阻斷式PRRSV免疫抑制試驗

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(浙江省縉云縣動物疫病預防控制中心，浙江 縉云 321400)

近年來，我國各地對豬瘟和豬藍耳病的預防和撲滅做了大量工作，曾經的“高熱發紅急性致死”的“高熱病”已不復存在，但以免疫抑制為主要危害的PRRSV隱性持續性感染卻依然嚴重。表面“平靜”的臨床現象，往往容易混淆人們的視線，從而忽視了豬藍耳免疫的重要性。豬瘟是國家強制免疫的傳染病，眾所周知，豬瘟的免疫效果與PRRSV的自然感染及它的免疫效果密切相關。為能比較深入地揭示PRRSV對豬瘟免疫抑制危害的嚴重性及藍耳防疫的重要性，故特做本試驗。

1 材料和方法

1.1材料

1.1.1免疫疫苗 豬藍耳疫苗：杭州佑本批號：20170605；豬瘟疫苗：杭州佑本批號：20170527。

1.1.2實驗用豬 隨機選取縉云某豬場30日齡仔豬40頭(體態正常，無可見臨床癥狀)。

1.1.3豬瘟診斷試劑 豬瘟間接血凝抗體檢測試劑盒，中國農業科學蘭州獸醫研究所批號：20180615202。

1.1.4抗PRRSV-IG和瓊擴抗原的制備 用豬藍耳弱毒活疫苗(NVDC-JXA1株)首免100日齡育成豬，肌注2頭份。免后2周再以豬藍耳滅活疫苗(NVDC-JXA1株)加強免疫2次，間隔21 d，第1次劑量2 mL/頭，第2次劑量4 mL/頭，末次免疫后21 d ，經采血分離血清-鹽析沉淀-脫鹽濃縮而成。將提取的蛋白溶液稀釋后用UV-170紫外分光光度計測定，記錄λ=280 nm和λ=260 nm的光密度，按Lowry-Kalokar公式計算蛋白濃度，蛋白濃度(mg/mL)=1.45×1.116-0.74×1.041得0.84786乘以稀釋倍數134為113.6 mg/mL。

1.1.5山羊免疫球蛋白的制備 以豬抗PRRSV-IG免疫健山羊，采血分離血清-鹽析沉淀-脫鹽濃縮而成。用瓊擴法檢驗：中間孔為豬抗PRRSV-IG抗原，周邊孔為倍比稀釋的山羊免疫球蛋白，結果見圖1所示。

圖1 山羊抗豬PRRSV球蛋白瓊擴圖

1.2試驗方法

1.2.1試驗設計 分A、B、C、D 4個試驗組，每組10頭，A組為藍耳疫苗+山羊免疫球蛋白1次，B組為組為藍耳疫苗+山羊免疫球蛋白2次，C組僅免豬瘟疫苗，D組為只用藍耳苗。

1.2.2免疫方法 A、B兩組30日齡首免藍耳和山羊免疫球蛋白，D組只免藍耳疫苗，劑量為2 mL/頭。首免后2 d，四組各免疫豬瘟苗2 mL/頭。首免后21 d，B組和D組與首次相同劑量加強免疫1次。二次免疫3周后，經腔靜脈采血分離血清，用正向間接血凝法檢測豬瘟免疫抗體。

2 試驗結果

2.1山羊免疫球蛋白對藍耳疫苗免疫抑制影響

試驗A組使用一次免疫抑制劑后，豬瘟免疫效價下降為3，B組使用免疫抑制劑二次后即可下降至2以下(見表1)。

表1 山羊免疫球蛋白對藍耳疫苗免疫抑制的豬瘟抗體效價

2.2免疫藍耳疫苗對豬瘟抗體效價的影響

未經藍耳免疫的C組，因受PRRSV的免疫抑制作用其平均豬瘟效價為1.8，經藍耳疫苗免疫的D組因PRRSV受到了控制，其平均豬瘟效價達到8(見表2)。

表2 藍耳免疫對豬瘟抗體效價的影響

以PRRSV自然感染豬的豬瘟免疫抗體水平為參照，以山羊免疫球蛋白為豬藍耳疫苗的免疫抑制劑，能有效地阻斷豬藍耳疫苗的防疫作用，從而明晰出PRRSV對豬瘟疫苗的免疫抑制作用，進一步揭示了豬PRRSV對豬瘟免疫抑制危害的嚴重性(圖2)。

圖2 各處理組別豬瘟抗體效價

3 小結與討論

3.1山羊球蛋白為免疫抑制劑能有效地阻斷豬藍耳疫苗的防疫作用，使B組的豬瘟抗體水平與C組的水平相當，從而進一步證實PRRSV對豬瘟免疫抑制的重要作用及嚴重性。

3.2試驗提示：PRRSV是影響豬瘟免疫的一個重要因素，豬瘟的免疫抗體水平高低與豬藍耳的防疫與否存在密切相關性，因此做好藍耳的免疫是預防豬瘟的重要手段之一。

3.3在PRRSV隱性感染被徹底清除之前，評判豬瘟免疫抗體效價一定要與藍耳病毒的感染程度結合起來，這對于指導豬瘟的防疫實踐十分重要。