL，安全質量濃度為0.54 mgL(表2)。

表1 甲醛對斑點叉尾鮰幼魚的急性毒性結果

表2 敵百蟲對斑點叉尾鮰幼魚的急性毒性結果

2.3 硫酸銅與硫酸亞鐵合劑對斑點叉尾鮰幼魚的急性毒性研究

表3 硫酸銅與硫酸亞鐵合劑對斑點叉尾鮰幼魚的急性毒性結果

3 討論與結論

安全濃度為水體中含有藥物最高允許濃度，水產養殖水體藥物安全濃度問題一直受到國內外有關部門的注意。這不僅考慮到養殖水體中水生動物的存活問題，而且直接或間接影響到人、畜禽等的健康。研究養殖水體藥物安全濃度對于指導水產養殖業安全生產具有重要意義。

甲醛是原漿毒物質，能與蛋白質結合，溶解類脂，具有強烈的殺菌作用，是強烈的殺菌劑，在安全的使用范圍內可以很好地應用于水產養殖過程中細菌類、真菌類和寄生蟲類疾病的預防和治療。本試驗得出的安全質量濃度為6.45 mgL，與長吻鮠(6.6 mgL)[9]以及麥周明[10]得出的斑點叉尾鮰安全濃度較為一致。在目前已見的相關報道中，甲醛是水產養殖上預防和治療寄生蟲和真菌類疾病的理想藥物，可以較為有效地預防和治療斑點叉尾鮰小瓜蟲病和水霉病。在水霉病的防治方面，目前普遍使用15—30 mgL的甲醛溶液進行全池潑灑，用藥后可基本控制病情的蔓延；嚴重時可3 d后重復潑灑，能夠達到有效的治療。治療小瓜蟲時，一般采用30 mgL的甲醛溶液進行全池潑灑，每天潑灑一次，連用5 d，可有效控制小瓜蟲病。

敵百蟲屬于有機磷殺蟲劑，其殺蟲機理是將膽堿酯酶的活性位點磷酸化從而抑制其活性，最終使神經機能停止以達到殺蟲的作用。本試驗得出的安全質量濃度為0.54 mgL，低于王武等[11]和黃琪琰[12]推薦的治療吸蟲和甲殼綱寄生蟲的潑灑濃度，高于麥周明[10]與張小立等[13]推薦的安全濃度，究其原因可能是其試驗所選實驗魚規格偏小，耐受力較低。敵百蟲在弱堿性條件下，可形成殘毒性更大的敵敵畏，當pH為8—10時，敵百蟲轉變成敵敵畏僅需0.5 h，因此使用時不僅需要控制好劑量，還需要在使用前對水體pH進行測定，以防不當操作對養殖魚類和使用者造成傷害。

硫酸銅與硫酸亞鐵合劑在殺滅體外寄生蟲時硫酸銅起主要的作用，而硫酸亞鐵主要起著輔助藥物的作用，通常用來輔助硫酸銅殺滅一些比較難以殺滅的寄生蟲[14]。本試驗得出的安全質量濃度為0.77 mgL，較張小立等[13]得出的安全質量濃度(0.4446 mgL)略高，究其原因可能是本試驗所選取實驗魚規格較大，耐受力較高。影響硫酸銅殺滅病原體能力的因素有很多，如水溫、硬度、pH和水體有機物含量等。pH越高、水中的有機物越多，硫酸銅的毒性就會越小，反之越大[15]。因此，在使用硫酸銅硫酸亞鐵合劑的時候一定要考慮到各個方面的因素，嚴格控制硫酸銅的含量，以控制毒性。硫酸銅在魚體內過量積累能夠抑制抗氧化酶活性，從而引起魚類腎組織壞死、破壞造血組織等[16]。除此之外，銅離子還能夠殘留于鰓、肌肉等組織內，影響魚正常的攝食和生長，所以切勿過于頻繁使用硫酸銅。

本試驗表明，甲醛、敵百蟲、硫酸銅與硫酸亞鐵合劑(5∶2)對斑點叉尾鮰幼魚24 h的半致死質量濃度為74.51 mgL、5.58 mgL、6.97 mgL，48 h的半致死質量濃度為49.20 mgL、3.84 mgL、4.99 mgL，安全質量濃度為6.45 mgL、0.54 mgL、0.77 mgL。三種藥物毒性大小依次為敵百蟲、硫酸銅與硫酸亞鐵合劑(5∶2)、甲醛。本研究結果可為預防和治療斑點叉尾鮰小瓜蟲病及其他疾病提供指導。