皮膚基底細胞癌患者癌組織中生存素、P16和B淋巴細胞瘤-2基因表達水平及臨床意義

范林明，鄒 敏，肖祥明，吳彩霞

近年來，隨著人們生活環境及生活習慣的不斷改變，我國惡性腫瘤的種類及患者逐漸增多，而有相關數據表明，皮膚癌發病率在近年呈逐漸上升趨勢[1]。目前，臨床關于皮膚癌的致病原因及具體機制尚未完全闡述清楚，但根據其病理生理狀況可有多種表現類型，其中皮膚基底細胞癌(BCC)和皮膚鱗狀細胞癌(SCC)為皮膚惡性腫瘤中最常見的類型，均主要起源于表皮或其附屬器角質形成細胞[2-3]。既往研究報道，BCC屬于低度惡性腫瘤，但仍具有較強的侵襲性，故及時明確診斷是治療BCC和改善其預后的關鍵[4-5]。近年來，有研究發現，在BCC患者中，其相關基因蛋白的表達與正常皮膚組織有著一定的差異，由此認為，相關基因蛋白的表達異常可能與BCC的發生和進展有著密不可分的關系，但關于具體基因蛋白目前臨床還尚未明確[6-7]。本研究回顧性分析BCC患者的臨床資料，旨在探討BCC患者癌組織中生存素(Survivin)、P16和B淋巴細胞瘤-2基因(Bcl-2)的表達水平及臨床意義。現報告如下。

1 對象及方法

1.1一般資料 選取2014年5月—2017年5月我院病理科收集的54例BCC癌組織(A組)，34例皮膚鱗狀細胞癌(SCC)癌組織(B組)和20例正常皮膚組織(C組)，均符合臨床BCC和SCC明確診斷標準[8-9]。排除標準：所有組織標本來源患者存在其他系統嚴重疾病者；存在惡性腫瘤者；臨床資料不完整者。其中男66例，女42例，年齡32～85(62.06±9.84)歲，組織標本來源部位：頭皮18例，耳部10例，頰部14例，胸部38例和腹部28例。3組標本來源患者性別、年齡、體質量指數、文化程度及標本來源部位比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。見表1。

表1 3組標本來源患者一般資料比較

注：A組為皮膚基底細胞癌組織，B組為皮膚鱗狀細胞癌組織，C組為正常皮膚組織

1.2免疫組化試劑及檢測方法

1.2.1試劑：Survivin兔抗人多克隆抗體濃縮液，兔抗人P16單克隆抗體、鼠抗人Bcl-2、單克隆抗體及鏈酶親和素-生物素-過氧化酶復合物SP免疫組化試劑盒，DAB顯色試劑盒均購自北京中山生物技術有限公司。

1.2.2檢測方法：3組組織標本均經石蠟包埋,組織5 μm厚連續切片后裱于載玻片上，60℃烤箱烘烤30 min，常規脫蠟水化2次，每次10 min。試驗開始前37℃烤箱過夜，后進行免疫組化染色，用已知陽性組織(試劑公司提供)作陽性對照，用PBS代替一抗作陰性對照。

1.3Survivin、P16和Bcl-2結果判定標準 采用Barnes半定量法，以細胞質或細胞核中出現淡黃至棕黃色細顆粒狀著色為陽性[10]。參照文獻[11]隨機并計數10個高倍鏡(×400)視野，計數1000個細胞，計數陽性細胞百分率：<10%為陰性，10%～50%為弱陽性，50%～75%為陽性，>75%為強陽性，以弱陽性、陽性和強陽性計算總陽性率。

2 結果

2.1Survivin在不同組織標本中表達情況 A、B組Survivin總陽性表達率高于C組(P<0.05)，但A、B組比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 3組標本中Survivin表達情況 [例(%)]

注：A組為皮膚基底細胞癌組織，B組為皮膚鱗狀細胞癌組織，C組為正常皮膚組織；與C組比較，aP<0.05

2.2P16在不同組織標本中表達情況 A組和B組P16總陽性表達率低于C組(P<0.05)，但A、B組間比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 3組標本中P16的表達情況比較[例(%)]

注：A組為皮膚基底細胞癌組織，B組為皮膚鱗狀細胞癌組織，C組為正常皮膚組織；與C組比較，aP<0.05

2.3Bcl-2在不同組織標本中表達情況 A組和B組Bcl-2總陽性表達率高于C組(P<0.05)，但A、B組比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表4。

表4 3組標本中Bcl-2表達情況比較[例(%)]

注：A組為皮膚基底細胞癌組織，B組為皮膚鱗狀細胞癌組織，C組為正常皮膚組織；與對照組比較，aP<0.05

2.4BCC患者其組織中Survivin、P16和Bcl-2相關性分析 在BCC患者其癌組織中Survivin和Bcl-2的表達均與P16表達呈負相關，而Survivin與Bcl-2表達呈正相關(P<0.05)。見表5。

表5 皮膚基底細胞癌組織中Survivin、P16和Bcl-2相關性分析

3 討論

根據以往臨床研究可知，BCC在臨床又被稱為基底細胞上皮瘤，屬于皮膚惡性上皮瘤的一種，可能起源于表皮及其附件的基底細胞[12]。目前，臨床對于BCC的致病原因及具體發病機制尚未完全闡述清楚，但隨著研究的不斷深入，有學者發現，如Survivin、P16和Bcl-2等一些與細胞凋亡相關的基因蛋白在BCC患者其癌組織中的表達均存在著一定的異常，故認為Survivin、P16和Bcl-2的表達在BCC發生及其進展的過程中起著極為重要的臨床作用，但關于其具體的表達情況及其之間的相關性尚未明確報道[13-14]。

本研究結果顯示，在BCC和SCC患者其癌組織中Survivin和Bcl-2陽性表達率均高于正常皮膚組織，而P16總陽性表達率較正常皮膚組織降低，提示正常皮膚組織中若Survivin和Bcl-2的表達上升或P16的表達下降，其發生BCC的風險均顯著增高。以往研究報道，Survivin是近年研究中發現的一種凋亡抑制因子[15]，其屬于細胞凋亡抑制蛋白家族的成員，其生化學功能類似于Bcl-2[16]，且在近年研究中，該因子是目前臨床抑制細胞凋亡作用最強的因子[17]。分析相關生理病理學研究可知，Survivin在機體細胞生長周期和凋亡中起著極為重要的作用[18-19]，其對正常細胞凋亡信號通路的傳導具有一定的抑制作用，從而促使一些非正常細胞逃脫了機體的免疫清除，進而導致異常細胞的存活和聚集，隨著時間的延長，逐漸導致腫瘤的發生和進展[20-21]。在既往研究中，Survivin被證實具有腫瘤組織表達特異性，故在近年研究中，該因子一直被致力于研究其與腫瘤基因之間的聯系，而本研究結果也進一步證實了既往的研究結果。而P16是在近年科研中發現的一種新型抗癌基因[22-23]。曾有研究證實，P16可抑制相關蛋白的活性，從而抑制細胞周期的繼續進行，對細胞分期進行了一定阻礙，進而起到抑制細胞增殖和生長的作用[24]。故當機體中P16的表達降低時，其對細胞分期的抑制作用減弱，從而加速了細胞的增殖和生長，而當機體中出現癌性細胞時，也可因P16的缺乏進一步加快癌細胞的增殖進度，從而導致疾病的陽性表現和進一步進展[25]。本研究結果也顯示，BCC和SCC患者其癌組織中P16的表達較正常皮膚組織降低，進一步提示P16的缺乏與BCC的發生有著密切聯系。除此之外，本研究中涉及的Bcl-2屬于原癌基因的一種，多出現于近年研究報道中，該基因可調控細胞凋亡，對細胞的存活基因具有一定激活作用，從而起到抑制細胞凋亡的作用[26]。曾有研究顯示在濾泡型B淋巴細胞性淋巴瘤中Bcl-2呈現出過度表達，且證實了其主要通過抑制細胞凋亡和延長細胞的生存期而導致腫瘤的發生[27]。本研究結果還顯示，在BCC癌組織標本中，Survivin和Bcl-2的表達均與P16表達呈負相關，而Survivin與Bcl-2表達呈正相關。

綜上所述，Survivin、Bcl-2和P16基因蛋白在BCC的發生和進展中均起著至為關鍵的作用，可作為臨床研究BCC的關鍵切入點。但本研究所選樣本含量過小及研究時間過短，對于Survivin、P16和Bcl-2在BCC是否受其他因素影響尚未明確，可加大樣本含量和延長研究時間進一步深入研究。