多指標綜合評分法對理氣復胃口服液的澄清工藝優化及比較

白 蘭，李晉奇，童榮生，師健友

(四川省醫學科學院·四川省人民醫院，個體化藥物治療四川省重點實驗室，四川 成都 610072)

理氣復胃口服液為我院生產的醫院制劑，由木香、枳實、陳皮、大黃等七味中藥組成，臨床使用近三十余年，具有行氣寬脹、消積導滯、燥濕健脾的功效，用于腹脹、噯氣、早飽、上腹痛、反酸、燒心等消化不良癥的治療及手術后胃腸功能的恢復[1]，臨床觀察有效率達96.05%。理氣復胃口服液現有提取精制工藝為水提醇沉，操作方便，但成品外觀質量較差，短期放置即出現沉淀，不符合現行藥典標準。為提高口服液的澄明度的同時保留有效成分，在課題組將含測指標由測定大黃素提高到測定大黃總蒽醌(大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚)，并重新考察提取工藝的基礎上，以干膏率和大黃總蒽醌為綜合評分法考察指標，比較醇沉法、離心法、ZTC1+1Ⅲ型天然澄清劑法三種澄清方法，為理氣復胃口服液澄清工藝的改進提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1儀器與試藥Waters2690 高效液相色譜儀，包括2996二極管陣列檢測器，Empower Chromatography Manager 色譜數據工作站(美國waters公司)；BP 211D型十萬分之一電子分析天平( 德國Sartorius 公司)；蒸發皿、離心機、水浴鍋、恒溫鼓風干燥箱等。木香(141119)、枳實(141030)、陳皮(141104)、白術(141029)、大黃、萊菔子(141110)、法半夏(141114)七味藥材購于四川省中藥飲片有限責任公司；ZTC1+1Ⅲ(150623，天津振天成科技有限公司)；大黃素對照品(110756-200210)，大黃酚對照品(110796-200208)，大黃酸對照品(110757-200206)，蘆薈大黃素對照品(110795-200806)，大黃素甲醚(110758-200611)，均購于中國藥品生物制品檢定所，乙醇為分析純。

1.2方法

1.2.1理氣復胃口服液提取液的制備 根據課題組前期實驗基礎，提取工藝為[2]：按處方量稱取木香、枳實、陳皮、白術四味藥，加10倍量水，提取芳香水，濾過，濾液收集備用。殘渣與大黃、萊菔子、法半夏合并加10倍水量，煎煮2 次，每次1小時，過濾。合并三份濾液，減壓濃縮至相應體積(藥液濃度為1：1，即1 ml藥液相當于1 g原藥材)。

1.2.2干膏收率的測定 精密量取一定量的藥液，置干燥恒重的蒸發皿中，105 ℃干燥至恒重，取出放入干燥器中冷卻至室溫，迅速稱重，計算干膏收率(%)。干膏率(%)=提取液的干膏重量/相當的藥材重量×100%

1.2.3大黃總蒽醌含量測定 色譜條件根據課題組已有報道，大黃總蒽醌含量測定條件為[3]：色譜柱Phenomenex Gemini C18( 250 mm×4.6 mm，5 μm，110 A)，保護柱Security Guard Cartridges Gemini C18( 4 mm×3.0 mm)，柱溫35 ℃，流動相：甲醇-乙腈-0.01 mol/L，NaHP2O4(pH1.5) (2∶5∶3.5)，流速1.0 ml/min，檢測波長435 nm。

1.2.4綜合評分 對各個指標進行綜合考慮和權衡，以綜合指標( overall desirability，OD) 進行直觀分析和方差分析。根據干膏率和大黃總蒽醌所做貢獻比重大小，分別賦予加權值0.2和0.8。OD=干膏率(%)×0.2 + 大黃總蒽醌(μg/ml)×0.8

1.2.5醇沉法醇沉法 為現有工藝[4]，取1.2.1項下制備的提取液9份，分成3組，濃縮至相對密度1.20～1.25(20 ℃)，每組分別加乙醇至含醇65%、75%、85%，4 ℃靜置24 h，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，加水定溶至相應體積，測定干膏率和大黃總蒽醌含量，平行試驗3次。

1.2.6離心法正交實驗 選取藥水比、離心轉速、離心時間三個影響離心效果的主要因素，進行正交試驗，因水平表見表1。實驗方法：取50 ml提取液，分別按要求稀釋，離心，合并上清液，濃縮至50 ml，測定。

表1 離心法工藝正交試驗因素水平

1.2.7澄清劑法[5～7]①ZTC 1 + 1 Ⅲ型天然澄清劑的配制。A組分的配制：精密稱取A組分2 g，加入適量去離子水超聲溶解，再加入去離子水至200 ml，攪拌，溶脹24 h，雙層紗布濾過，即得到1% A組分溶液。B組份的配制：精密稱取B組分2 g，加入適量1% 醋酸超聲溶解，再加1%醋酸至200 ml，攪拌，溶脹24 h，雙層紗布濾過，即得到1% B組分溶液。②ZTC 1 + 1 Ⅲ型天然澄清劑的加入順序及方法。加入順序：根據澄清劑使用原則，當溶液pH<4.8，按照先A后B的順序添加澄清劑；在pH值>4.8溶液中，按照先B后A的順序添加澄清劑。經測定，提取液分別稀釋1、4、8倍，溶液的pH值均小于4.8，因此按照先A后B的順序添加澄清劑。實驗方法：取1.3.1項下理氣復胃口服液提取液100 ml，按比例加入一定量水稀釋，溫度平衡后加入A組分溶液，在相應溫度下攪拌2 h，加入B組份溶液，再恒溫攪拌一定時間，取出冷卻至室溫，4 ℃放置24 h，濾過，濾液濃縮至100 ml，測定。③正交實驗設計。選取藥：水、ZTC1 + 1Ⅲ型天然澄清劑加入總量、溫度、加入B組分后攪拌時間四個影響澄清效果的主要因素，進行正交試驗，因水平表見表2。

表2 ZTC1+1Ⅲ澄清劑法正交試驗因素水平

2 結果

2.1醇沉法實驗結果由醇沉實驗結果可知，原醇沉方案綜合評分最高為85%乙醇組，與75%乙醇組相差不大。見表3。

2.2離心法實驗結果根據綜合評分結果以及方差分析可知，離心法各因素對除雜效果影響優劣：離心轉速>離心時間>藥水比。由直觀分析可知最佳方案為藥∶水為1∶3，轉速16000 r/min，離心時間60 min。方差分析顯示三個因素對離心法除雜效果均有顯著性影響。見表4、表5。

表3 醇沉法實驗結果(n= 3)

表4 離心法正交試驗安排及結果

表5 離心法實驗結果分析及方差分析

2.3ZTC1+1Ⅲ型澄清劑法實驗結果根據綜合評分結果以及表7極差分析可知，使用ZTC 1 + 1 Ⅲ型天然澄清劑澄清除雜各因素對除雜效果影響優劣：藥水比>ZTC1 + 1Ⅲ型天然澄清劑加入總量>溫度>加入B組分后攪拌時間。因素A、B對使用ZTC1 + 1 Ⅲ型天然澄清劑澄清除雜效果有顯著性影響，因素C對實驗結果無統計學意義，綜合以上結果，從節約成本和時間出發，最佳實驗方案定為藥水比按1∶1，澄清劑加入總量2%，溫度70 ℃，攪拌時間為15 min。見表6、表7。

表6 ZTC1 + 1Ⅲ型澄清劑法正交試驗安排及結果

表7 ZTC 1 + 1 Ⅲ澄清劑法實驗結果分析及方差分析

3 討論

3.1澄清方法比較中藥水提液中含有大量雜質如淀粉、樹膠、果膠、粘液質、蛋白質、鞣質、色素等，本次實驗三種澄清方法均可達到一定程度的除雜目的。醇沉法是常見的除雜方法，但就理氣復胃口服液而言，經放置后很快出現沉淀；離心法是借助互不相溶組分間不同的離心力而達到分離的物理方法，在其分離的過程中，不會引起溶液中有效成份發生相變，實驗中藥液放置一段時間后仍會有較多沉淀出現，推測可能多次離心或提高離心轉速能夠提高澄清效果，但不適合于現有設備的大生產；ZTC1+1澄清劑主要用于去除鞣質、蛋白質、蠟質等膠體不穩定成分，對中草藥有效成分如黃酮、生物堿、皂苷類、萜類、多肽、維生素、礦物質等不影響，作用原理是第一種組分加入后，在不同的可溶性大分子之間架橋連接，使分子迅速增大，第二種組分在第一種組分形成的復合物的基礎上再架橋，使絮體盡快形成沉淀而除去，達到除雜的目的[8]。本次實驗中，用ZTC1 + 1Ⅲ型澄清劑法所得樣品能夠保持較長時間不產生沉淀。

3.2評價指標的選擇和綜合評分的建立由于理氣復胃口服液方中君藥木香主要成分木香內酯和二氫木香內酯等，屬于揮發性物質，課題組發現樣品在放置過程中幾天內揮發至無法測定，因此選擇大黃中大黃總蒽醌作為考察對象。為保證ZTC1+1Ⅲ型天然澄清劑除雜效果，選取干膏率與大黃總蒽醌作為評價指標進行綜合評分。

綜上所述，乙醇沉淀法、離心法、ZTC1+1Ⅲ型澄清劑法三種方法的最佳工藝OD分別為217.63、214.06、213.80，綜合評分結果相近，初步說明改變工藝對制劑干膏率和大黃總蒽醌影響較小。與長期常溫放置觀察樣品性狀結合，乙醇沉淀法3～5天出現沉淀，離心法5個月開始出現沉淀，ZTC1+1Ⅲ型澄清劑法放置6個月不出現沉淀。此外，ZTC1+1Ⅲ型澄清劑法與其他方法相比不僅簡便易行，成本可控，不需要特殊設備，可實現大生產等優點。