子癇前期孕婦胎盤組織中MMP-9和ET-1表達(dá)水平及其與預(yù)后相關(guān)性分析

蔣艷麗,李曉瑛,王巧鴿

近年來，隨著人們對妊娠婦女研究的不斷深入，有研究顯示在妊娠期間，妊娠婦女可存在妊娠期高血壓、妊娠期糖尿病及子癇前期(preeclampsia， PE)等多種妊娠期疾病[1-2]，其中PE為妊娠期特有的疾病之一，病情控制欠佳進(jìn)展嚴(yán)重者可導(dǎo)致孕婦及圍產(chǎn)兒并發(fā)其他疾病甚至死亡，已成為一個嚴(yán)重影響孕婦及新生兒健康和生命安全的問題[3]。根據(jù)以往臨床研究可知，PE患者可出現(xiàn)全身小血管痙攣、內(nèi)皮損傷及局部缺血，而當(dāng)全身小血管出現(xiàn)痙攣時可導(dǎo)致全身多系統(tǒng)的血流灌注量減少，促使多系統(tǒng)器官損傷，從而對孕婦和胎兒造成一定的危害，故明確PE的致病原因及具體發(fā)病機制和相關(guān)因素是改善妊娠婦女其母嬰安全的重要措施[4-5]。目前，臨床對于PE的致病原因及具體發(fā)病機制尚未完全闡述清楚，但有資料顯示，相關(guān)酶基質(zhì)和細(xì)胞素與PE的發(fā)生和進(jìn)展有著密不可分的關(guān)系，且其中脂質(zhì)代謝異常是其發(fā)病過程最常見也較重要的環(huán)節(jié)，但目前臨床關(guān)于具體酶基質(zhì)和細(xì)胞素與PE的相關(guān)性尚未明確[6-7]。本研究回顧性分析268例孕婦的臨床資料，旨在探討基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)和內(nèi)皮素-1(ET-1)在PE孕婦胎盤組織中表達(dá)水平及其與孕婦預(yù)后的相關(guān)性。現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選取2013年5月—2017年5月于我院分娩的268例孕婦作為研究對象，年齡20～38(30.20±8.26)歲，孕周37～40(38.94±10.26)周，均為足月未臨產(chǎn)。①納入標(biāo)準(zhǔn)：所有PE孕婦均符合《婦產(chǎn)科學(xué)》第8版中PE明確診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]；且所有PE患者均經(jīng)相關(guān)臨床檢查確診為PE；所有孕婦及家屬均知曉同意本研究并簽署知情同意書。②排除標(biāo)準(zhǔn)：伴有原發(fā)性心、肺、腎、腦等疾病；除PE外存在其他妊娠期疾病者；存在惡性腫瘤者；臨床資料不完善者。根據(jù)是否存在PE分為對照組(正常孕婦)184例和觀察組(PE孕婦)84例。2組孕婦年齡、孕周、產(chǎn)次及體質(zhì)量指數(shù)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。見表1。

表1 2組孕婦一般資料比較

注：觀察組為子癇前期孕婦，對照組為正常孕婦

1.2觀察指標(biāo) 檢測2組MMP-9、ET-1、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、肌酐(SCr)、尿酸(UA)及D-二聚體(D-D)水平，記錄孕婦產(chǎn)后不良結(jié)局發(fā)生情況，包括產(chǎn)后大出血、腎功能異常、胎盤早剝以及圍產(chǎn)兒死亡等[9]。

1.3檢測方法

1.3.1MMP-9和ET-1水平：所有孕婦采用免疫組化染色檢測MMP-9和ET-1水平。主要步驟為組織切片脫蠟、水化、抗原修復(fù)，并分別與MMP-9和ET-1的單抗孵育過夜，再與生物素標(biāo)記羊抗兔或兔抗鼠二抗孵育,加入SABC、DAB顯色，蘇木素復(fù)染、脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片。以博士德公司提供的標(biāo)準(zhǔn)切片為陽性對照，并以PBS代替一抗作為陰性對照，進(jìn)行結(jié)果判定。

1.3.2生化指標(biāo)：所有孕婦在檢測當(dāng)日清晨于空腹?fàn)顟B(tài)下抽取靜脈血液5 ml，通過3000 r/min離心10 min后分離血清，采用全自動生化分析儀檢測TC、TG、SCr和UA水平，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測D-D水平。

1.4判定標(biāo)準(zhǔn)

1.4.1MMP-9和ET-1水平：在400倍視野下，隨機選取5個視野，結(jié)果根據(jù)細(xì)胞染色強度和陽性細(xì)胞數(shù)來判斷。根據(jù)細(xì)胞著色強度計分：細(xì)胞內(nèi)可見大量棕色顆粒為3分，可見較深棕色顆粒為2分，可見淡黃色顆粒為1分，無著色或與背景一致為0分。隨機觀察5個HP，每個視野計數(shù)100個細(xì)胞，得出陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)計分：≥51%為3分，26%～50%為2分，1%～25%為1分，無陽性細(xì)胞為0分。兩種計分方法相加，5～6分為強陽性(+++)，3～4分為陽性(++)，2分為弱陽性(+)，0～1分為陰性(-)[10]。將弱陽性、陽性及強陽性均計為陽性。

1.4.2肝腎功能：TC>5.2 mmol/L、TG>2.0 mmol/L、SCr>106 μmol/L、UA>420 μmol/L、D-D>500 μl時為升高。

2 結(jié)果

2.1相關(guān)臨床指標(biāo)表達(dá)水平 2組孕婦TG和D-D表達(dá)水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但觀察組TC、SCr和UA升高率高于對照組，MMP-9陽性表達(dá)率低于對照組，ET-1陽性表達(dá)率高于對照組(P<0.05)。見表2。MMP-9和ET-1在不同孕婦胎盤組織中的表達(dá)情況見圖1、2。

2.2影響PE孕產(chǎn)婦不良預(yù)后的單因素分析 不同年齡、不同TC、SCr和UA水平及MMP-9和ET-1不同表達(dá)情況PE孕婦間不良預(yù)后的發(fā)生率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)。見表3。

表2 2組孕婦相關(guān)臨床指標(biāo)表達(dá)水平比較(例)

圖1基質(zhì)金屬蛋白酶-9在不同孕婦胎盤組織中的表達(dá)情況(DAB×400) A.正常孕婦；B.子癇前期孕婦

圖2內(nèi)皮素-1在不同孕婦胎盤組織中的表達(dá)情況(DAB×400) A.正常孕婦；B.子癇前期孕婦

2.3影響PE孕產(chǎn)婦預(yù)后不良的多因素分析 經(jīng)非條件多因素Logistic回歸模型分析可得年齡過高、MMP-9過低表達(dá)和ET-1過高表達(dá)是導(dǎo)致PE孕產(chǎn)婦出現(xiàn)不良預(yù)后的獨立危險因素(P<0.05)。見表4。

3 討論

近年來，隨著相關(guān)政策的開放，我國孕婦逐漸增多，隨之多種妊娠期疾病的種類也逐漸增多，其中PE是目前臨床較常見也較嚴(yán)重的妊娠期疾病，對孕產(chǎn)婦及新生兒均可產(chǎn)生較大的負(fù)面影響，嚴(yán)重者危及孕婦及新生兒的生命安全，是臨床值得重視的問題[11-12]。目前，臨床關(guān)于妊娠期出現(xiàn)PE的致病原因及具體發(fā)病機制尚未明確，但有文獻(xiàn)資料顯示，相關(guān)酶及細(xì)胞素的表達(dá)與PE的發(fā)生及進(jìn)展有著極密切的聯(lián)系[13]。

本研究結(jié)果顯示，觀察組TC、SCr和UA升高率高于對照組，MMP-9陽性表達(dá)率低于對照組，ET-1陽性表達(dá)率高于對照組，提示除去常規(guī)臨床生化指標(biāo)外，MMP-9和ET-1的表達(dá)水平在PE的發(fā)生和進(jìn)展中起著至為關(guān)鍵的作用。結(jié)合以往臨床研究可知，MMP-9主要存在于PE孕婦其胎盤中的滋養(yǎng)細(xì)胞中[14]，而有研究結(jié)果顯示，在PE孕婦中，其胎盤中滋養(yǎng)細(xì)胞較正常孕婦凋亡增加，由此可推斷MMP-9的表達(dá)可進(jìn)一步降低[15]。另有文獻(xiàn)證實，胎盤中滋養(yǎng)細(xì)胞的過度凋亡與滋養(yǎng)細(xì)胞MMP表達(dá)減少、浸潤能力的降低有著密不可分的關(guān)系[16]。

表4 影響子癇前期孕產(chǎn)婦預(yù)后的多因素分析

注：MMP-9為基質(zhì)金屬蛋白酶-9，ET-1為內(nèi)皮素-1

有研究表明，MMP-9的表達(dá)與凋亡蛋白Caspase-3有一定的聯(lián)系，隨著MMP-9表達(dá)水平的降低，凋亡蛋白Caspase-3水平可顯著升高[17]，而有不少文獻(xiàn)報道凋亡蛋白Caspase-3是凋亡通路關(guān)鍵的蛋白酶，而隨著其表達(dá)水平的增加，細(xì)胞的凋亡逐漸加重[18]。ET-1是通過血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的一種強大的縮血管物質(zhì)，其主要對血管起到一定的收縮作用；對于PE來說，子宮螺旋小動脈痙攣所導(dǎo)致的血液供給減少和胎盤灌流的不足是促使PE發(fā)生的關(guān)鍵，而ET-1屬于目前臨床較強勁的內(nèi)源性縮血管肽，在一般情況下，其主要由血管內(nèi)皮細(xì)胞合成，通過不同分泌途徑對血管產(chǎn)生一定的收縮作用[19]。除此之外，本研究結(jié)果還顯示，MMP-9和ET-1的不同表達(dá)PE孕婦間其預(yù)后不良的發(fā)生率也存在著一定的差異，由此進(jìn)一步提示MMP-9和ET-1的表達(dá)與PE孕產(chǎn)婦的預(yù)后結(jié)局有著一定的聯(lián)系。曾有相關(guān)臨床研究證實，MMP-9在正常孕婦的胎盤組織中最為豐富，而ET-1的表達(dá)水平僅為5～10 pg/ml，其對血管的收縮作用較弱，而隨著ET-1表達(dá)水平的上升，血管收縮作用加強，從而進(jìn)一步促進(jìn)了血液供給動脈的痙攣，造成胎盤組織缺血等，從而導(dǎo)致圍產(chǎn)兒死亡等不良結(jié)局的發(fā)生[20]。本研究結(jié)果也顯示，經(jīng)非條件多因素logistic回歸模型分析可得年齡過高、MMP-9過低表達(dá)和ET-1過高表達(dá)是導(dǎo)致PE孕產(chǎn)婦出現(xiàn)不良預(yù)后的獨立危險因素，由此進(jìn)一步證實了MMP-9和ET-1與PE孕婦其預(yù)后結(jié)局的密切相關(guān)性。

綜上所述，MMP-9和ET-1的表達(dá)在PE孕婦中分別呈顯著降低和升高狀態(tài)，而MMP-9的過低表達(dá)和ET-1的過高表達(dá)均為導(dǎo)致PE孕婦出現(xiàn)不良預(yù)后的獨立危險因素，故臨床對于PE孕婦應(yīng)密切監(jiān)測其MMP-9和ET-1等相關(guān)指標(biāo)水平，進(jìn)一步降低PE孕產(chǎn)婦不良結(jié)局的發(fā)生率。