我國膠體金試紙條研究現狀及在畜禽屠宰檢疫中應用展望

黎偉強

摘 要 膠體金免疫層析技術是在膠體金標記技術、免疫檢測技術和層析分析技術基礎上發展起來的一種新型免疫學診斷技術。因其具有簡便、快速、無污染、不需特殊儀器、特異性強、敏感性高、結果判斷直觀等優點，成為當前廣泛采用的動物疫病免疫學診斷技術?；诖?，本文主要對我國膠體金試紙條研究現狀及在畜禽屠宰檢疫中應用展望進行分析探討。

關鍵詞 膠體金試紙條；研究現狀；畜禽屠宰檢疫；應用展望

1 前言

膠體金免疫層析試紙條（ImmunochromatographicStrip，ICS/ ColloidGoldStrip，CGS），通常簡稱為膠體金試紙條，是通過膠體金免疫層析技術制備的，可以準確、快速、低成本檢測抗原或抗體的試紙。在禽病檢測方面，膠體金試紙條作為一種檢測工具，應用于疾病的診斷、流行病學調查、免疫方案制定、檢驗檢疫等方面。與其他免疫學和分子生物學檢測方法相比，膠體金試紙條具有無需專業儀器，檢測耗時短，通過肉眼觀察即可判定結果，較好的特異性和敏感性，易于運輸和保存，適用于基層和現場檢測。

2 膠體金試紙條研究現狀與應用

2.1 禽流感

禽流感由禽流感病毒（Avianinfluenzavirus，AIV）感染所致，對禽養殖業及人類健康構成了嚴重威脅。根據AIV囊膜上血凝素（HA）和神經氨酸酶（NA）不同，可分為16個HA亞型和10個NA亞型。

2.2 新城疫

新城疫是由新城疫病毒（Newcastlediseasevirus，NDV）引起的，長期以來對禽養殖業造成重大危害。在NDV抗體檢測方面，研究者用膠體金標記新城疫病毒，制作了檢測NDV抗體的免疫膠體金試紙條，使用IDEXX公司標準NDV陰性和陽性血清測定，該試紙條檢測血凝抑制抗體最低滴度為41og2；使用該試紙條和血凝抑制方法同時檢測60份樣品，試紙條檢測結果與血凝抑制試驗法檢測結果符合率為93.8%。

2.3 傳染性法氏囊病

傳染性法氏囊病是由傳染性法氏囊病毒（Infectiousbursaldiseasevirus，IBDV）引起的，主要感染幼雞的急性高度接觸性傳染病。在IBDV抗體檢測方面，2011年IsaNurulfiza等[1]以雞抗IBDV血清和滅活IBDV作為待標記物和檢測線，研制出檢測IBDV抗體的膠體金試紙條，使用該試紙條和BioCheck公司ELISA試劑盒檢測已知陽性樣品時，該試紙條檢測準確度與商品化ELISA試劑盒相同，靈敏度高于商品化ELISA試劑盒，最短僅2分鐘即出結果。

2.4 雞傳染性支氣管炎

雞傳染性支氣管炎是由雞傳染性支氣管炎病毒（Infectiousbronchitisvirus，IBV）引起的雞的一種呼吸道傳染性疾病，在我國雞群中廣泛存在。研究者用鼠抗雞IgG單克隆抗體和大腸桿菌表達IBV核衣殼蛋白分別制備了膠體金標記物和檢測線，研發出檢測IBV抗體的膠體金試紙條。同時使用該試紙條、血凝抑制實驗和IDEXX公司商品化ELISA試劑盒檢測120份血清樣品。結果顯示，與血凝抑制實驗相比該試紙條檢測敏感性為92.11%，陽性符合率為85%；與商品化ELISA試劑盒相比該試紙條檢測敏感性為92.31%，陽性符合率為95%。

3 展望

3.1 提升檢測靈敏度

與分子檢測技術相比，部分膠體金免疫層析試紙條存在著檢測靈敏度低、假陰性結果等缺陷。膠體金銀擴增免疫層析技術是基于攝影技術的免疫層析方法，結合有抗體的膠體金顆粒會使銀離子濃縮還原形成銀原子，并在膠體金金微粒周圍形成直徑為5～10μm的銀簇，使標記物的體積增加到膠體金微粒直徑的100倍，從而使檢測能力大大提高。研究者運用膠體金銀擴增免疫層析技術制備了檢測H5N1亞型禽流感病毒的試紙條，與普通的膠體金試紙條相比，其檢測靈敏度提高了500倍。

3.2 區分野生型毒（菌）株與疫苗毒（菌）株

疫苗作為動物疫病防控的重要手段得到了廣泛的應用，但疫苗的使用往往會干擾動物疫病診斷和監測。研制膠體金免疫層析試紙條時，可選用能區分野生型毒（菌）株與疫苗毒（菌）株的單克隆抗體或蛋白，從而獲得能區分野毒（菌）株與疫苗毒（菌）株的膠體金試紙條。研究者選用一株能特異性識別偽狂犬病野生型毒株的單克隆抗體，制備了檢測野生型偽狂犬病病毒抗體的試紙條，使用該試紙條和IDEXX公司ELISA試劑盒平行檢測樣品，統計發現該試紙條與商品化ELISA試劑盒檢測結果相符。

3.3 同一試紙條進行多疾病檢測

疾病種類繁雜，并且許多疾病臨床癥狀相似，出現混合感染。將易發生混合感染或常見的多種抗體或病原膠體金檢測方法整合到同一膠體金試紙條中，可有效擴大試紙條檢測范圍，提高檢測效率。

3.4 實現抗原或抗體定量檢測

目前，大部分膠體金僅能做定性判斷。而定量膠體金檢測多根據膠體金試紙條檢測已知不同濃度標準物時檢測線存在的色差，來繪制標準物濃度與檢測線顏色關系的標準曲線。當檢測樣品時，反應完成后將試紙條檢測線顏色與標準曲線做比較，以確定待檢樣品中目的檢測物含量。

4 結語

隨著新的標記物和制備方法的發展、標記技術的日趨成熟、單克隆抗體技術和分子生物學技術的廣泛應用，膠體金免疫層析技術將會有更為廣闊的應用前景，實現更加理想的價值，從而促進我國畜牧獸醫事業的健康、快速和持續發展。

參考文獻：

[1]徐一鳴。金寧一，楊振國，等.膠體金方法檢測H3和H7亞型禽流感病毒[刀.中國獸醫學報，2009，29（5）；580—583.

[2]彭伏虎，王政，張進良.等.膠體金試紙條檢測H9亞型禽流感病毒的研究[J].畜牧獸醫學報，2008。39（8）：1081—1086.