D7-CRP型全自動血細胞分析儀臨床性能評價

陳 娟 吳志成* 楊恒歌 賴小婷

在臨床中C反應蛋白(C-reactive protein，CRP)與白細胞聯(lián)合檢測應用廣泛，但同時檢測血常規(guī)及全血CRP的一體機目前較為少見[1]。D7-CRP型全自動血細胞分析儀能夠進行全血細胞計數(shù)、白細胞5分類和CRP測定。該儀器采用庫爾特原理檢測紅細胞(red blood cell，RBC)、血小板(platelet，PLT)的數(shù)目和體積分布，采用半導體激光流式技術測量白細胞總數(shù)(white blood cell，WBC)并對其進行分類。采用免疫散射比濁法進行CRP檢測，并根據(jù)樣本中血細胞壓積結(jié)果對CRP結(jié)果進行修正。該儀器有多種進樣方式，既可以自動也可以手動，既可以采用靜脈血也可以用末梢血進行測量，血量少時還可以用微量稀釋再測定，適合于那些很難采到血液樣本的患者，且操作維護簡單。根據(jù)“全國臨床檢驗操作規(guī)程”和實驗室對血細胞分析儀的基本要求，本研究對D7-CRP型全自動血細胞分析儀主要性能進行評價，并與日本XN-9000型全自動血細胞分析儀進行比對實驗，檢驗其是否符合國家衛(wèi)生行業(yè)標準(WS/T406-2012)以及實驗室高效檢驗的要求。

1 材料與方法

1.1 實驗樣本

選取北京大學深圳醫(yī)院門診檢驗科2017年10月至2018年1月就診的47例門診患者的47份血樣標本，采集其含乙二胺四乙酸抗凝血1.5～2.0 ml備用，所有樣本均在4 h內(nèi)檢測完畢。

1.2 儀器與試劑

(1)D7-CRP全自動血細胞分析儀(深圳帝邁公司)及其原裝配套試劑：①LYA-1。批號為20170619，效期為20190618；②LYA-2。批號為20170624，效期為20190623；③LYA-3。批號為20170615，效期為20190614；④DIL-A。批號為20171017，效期為20191016；⑤CRP-R1。批號為20180801，效期為20190731；⑥CRP-R2。批號為20180801，效期為20190731。

(2)XN-9000全自動血細胞分析儀(日本Sysmex公司)及原裝配套試劑、質(zhì)控品及校準品。

(3)血球及CRP質(zhì)控品：①血球。批號為E5125-02，效期為2018-1-10；②CRP。批號為463LPC，效期為2018-6-28，Randox提供。

(4)校準品。批號為PLUS1117，效期為2017-12-5。

(5)線性評價物。批號為CL123，效期為2017-11-25，美國R&D Systems提供，均在有效期內(nèi)使用。

1.3 檢測方法

根據(jù)國家衛(wèi)生行業(yè)標準(WS/T406-2012)“臨床血液學檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量要求”進行操作，對D7-CRP型全自動血細胞分析儀的WBC、RBC、血紅蛋白(hemoglobin，HGB)、紅細胞平均體積(mean corpuscular volume，MCV)、PLT的本底計數(shù)、攜帶污染率、批內(nèi)/日間精密度、線性、正確度、不同吸樣模式的結(jié)果可比性、實驗室內(nèi)的結(jié)果可比性和準確度以及CRP的本底計數(shù)、攜帶污染率、精密度等方面進行評價。所有操作均嚴格按照“全國臨床檢驗操作規(guī)程”[2]的要求，判斷標準參考國家衛(wèi)生行業(yè)標準(WS/T406-2012)[3]。

1.4 檢測與評價指標

(1)空白計數(shù)。用稀釋液作為樣本在分析儀上連續(xù)檢測3次，3次檢測結(jié)果的最大值應在允許范圍內(nèi)。

(2)攜帶污染率[4]。分別針對不同檢測項目，取一份高濃度的臨床樣本(EDTA-K2或EDTA-K3抗凝靜脈血)，混合均勻后連續(xù)測定3次，測定值分別為H1、H2及H3；再取一份低濃度的臨床樣本，混合均勻后連續(xù)測定3次，測定值分別為L1、L2及L3。其攜帶污染率計算為公式1：

(3)高值樣本要求。①WBC＞90.0×109/L；②RBC＞6.20×1012/L；③HGB＞220 g/L；④PLT＞900×109/L。

(4)低值樣本要求。0＜WBC＜3.0×109/L，0＜RBC＜1.50×1012/L，0＜HGB＜50 g/L，0＜PLT＜30×109/L。

(5)精密度。①批內(nèi)精密度：取1份濃度水平在[WBC：(4.0～10.0)×109/L、RBC：(3.5～5.5)×1012/L、HGB：(110～160)g/L、HCT：(35～55)%、MCV：(80～100)fl、MCH：(27～34)pg、MCHC：(320～360)g/L、PLT：(100～300)×109/L]的臨床樣本，按常規(guī)方法重復檢測11次，計算后10次檢測結(jié)果和算術平均值和標準差，計算變異系數(shù)；②日間精密度：取同批號高、中、低3個水平的質(zhì)控品，連續(xù)檢測20 d，每份標本在檢測當日至少進行1次室內(nèi)質(zhì)控，剔除失控數(shù)據(jù)(失控結(jié)果已得到糾正)逐項計算20 d內(nèi)檢測結(jié)果的變異系數(shù)。

(6)線性。分別使用濃縮及稀釋的方法獲得接近檢測上限(廠商制定)的高值樣本，及略高于檢出限的低值樣本，根據(jù)臨床常見值確定線性驗證的濃度系列，配制不同濃度的樣本，每份樣本重復檢測3次，計算平均值，將實測值(Y)與理論值(X)作比較，計算Y=aX+b，驗證線性范圍應符合美國實驗室標準化委員會(The Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI)的EP6文件要求[5]：a值在1.00±0.05范圍內(nèi)，相關系數(shù)≥0.975。

(7)正確度。選擇10份檢測結(jié)果在參考區(qū)間內(nèi)的健康體檢者的新鮮血樣本，每份樣本檢測2次，以實驗室內(nèi)部規(guī)范操作檢測系統(tǒng)(XN-9000儀器檢測系統(tǒng))為評價標準，分別計算D7-CRP型全自動血細胞分析儀和XN-9000型全自動血細胞分析儀2種儀器所有檢測結(jié)果的均值，以XN-9000型全自動血細胞分析儀的檢測均值為標準，計算偏倚。

(8)不同吸樣模式的結(jié)果可比性[6]。每次校準后，取5份臨床樣本分別使用不同模式進行檢測，每份樣本各檢測2次，以開放模式為標準，分別計算不同模式下檢測結(jié)果均值間的相對差異[7]。

(9)實驗室內(nèi)的結(jié)果可比性。選取20份臨床新鮮全血樣本，分別在D7-CRP型和XN-9000型全自動血細胞分析儀進行檢測。XN-9000型全自動血細胞分析儀已校準，并參加國家臨床檢驗中心室間質(zhì)量控制，所有室間質(zhì)量控制結(jié)果均在控，評價方案和標準參照原衛(wèi)生部2012版“臨床血液學檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量要求”和CLSI批準的EP9-A2文件[8]計算D7-CRP型與XN-9000型全自動血細胞分析儀之間的相對偏差。要求20份標本中16份滿足此標準為比對合格[9]。具體要求：①WBC偏差≤±7.5%(當WBC＜2×109/L時，其偏差≤±10.0%)；②RBC偏差≤±3.0%；③HGB偏差≤±3.5%；④HCT偏差≤±3.5%；⑤MCV偏差≤±3.5%；⑥PLT偏差≤±12.5%(當PLT＜40×109/L時，其偏差≤±10.5%)。

(10)準確度。取5份定值臨床樣本分別進行單次檢測，定值臨床樣本由XN-9000型全自動血細胞分析儀上檢測所得。XN-9000型全自動血細胞分析儀已校準，并參加國家臨床檢驗中心室間質(zhì)量控制，所有室間質(zhì)量控制結(jié)果均在控。計算每份樣本檢測結(jié)果與靶值的相對偏差，每個檢測項目的相對偏差符合下述要求的比例應≥80%，相對偏差=(檢測結(jié)果-靶值)÷靶值×100%。

1.5 統(tǒng)計學方法

檢測所得數(shù)據(jù)均使用Microsoft Excel軟件進行統(tǒng)計學分析，線性范圍評價試驗的相關性采用線性回歸分析。

2 結(jié)果

2.1 本底計數(shù)檢測

對D7-CRP型全自動血細胞分析儀使用稀釋液作為樣本連續(xù)檢測3次，WBC、RBC、HGB及PLT本底結(jié)果滿足國家衛(wèi)生行業(yè)標準(WS/T406-2012)的要求；CRP的本底結(jié)果均為0.0 mg/L，滿足企業(yè)要求，見表1。

2.2 攜帶污染率檢測

按檢測方法要求，對D7-CRP型全自動血細胞分析儀分別使用滿足要求的樣本測試，WBC、RBC及PLT計數(shù)及HGB的攜帶污染率分別為0.03%、0.26%、0.11%和0.0%，滿足國家衛(wèi)生行業(yè)標準(WS/T406-2012)的要求；CRP攜帶污染率滿足企業(yè)要求，見表2。

表1 本底計數(shù)評價試驗結(jié)果

2.3 精密度檢測

2.3.1 批內(nèi)精密度

按檢測方法要求，對D7-CRP型全自動血細胞分析儀使用符合要求的樣本測試，其結(jié)果見表3。其中，WBC、RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC及PLT的批內(nèi)精密度分別為1.65%、0.54%、0.51%、0.53%、0.17%、0.37%、0.42%以及1.96%，符合國家衛(wèi)生行業(yè)標準(WS/T 406-2012)的要求；CRP批內(nèi)精密度滿足企業(yè)要求。

表2 攜帶污染率評價試驗結(jié)果

表3 批內(nèi)精密度正常水平評價試驗結(jié)果

2.3.2 日間精密度

按前述檢測方法試驗，對D7-CRP型全自動血細胞分析儀使用質(zhì)控物連續(xù)20 d后，統(tǒng)計WBC、RBC、PLT、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC及PLT的低、中、高水平質(zhì)控物的日間精密度，均符合國家衛(wèi)生行業(yè)標準(WS/T406-2012)的要求；CRP日間精密度滿足企業(yè)要求，見表4。

2.4 線性檢測

按照線性檢測方法，D7-CRP型全自動血細胞分析儀WBC的線性范圍為0.00～356.46×109/L、RBC的線性范圍為0.00～9.02×1012/L、HGB的線性范圍為0～263 g/L、HCT的線性范圍為0.0～91.3%、PLT的線性范圍為0～6166×109/L，均能滿足廠商的要求，相關系數(shù)r均≥0.975，符合國家衛(wèi)生行業(yè)標準(WS/T406-2012)的要求，見表5。

2.5 正確度檢測

按正確度檢測方法測試，對D7-CRP型全自動血細胞分析儀驗證檢測系統(tǒng)的正確度，WBC、RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC及PLT的偏倚分別為-0.66%、-1.61%、0.00%、-1.75%、-0.18%、1.66%、1.80%、0.08%，均符合國家衛(wèi)生行業(yè)標準(WS/T406-2012)的要求，見表6。

表4 日間精密度評價試驗結(jié)果

表5 線性評價試驗結(jié)果

表6 正確度評價試驗結(jié)果

表7 不同吸樣模式結(jié)果可比性評價試驗結(jié)果

表8 實驗室內(nèi)結(jié)果可比性試驗評價結(jié)果

2.6 不同吸樣模式結(jié)果可比性

按不同吸樣模式檢測方法試驗，對D7-CRP型全自動血細胞分析儀以開放模式為標準，與自動進樣模式結(jié)果比對，WBC、RBC、HGB、HCT、MCV以及PLT的偏差均符合國家衛(wèi)生行業(yè)標準(WS/T406-2012)的要求，見表7。

2.7 實驗室內(nèi)結(jié)果可比性

按實驗室內(nèi)檢測方法試驗，D7-CRP型全自動血細胞分析儀的WBC、RBC、PLT計數(shù)，HGB、HCT、MCV、MCH及MCHC的實驗室內(nèi)的結(jié)果可比性均符合國家衛(wèi)生行業(yè)標準(WS/T 406-2012)的要求，見表8。

2.8 準確度檢測

按照準確度檢測方法試驗，D7-CRP型全自動血細胞分析儀的WBC、RBC、PLT計數(shù)，HGB、HCT、MCV、MCH及MCHC的準確度均符合國家衛(wèi)生行業(yè)標準(WS/T406-2012)的要求，見表9。

3 討論

由于科學技術的進步，臨床檢驗設備越來越先進，隨著技術的不斷引進與吸收消化，國產(chǎn)大型醫(yī)療儀器設備的設計與制造日漸走向成熟，相信在不久的將來國產(chǎn)大型醫(yī)療設備一定會在世界上占有一席之地[10]。

表9 準確度試驗評價結(jié)果

本研究通過對D7-CRP型全自動血細胞分析儀主要性能評價發(fā)現(xiàn)，該儀器全血細胞計數(shù)與CRP檢測各參數(shù)空白試驗良好，極低的攜帶污染率完全符合設計需求，精密度均小于規(guī)定的質(zhì)量評價標準允許誤差。精密度試驗表明儀器有較高重復性，能滿足臨床應用的要求，通過與參加全省實驗室室間質(zhì)評的國外同類儀器比較均在行業(yè)標準范圍內(nèi)，表明D7-CRP型全自動血細胞分析儀具有良好的準確性和可靠性[11]。

D7-CRP型全自動血細胞分析儀的主要性能達到國家衛(wèi)生行業(yè)標準(WS/T406-2012)規(guī)定的要求，能滿足血細胞檢測的一般需要。儀器總體設計合理、操作簡單，具有高度自動化和智能化，有較強的質(zhì)量控制功能，并有故障自檢功能，故障時可提示故障類型和相應自動處理措施，有較完善的保養(yǎng)功能，進樣針和管道系統(tǒng)可自動沖洗，對檢驗結(jié)果的質(zhì)量保障起了重要的作用[12-13]。

D7-CRP型全自動血細胞分析儀帶有20 μl微量血液預稀釋模式功能，可以滿足幼兒及其他特殊人群血常規(guī)檢查需求，是一款性能優(yōu)良的國產(chǎn)全自動血細胞分析儀，可滿足臨床實驗室的需要。