阿卡波糖有關雜質制備方法研究

邵鑫鑫 陳才 姚偉敏

摘 要：按照不同的酸、堿條件對阿卡波糖的降解反應，可以獲取不同的雜質。同時在不同的酸堿濃度、溫度等條件上也會對雜質產生比較顯著的影響。阿卡波糖能夠對糖尿病患者起到很好的治療作用，屬于非胰島素依賴性藥物，可以幫助輕度糖尿病患者實現自身胰島素的分泌，但是受到分泌量不足的影響，患者會出現胰島素敏感度下降等情況，對血糖影響比較嚴重。針對這種情況，本文也將針對阿卡波糖中的雜質制備方法進行研究，希望對這項研究工作的開展起到更為有效的幫助。

關鍵詞：阿卡波糖；雜質；制備方法

DOI：10.16640/j.cnki.37-1222/t.2018.17.017

阿卡波糖的工業生產主要是借助微生物發酵法，也就是大游動放線菌合成的假四糖類次級代謝物。但是經過實際研究可以發現，阿卡波糖在發酵環節中除了會生產阿卡波糖之外，還會出現相應的結構類似物質，這也是阿卡波糖中的主要雜質。如果在阿卡波糖中含有一定量的雜質，不僅會對藥物的純度會造成影響，嚴重的還將直接威脅到藥物的安全性與穩定性。所以在此種背景下進行雜質研究，提升阿卡波糖藥物質量也是一項極具社會意義的工作。

1 實驗概述

1.1 材料和試劑

本文所研究的阿卡波糖主要是由杭州中美華東制藥公司提供。在這項工作中所采用的試劑大多為分析純度試劑，這些試劑均由天津市永大化學試劑公司所生產，實驗室中所用的水都為超純水[1]。

1.2 儀器和設備

這項工作中主要采用的設備和儀器為：Barnstead TII 超純水系統、半制備液的相色譜儀等。

1.3 實驗方法

（1）液相色譜檢測條件。要先將選取的樣品溶解在純水中，保證其溶液濃度為2mg/L，進行該操作時要按照歐洲藥典來進行，同時，使用將磷酸緩沖鹽作為流動相，并測出液相色譜[2]。

（2）液質連用分析條。高效液相色譜環節為Aglient1100，液相條件也上文實驗結果一致，但是為了避免出現不揮發鹽對質譜的毛細管造成堵塞。在此環節中噴霧電壓需要控制在4kV，毛細管的溫度要在300攝氏度以上，并在此環節中對的正負離子模式下的工作進行有效檢測。

（3）酸降解液的制備。先將阿卡波糖樣品加入到濃度為12mol/L的驗算溶液中，將其濃度進行有效轉變，并在恒溫條件下將其溫度控制在25攝氏度，在靜置一小時后，借助氫氧化鈉溶液將其調整至中性。

2 結果分析和討論

實驗中要借助相應的技術對阿卡波糖降解液中的成分進行檢測，從而實現對雜質的有效定位。

2.1 酸降解結果分析

通過對酸降解需要借助液質聯用分析，HPLC色譜圖的研究結果表示，在保留時間在27分鐘左右的時候會明顯出現一個離子峰值的變化，通過此種方式可以對保留時間、離子峰的結果都和阿卡波糖相同，由此可以確定為阿卡波糖。當保留時間在16分鐘左右也將出現一個明顯的離子峰，按照相關資料的研究，雜質對阿卡波糖的保留值將達到0.6[3]。

2.2 堿降解結果分析

分析過程中，按照對液質聯用對堿降解液進行分析，HPLC色譜圖中和季峰離子流進行分析可以發現，在保留時間在25分鐘左右和27分鐘左右的時候都會出現離子峰。根據相關資料的研究，阿卡波糖和雜質分子量一致，通過上文的研究，兩個研究結果中產生的雜質保留時間來對制備雜質條件進行進一步考察。

2.3 溫度對堿降解的影響

在這項實驗需要抽取樣品，并且將不同的樣品劃分為五組，在樣品中分別加入0.5mol/L的氫氧化鈉溶液，在恒溫培養箱的溫度分別控制為15，20，25，30和35攝氏度。最終可以發現，30攝氏度時雜質的質量分數最高，而較低的溫度很難進行有效的降解，溫度一旦過高也很容易出現分解環節中其他雜質的出現，所以降解反應最為合適的溫度就是三十攝氏度[4]。

2.4 堿濃度對降解的影響

先選取不同濃度為0.5mol/L、1mol/L、1.5mol/L的NAOH溶液，在此環節中進行對阿卡波糖的降解實驗，在兩個小時后用鹽酸溶液進行調節，并將其轉變為中性。通過氫氧化鈉濃度的逐漸提升，雜質中的質量分數也將大大降低，這對于講解雜質也將起到十分重要的幫助。

3 小結

阿卡波糖其實就是一種將α-葡萄糖苷酶作為抑制劑，并且具備較強復雜性的低聚糖，其結構和寡糖更相似，但是這種非寡糖的“假寡糖”能在人體的小腸上部細胞刷狀緣處和寡糖競爭而與α-葡萄糖苷酶可逆地結合，通過對α-葡萄糖苷酶，比如我們經常在實驗中接觸的麥芽糖酶、異麥芽糖酶或蔗糖酶之間的活性，在工作中對其進行淀粉分解為寡糖，比如經常在實驗中接觸的麥芽糖等低聚糖，通過這種方式將其分解葡萄糖過程進行合理控制，并且對于蔗糖分解成果糖的速度也要進行充分控制，以此實現對腸道葡萄糖的吸收減慢，有效實現對餐后高血糖問題的降低，達到降低血糖的目的[5]。長期服用，可降低空腹血糖和糖化血紅蛋白的濃度。因此在今后的研究工作中，對阿卡波糖的雜質進行降低和有效處理也將起到十分有效的指導意義。

通過本文的研究，認為對雜質制備方法進行有效應用，可以更為準確和有效的鑒別雜質，并對時間和分子量進行保留。阿卡波糖在發酵環節中除了會生產阿卡波糖之外，還會出現相應的中結構類似物質，這也是阿卡波糖中的主要雜質。如果在阿卡波糖中含有一定量的雜質，不僅會對藥物的純度會造成影響，嚴重的還將直接威脅到藥物的安全性與穩定性。

參考文獻：

[1]梁現蕊，張會晨，何小嬡等.阿卡波糖中雜質的制備方法研究[J].浙江工業大學學報，2017，62（03）：289-293.

[2]黃劍川，王超兒，王亞軍.阿卡波糖結構類似物組分A形成機制研究及其制備[J].發酵科技通訊，2014，16（04）：1-6.

[3]楊亞勇，陳景勇，黃雪群.發酵液中阿卡波糖的超濾和納濾膜提取工藝[J].中國醫藥工業雜志，2015，28（03）：179-182.

[4]成都大學.從含有阿卡波糖的溶液中提純阿卡波糖的方法：CN201510098483.8[P].2015，29（03）：06-10.

[5]徐建妙，王遠山，王亞軍等.阿卡波糖生產菌種的高效選育與發酵過程控制優化研究[C].2015年全國博士生學術論壇——發酵工程論文集浙江工業大學，2015，46（08）：50.