探討補陽還五湯類方成分的藥代動力學比較研究

宋亞娟

【摘 要】目的：對比分析補陽還五湯類方（補陽還五湯和腦健片）中阿魏酸、洋川芎內酯A、藁本內酯在大鼠體內的藥代動力學特征。方法：將補陽還五湯類方灌胃頸靜脈插管大鼠，采用HPLC-DAD法同時檢測3種成分在不同時間點的血藥濃度，經DAS2.0計算得單成分的藥代動力學參數，再采用總量統計矩（相似度）法整合成整體藥代動力學參數并進行比較。結果：3種成分在體內的總量統計參數相差甚遠，而3種成分總和的統計矩參數卻比較接近，補陽還五湯和腦健片在大鼠體內AUC分別為240.6和133.0，MRT分別為3.192 min和3.259 min，VRT分別為21.59 min2和19.75 min2；補陽還五湯和腦健片中3種成分總量的相似度達到0.977 8。結論：補陽還五湯和腦健片在體內代謝過程具有相似性，中藥復方發揮功效依賴于多成分的整體貢獻。

【關鍵詞】藥代動力學；補陽還五湯；腦健片；阿魏酸；洋川芎內酯A；藁本內酯

【中圖分類號】R749.053 【文獻標志碼】B 【文章編號】1005-0019（2018）10-094-01

補陽還五湯類方包括補陽還五湯及其精簡方（腦健片）。補陽還五湯出自《醫林改錯·癱痿論》，由黃芪、川芎、當歸等7味中藥組成，系清代醫家王清任創立的治療半身不遂辨證屬氣虛血瘀證的經典名方。腦健片處方是遵循補陽還五湯之方義，秉承“益氣祛瘀生新法”，將補陽還五湯精簡為黃芪、川芎和地龍，經過二次開發而成的新型制劑。本課題組前期研究表明，腦健片治療腦缺血療效顯著[1-2]，現進一步對其代謝動力學進行研究，選擇補陽還五湯類方均含有的阿魏酸、洋川芎內酯A、藁本內酯3種入血成分為檢測指標，研究大鼠灌胃后體內藥代動力學參數變化，旨在探討精簡方配伍變化后其同類成分的藥物動力學變化行為。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑 補陽還五湯干浸膏（黃芪120 g，當歸6 g，赤芍4.5 g，川芎3 g，紅花3 g，桃仁3 g，地龍3 g）和腦健片干浸膏（黃芪30 g，川芎9 g，地龍6 g）均由湖南省中醫藥研究院中藥所張水寒教授提供，所有藥材質量均符合2010年版《中華人民共和國藥典》標準。補陽還五湯按傳統水煎法濃縮干燥后制備成干浸膏，相當于原藥材4.5 g/g。腦健片按新工藝制備，其中川芎以揮發油量為考察指標，對川芎粗粉進行SFE-CO2萃取，不加夾帶劑，提取1.5 h；地龍以醇浸膏得率及氮含量為指標，溫浸2次，第1次加5倍量50%乙醇溫浸48 h，第2次加4倍量50%乙醇溫浸48 h；再合并藥渣，與黃芪藥粉一同水煎，所有藥液濃縮干燥后即得干浸膏，相當于原藥材4.7 g/g。

阿魏酸對照品（批號MUST-12112204）、洋川芎內酯A對照品（批號MUST-12121202）、藁本內酯對照品（批號MUST- 12082702），北京盈澤納新化工技術研究院；乙腈，美國Tedia公司，色譜純；甲醇，美國Tedia公司，色譜純；怡寶純凈水（華潤怡寶飲料有限公司），其他試劑均為分析純。

1.2 儀器 Instech自動采血系統（Instech Solomon公司），離心濃縮儀（Centri Vap，LABCONCO），Agilent-1260型高效液相色譜儀，配有自動進樣器，四元梯度泵，在線真空脫氣機，柱溫箱和二極管陣列檢測器（DAD）；超聲波清洗儀（SB-3200D，寧波新其生物科技股份有限公司），分析天平（JA-3003，上海恒平科學儀器有限公司），Elipse XDB-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，安捷倫公司）。

1.3 動物 SPF級雄性SD大鼠20只，9～10周齡，體質量260～300 g，湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，許可證號SCXK（湘）2011-0003。室溫無菌喂養，自由飲食飲水。

1.4 分組、給藥及處理 建立大鼠實時活體采血方法。將SD大鼠麻醉后固定于手術臺上，切開頸下靜脈，分離頸靜脈，埋線，待血液充盈時用眼科剪將頸靜脈剪開一小口，插入特制PU軟管約20 mm深并固定，縫合傷口。灌胃后將插管大鼠與Instech自動采血系統連接。將頸靜脈插管的健康SD大鼠分為補陽還五湯組和腦健片組，每組5只。二方均以4倍于人體劑量的原藥材給藥[3]，折算成干浸膏量分別為12.04 g/kg體質量和9.64 g/kg體質量。灌胃前采血作為空白血漿，再分別于5、15、30、45、60、90、120、180、240、300、360、480 min采血0.5 mL，并取上層血漿，-80 ℃冰箱保存備用。

1.5 供試品溶液的制備 取藥物血漿100 μL，加0.1 mol/L鹽酸50 μL，混勻后加800 μL乙酸乙酯，渦旋震蕩5 min，8000 r/min離心10 min，取上清液；重復上述操作，合并上清液，離心濃縮儀揮干溶劑后殘渣用50 μL甲醇復溶。

1.6 對照品溶液的制備 分別精密稱量阿魏酸、洋川芎內酯A、藁本內酯對照品，用甲醇溶液制成濃度分別為0.125、0.1、2.5 g/L的標準溶液。其中阿魏酸對照品溶液中含5%乙酸，4 ℃冰箱避光保存備用，藁本內酯-20 ℃冰箱避光保存備用。

1.7 色譜條件 本研究采用HPLC-DAD法與腦健片體外成分測定建立的方法[4]一致。色譜條件：Elipse XDB-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 ？m），柱溫30 ℃；以0.3%乙酸水（A）和乙腈（C）為流動相進行梯度洗脫（0～5 min，15% C；5～30 min，15%～31% C；30～32 min，31%～36% C；32～82 min，36%～72% C；82～90 min，72%～95% C），流速1.0 mL/min；檢測波長為阿魏酸325 nm、洋川芎內酯A 280 nm、藁本內酯328 nm。

1.8 數據分析 采用DAS2.0軟件，分別獲得阿魏酸、洋川芎內酯A和藁本內酯3種成分的經典藥代動力學參數，參照文獻[5-6]按總量統計矩（相似度）法計算藥代動力學總量統計矩參數，并進行比較分析。

2 結果

系統適用性與專屬性考察

分別取空白血漿，加入阿魏酸、洋川芎內酯A、藁本內酯標準品溶液的空白血漿，補陽還五湯和腦健片給藥后30 min的藥物血漿樣本，處理后上樣分析。結果顯示血漿中內源性物質不干擾測定，該方法專屬性良好。根據前期研究結果，由保留時間和紫外光譜圖確定1號峰為阿魏酸，2號峰為洋川芎內酯A，3號峰為藁本內酯[4]。

3 討論

中藥發揮藥效往往取決于多種藥效成分的協同作用，講究君臣佐使配伍原則。采用傳統西藥藥代動力學模型對中藥復方藥代參數進行分析，發現同一藥效成分在不同藥效部位、不同藥材及不同配伍復方中的藥代動力學特征均不盡相同。采用傳統西藥單一成分藥代動力學模型對中藥多成分在體內藥代動力學行為進行評價存在一定的局限性，不能充分體現補陽還五湯類方整體成分在體內的真實代謝過程。本研究采用總量統計矩參數對經典房室模型的藥動參數繼續深入分析，既能反映總量藥物濃度的動力學行為，又能與單個成分的統計矩參數關聯，是整合多成分藥物動力學較宜的數學處理方法，同時更能體現出中藥多種化學成分多靶點、多途徑、多環節進行整合調節的優越性。

參考文獻

[1] 劉芳，劉青萍，王宇紅，等.補陽還五湯及其精簡方抗腦缺血損傷功效比較[J].中國中醫藥信息雜志，2014，21（9）：46-49.

[2] 劉芳，王宇紅，蔡光先，等.補陽還五湯及其精簡方（腦健片）對腦缺血大鼠海馬組織CDK4/Cyclin D1表達的影響[J].中國中藥雜志，2015， 40（20）：4058-4062.

[3] 夏相宜，王宇紅，蔡光先，等.腦健膠囊對MCAO大鼠腦水腫、腦梗死面積及體質量的影響[J].中醫學報，2014，29（4）：532-534.