呋塞米鼻腔噴霧劑局部給藥的大鼠急性毒性試驗結果

杜建紅，何德云，鐘元高

呋塞米鼻腔噴霧劑是筆者單位申請課題“呋塞米鼻腔噴霧劑用于戰時高原反應急救的研究”研究配制的實驗制劑，主要由呋塞米、苯扎氯銨、苯乙醇等成分配制而成。具有利尿作用，臨床主要用于高原環境引起的急性肺水腫或腦水腫等水腫性疾病。為了解該藥經鼻噴霧給藥對局部及全身產生的毒性反應和反應的恢復情況，本研究對該藥鼻腔用藥的局部及全身毒性反應情況進行實驗觀察，為臨床研究提供資料。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 健康SD大鼠220～300 g[成都達碩實驗動物有限公司提供，動物合格證號：SCXK（川）2016-25]，分籠飼養于空調實驗室內，室溫（24±2）℃，相對濕度40%～60%，適應性喂養1 w備用。1.2 儀器與試藥

1.2.1 儀器 轉輪式切片機[德國徠卡（Leica）儀器有限公司，型號2015]，全自動封閉式組織脫水機（常州市中威電子儀器有限公司，型號TSJ-Ⅱ），病理組織漂烘儀（常州市中威醫療儀器有限公司，型號PHY-Ⅲ型），數碼三目攝像顯微攝像系統（麥克奧迪實業集團有限公司，型號BA200Digital）。

1.2.2 試藥 呋塞米鼻腔噴霧劑（0.5%W/W，批號20160301，20160315，20160327， 委托成都軍區總醫院按研究組方配制，僅用于課題研究），多聚甲醛、氫氧化鈉、PBS 磷酸鹽緩沖液（pH 7.2～7.4）、無水乙醇、二甲苯、中性樹膠、蘇木素、伊紅等均為分析純。

1.3 實驗方法[1-7]實驗前，挑選鼻部皮膚無出血及破損的動物備用，仔細觀察并篩選鼻黏膜完整無損傷、出血、水腫及潰爛等病變的大鼠共12只，雌雄各6只，按性別體重隨機分為空白組與給藥組，每組6只。于實驗室分籠飼養觀察3 d，無異常反應后用于實驗。

固定大鼠頭部，用移液器將呋塞米鼻腔噴霧劑分別緩慢滴入給藥組大鼠雙側鼻孔內，每孔25 μl，以保證受試樣品和鼻腔鼻黏膜充分接觸，防止受試樣品流出鼻孔外，30 min后肉眼觀察鼻黏膜局部損傷情況；第4 h及第8 h后重復上述操作，作為給藥組。空白組滴入呋塞米鼻腔噴霧劑賦形劑，其余操作同給藥組。 分別觀察每只大鼠給藥后 1、2、3、4、8、24 h 及第 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13 及 14 d的局部和全身毒性反應情況，主要包括黏膜有無充血、水腫、潰瘍、行為活動、飲食、排便和口、眼、鼻有無分泌物等情況，并做好詳細記錄。第14 d實驗結束后，脫頸椎處死大鼠，肉眼觀察大鼠心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胰腺、胃、脾、前列腺、睪丸、卵巢、子宮等主要臟器有無明顯病理改變，做好詳細記錄；解剖取出鼻中隔（含兩側鼻腔黏膜），10%中性甲醛固定，蘇木精-伊紅染色法染色，光鏡下觀察并拍照。

2 結果

2.1 一般觀察 給藥組動物給予試藥后，鼻腔局部無充血、水腫及潰爛等特殊反應，大鼠均未出現異常變化，一般活動正常，行為活潑，毛發光亮，飲食、排便無異常，口、眼、鼻無異常分泌物，黏膜無充血，無動物死亡，與空白組比較無顯著性差異（P＞0.05）。

2.2 組織病理學檢查 試驗結束時，脫頸椎處死各組大鼠，解剖肉眼觀察各組織器官均未見明顯病理學改變。鼻中隔黏膜病理組織學檢查結果顯示，兩組無顯著性差異（圖1）。

3 討論

本研究通過鼻腔給藥方式，給予大鼠呋塞米鼻腔噴霧劑和呋塞米鼻腔噴霧劑賦形劑，觀察大鼠局部給藥后局部和全身急性毒性實驗結果。結果顯示，給藥組給藥后1～14 d，大鼠鼻腔局部均無異常反應和表現，與空白組比較無顯著性差異（P＞0.05），初步證明，呋塞米鼻腔噴霧劑對實驗大鼠用藥局部及全身均無明顯急性毒性反應，具有良好的用藥安全性。

圖1 各組鼻中隔黏膜病理組織學檢查結果