再生障礙性貧血患者治療前后免疫T細胞亞群和血清IL-8、IFN-γ、TNF-α水平變化研究

余艷麗，汪建軍，王 欣，朱小艷，徐少麗

(陜西省核工業二一五醫院 a.輸血科；b.檢驗科，陜西 咸陽 712000)

再生障礙性貧血指骨髓未能生成足夠或新的細胞來補充血液細胞所引起的病癥，本病以紅細胞、白細胞和血小板降低為主要特點，患者常表現為貧血、頭暈、發熱、出血等癥狀，免疫功能也存在不同程度異常，及時合理診斷對改善患者預后有一定臨床意義[1]。既往文獻報道再生障礙性貧血的發生和發展與骨髓中造血干細胞免疫性損傷有緊密關系[2]，一旦自身免疫反應被不同刺激物激活將釋放一系列細胞因子，如白細胞介素-8(IL-8)、γ-干擾素(IFN-γ)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)等，進一步造成造血干細胞分裂受阻凋亡，加重病情進展[3]。研究表明機體多種血清因子水平會隨再生障礙性貧血發展而發生相應變化，在一定程度上可較好地反映病情嚴重程度，由此可見臨床全面監測再生障礙性貧血患者血清相關因子對了解其病情進展和轉歸有重要指導價值[4]。本文旨在分析再生障礙性貧血患者治療前后免疫T細胞亞群和血清IL-8、IFN-γ、TNF-α水平變化的臨床意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料2010年3月至2017年3月本院收治的80例再生障礙性貧血患者(研究組)及同期在本院體檢的32名健康志愿者(對照組)。納入標準：①患者符合《血液病學》[5]有關再生障礙性貧血的診斷標準；②患者入院后經醫師診斷和外周血象、骨髓涂片和活檢確診；③臨床資料完善；④患者及家屬對本研究內容和目的知情，自愿簽署知情同意書；⑤健康志愿者均為本院體檢中心經健康體檢合格者，未合并心、肝、肺和腎等重要臟器功能障礙，同時排除腫瘤和結締組織及感染性疾患等。排除標準：①既往有氯霉素、磺胺類藥物使用史和無殺蟲劑等接觸史者；②合并嚴重心、肝、腎等重要臟器功能障礙者；③合并嚴重自身免疫性疾病者；④同一時間段內參加過其他相關研究者；⑤研究中未按要求服用規定藥物而影響療效判斷者。研究組男45例，女35例，年齡12～65歲[(45.26±3.14)歲]，病程1個月至22年[(15.02±3.04)年]；對照組男18例，女14例，年齡13～64歲[(44.98±3.20)歲]。兩組性別、年齡等基線資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，有可比性。

1.2方法①再生障礙性貧血患者治療方法和療效判斷：采用免疫抑制治療(主要包含環孢菌素A+抗胸腺/淋巴細胞球蛋白，CsA+ATG/ALG)和促造血治療，持續治療6個月，6個月后對患者臨床療效進行評估，參照《兒童獲得性再生障礙性貧血診療建議》[6]標準將患者分為緩解組(完全緩解+部分緩解)和未緩解組。②免疫T細胞亞群檢測：采用流式細胞儀(儀器及試劑均由上海信然生物技術有限公司提供)檢測研究組治療前后和對照組研究對象外周血中CD3+、CD4+、CD8+水平，并計算CD4+/CD8+比值。③血清IL-8、IFN-γ、TNF-α水平檢測：采用酶聯免疫吸附法(奧地利公司提供的型號為Bioelisa ELX-800的酶標儀)檢測研究組治療前后和對照組血清中IL-8、IFN-γ、TNF-α水平。

1.3觀察指標①研究組治療前后和對照組免疫T細胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)水平及血清IL-8、IFN-γ、TNF-α水平。②研究組不同亞組免疫T細胞亞群、血清IL-8、IFN-γ、TNF-α水平。③再生障礙性貧血患者預后與免疫T細胞亞群和血清IL-8、IFN-γ、TNF-α水平進行相關性分析。

1.4統計學方法采用SPSS 19.0統計學軟件分析數據。計量資料以均數±標準差表示，組間比較采用方差分析及SNK-q檢驗，變量間相關性采用Pearson相關分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1研究組治療前后、對照組免疫T細胞亞群水平比較研究組治療前CD3+、CD4+、CD4+/CD8+低于治療后及對照組，CD8+高于治療后及對照組；治療后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+低于對照組，CD8+高于對照組(P<0.05)，見表1。

表1 研究組治療前后、對照組免疫T細胞亞群水平比較

2.2研究組治療前后、對照組血清IL-8、IFN-γ、TNF-α水平變化研究組治療前IL-8、IFN-γ、TNF-α高于治療后及對照組治療后及對照組，治療后IL-8、IFN-γ、TNF-α高于對照組(P<0.05)，見表2。

表2 研究組治療前后、對照組血清IL-8、IFN-γ、TNF-α水平變化 (pg/ml)

2.3研究組不同亞組免疫T細胞亞群、血清IL-8、IFN-γ、TNF-α水平比較緩解組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+高于未緩解組，CD8+、IL-8、IFN-γ、TNF-α低于未緩解組(P<0.05)，見表3。

表3 研究組不同亞組T細胞亞群、血清IL-8、IFN-γ、TNF-α水平比較

2.4再生障礙性貧血患者預后與免疫T細胞亞群、血清IL-8、IFN-γ、TNF-α相關性分析再生障礙性貧血患者預后與CD3+、CD4+呈正相關(r=0.296、0.312，P<0.05)，與CD8+、IL-8、IFN-γ、TNF-α呈負相關(r=-0.356、-0.335、-0.352、-0.302，P<0.05)，與患者年齡、性別無相關性(P>0.05)。

3 討論

再生障礙性貧血是因造血干細胞異常導致骨髓造血功能降低所引起的以全血細胞減少為主要表現的貧血性疾病，同時伴有貧血、感染、出血、發熱的特點，發病年齡無特異性，本病易繼發各類免疫系統疾病，現階段臨床對其發病機制的研究較廣，但對其病機尚未完全明確，多認為與造血干祖細胞異常、免疫機制損傷和骨髓內造血環境異常等緊密相關[7，8]；近期有學者研究則指出再生障礙性貧血患者外周T細胞亞群結構分布異常，最明顯變化是CD4+數目明顯減少，同時伴隨CD8+數目明顯增多，導致兩者比值失衡甚至倒置，其中CD8+數目增多常表現明顯地抑制骨髓，以TNF-α和IFN-γ增多，破壞了患者骨髓環境并表現為負性調節，最終抑制了骨髓造血功能而引發全血細胞明顯減少[9]。近年來隨著血液界學者對細胞因子學說研究的不斷深入，白細胞介素如IL-8是臨床上常見負性調節因子，其主要參與再障的發病[10]，因而臨床中探討再生障礙性貧血患者治療前后免疫T細胞亞群以及血清IL-8、IFN-γ、TNF-α水平變化的臨床意義有一定參考價值。

李敬東等[8]研究表明再生障礙性貧血患者經免疫抑制治療后可有效減少胞漿內TNF-α、IFN-γ表達；姜麗波等[11]研究表明再生障礙性貧血患者免疫T細胞亞群與病情嚴重程度有明顯相關性；而早期王成紅等[12]研究則指出再生障礙性貧血患者發病過程中同時存在細胞免疫功能障礙以及體液免疫機制異常兩種情況，且其變化規律與疾病輕重緩急程度有明顯的相關性。雖目前臨床有關T淋巴細胞亞群和血清IL-8、IFN-γ、TNF-α水平與再生障礙性貧血患者病情關系的研究不少，但尚缺乏臨床回顧性分析方面的研究，為此本文在既往文獻基礎上展開臨床回顧性分析，本分析結果提示，研究組治療前CD3+、CD4+、CD4+/CD8+較研究組治療后、對照組明顯低，CD8+、IL-8、IFN-γ、TNF-α明顯高，研究組治療后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+較對照組明顯低，CD8+、IL-8、IFN-γ、TNF-α明顯高，而緩解組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+較未緩解組明顯高，CD8+、IL-8、IFN-γ、TNF-α較未緩解組明顯低，此外再生障礙性貧血患者預后與CD3+、CD4+呈明顯正相關，與CD8+、IL-8、IFN-γ、TNF-α呈明顯負相關，初步證實了再生障礙性貧血患者存在T淋巴細胞亞群失調及血清IL-8、IFN-γ、TNF-α異常表達的情況，且其水平變化與再生障礙性貧血患者預后有明顯的相關性，這與既往文獻報告的觀點大體上相符[13]。相關研究表明細胞免疫功能紊亂是引發再生障礙性貧血發生及進展的重要環節，CD3+、CD4+、CD8+是T淋巴細胞亞群中較為常見的因子，在機體免疫功能調控中發揮重要作用，一旦T淋巴細胞出現極化時，T淋巴細胞不同亞群平衡被打破導致細胞免疫功能亢進，最終抑制造血干細胞功能并破壞造血組織[14]，因而可推測T淋巴細胞亞群水平與再生障礙性貧血患者預后存在明顯的相關性。此外在再生障礙性貧血患者體內存在寡克隆擴增的細胞毒T細胞，由其分泌的1型淋巴因子 (IL-8、TNF-α、IFN-γ) 水平隨之明顯升高，而這些造血負調控因子可對造血干細胞表面的Fas抗原表達進行誘導，同時與促凋亡因子發揮協同作用，最終誘導骨髓造血干細胞凋亡[15]，因而可推測再生障礙性貧血患者預后與其血清IL-8、TNF-α、IFN-γ水平變化有明顯相關性，這與早期學者的觀點相符[16]。

綜上所述，再生障礙性貧血患者治療后其免疫T細胞亞群和血清IL-8、IFN-γ、TNF-α水平得以有效調節，此外免疫T細胞亞群各因子和血清IL-8、IFN-γ、TNF-α在再生障礙性貧血疾病發生和預后中發揮著重要作用。