尾巨桉DH32—28組培快繁技術研究

楊衛星

摘要 以尾巨桉DH32-28半木質化萌發莖段為組織培養外植體材料，在不同的誘導、增殖和生根培養基條件下誘導不定芽，確定了適宜的培養基和培養條件，為加快優良無性系分化速度、縮短培養周期、降低生產成本奠定了理論基礎。

關鍵詞 尾巨桉DH32-28；外植體；組織培養

中圖分類號 Q94；S792.39 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2018）13-0138-02

Study on Tissue Culture and Rapid Propagation of Eucalyptus grandis×E.urophylla DH32-28

YANG Wei-xing

（Guangxi Paiyangshan State Forest Farm，Ningming Guangxi 532500）

Abstract The semi-lignified stem sections of Eucalyptus grandis×E.urophylla DH32-28 were used as tissue culture explant materials.The adventitious buds were induced by different induction，proliferation and rooting conditions.The suitable medium and culture conditions were determined，which laid a theoretical foundation for speeding up the differentiation speed of fine clones，shortening the period of culture and reducing the cost of production.

Key words Eucalyptus grandis×E.urophylla DH32-28；explant；tissue culture

桉樹為桃金娘科（Myrtlefamily）桉屬（Eucalyptus）常綠高大喬木，原產地為澳大利亞[1]。桉樹耐炎熱干旱，不耐寒，抗病性強，生長速度快，生命力強，用途廣泛，栽培種植經濟效益可觀，在世界上多個國家和地區均有栽植，是世界上著名的三大速生樹種之一[2]。我國桉樹栽培歷史已逾100年，在林業經濟樹種中占有重要地位[3]。尾巨桉DH32-28是廣西國有東門林場從純種子代測試和雜交育種試驗中選育的優良桉樹品種，具有年生長量高、抗逆性和適用性強且性狀穩定的特點。目前，已通過國家林木良種審定，已在營林生產中大規模推廣應用，并產生了良好的經濟效應、社會效應及生態效應[3-6]。

近年來，組培擴繁技術應用于林木育種已越來越成熟，通過組培擴繁技術能夠快速獲得高質量、穩定遺傳的種苗。據相關資料顯示，目前尚無關于尾巨桉DH32-28的組培技術資料和論文。因此，建立尾巨桉DH32-28組織培養與再生體系，一方面能夠突破商品化規模育苗瓶頸，另一方面又有利于轉基因體系的建立，為通過轉基因手段進行桉樹性狀改良奠定基礎。

1 材料與方法

外植體選用三年生尾巨桉DH32-28半木質化萌發莖段。雨后天氣晴朗3 d后，于10：00—15：00采集萌芽條；用飽和洗衣粉溶液刷洗干凈，再進行滅菌處理，切成1～2 cm長莖段，每段帶1個節；接種到培養基上，置于光強3 000 lx、溫度25 ℃條件下誘導不定芽。培養條件為溫度24～26 ℃、光照12～14 h/d、光強2 500～3 000 lx，試驗設計如表1所示。

2 結果與分析

2.1 外植體取材與滅菌

由表2可知，處理C為最佳方案，污染率較處理A、B、D分別高35.0%、54.5%、11.2%，但處理A、B的灼傷率分別是處理C的6.0、5.3倍，較處理D低27.1%；處理C成活率最高，達到53.7%，分別較處理A、B、D高46.3%、62.2%、17.0%；且滅菌后的外植體生長良好、萌芽較快。這說明酒精+氯化汞的消毒方法能夠有效降低外植體污染率，但會一定程度上傷害苗木，導致外植體褐化、灼傷甚至死亡。試驗還發現，將10%次氯酸鈉消毒過程分成2次，可在保證滅菌效果的同時，有效緩解黃化、白化、灼傷現象。

2.2 桉樹組織培養體系的建立

由表3可知，誘導培養基的激素濃度以處理C效果最佳，增殖倍數適宜，芽長勢及狀態良好，萌芽健壯，葉片舒展，速度快，長勢旺；處理A、B、D保存率分別較處理C低6.8%、6.0%、5.0%。試驗中發現，在激素不適宜時，容易出現褐化和玻璃化現象，生長緩慢，難以馴化。濃度過高時，芽生長速度快，但質量差、變異增多，易形成無效芽；濃度過低時，芽生長速度減緩、數量減少，延緩了育苗生產進度。

由表4可知，增殖培養階段以處理B效果最佳，增殖個數適宜，達到3.7個，芽分化良好。處理A激素濃度過高，增殖個數和莖芽伸長較處理B低37.8%和24.1%，長勢較弱，芽點過密，基部多見愈傷團塊；處理C、D激素濃度偏低，增殖個數和莖芽伸長分別較處理B低16.2%、48.6%和10.3%、31.0%，莖葉細長，長勢逐漸減弱。

由表5可知，生根培養階段以處理B效果最佳，根系發達，側根較多，根長達7.6 cm，長勢整齊旺盛，移栽成活率達98%。處理A激素濃度過高，苗高較處理B低22.2%，根長較處理B低22.4%，生根率較處理B低8.2%，培養過程中出現褐化、根基部膨大、部分不生根現象，長勢弱且不整齊，移栽成活率低。處理C、D激素濃度偏低，苗高較處理B低17.8%和35.6%，根長較處理B低18.4%和30.3%，生根率較處理B低6.1%和16.3%，根系不發達，側根少，生長緩慢，長勢弱且不整齊，移栽成活率低。

3 討論與結論

研究發現，尾巨桉DH32-28最佳外植體誘導培養基為MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.4 mg/L，萌芽率為87.5%；最佳增殖培養基為MS+6-BA 0.7 mg/L+NAA 0.35 mg/L，增殖個數為3.7個；最佳生根培養基1/2MS+IBA 0.3 mg/L+ABT1 0.6 mg/L，生根率可達98%，根長7.6 cm。

外植體采集后，應立刻用飽和洗衣粉水刷洗干凈，并及時清洗消毒，接種到誘導培養基上，以最大程度地保持枝條活性，提高萌芽率，降低污染率。酒精+氯化汞外植體消毒法污染率低，但對外植體傷害較大，褐化現象嚴重；新潔爾滅+次氯酸鈉消毒法的污染率較高，但對外植體傷害較小，萌芽較快且成活率高[7]。

外植體誘導階段不同的激素濃度及配比對誘導結果影響較大，MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.4 mg/L誘導出芽效果最好。誘導階段激素濃度過高時，易發生畸形異變，且愈傷組織呈白色松散團狀；濃度過低時，芽分化延遲[8]。增殖培養階段激素濃度過高也會出現畸形、玻璃化等現象。此外，工廠化生產中還應注意調節好暗培養、弱光培養及自然光培養時間，才能夠獲得長勢旺盛、增殖適宜的無菌芽，建立有效的無菌繁殖體系[7]。桉樹根系發育階段以自然光照射，有利于生根培養過程的根系發育、莖葉生長以及植株形成木質化，同時也可提高移栽成活率。此外，工廠化生產中生根研究的關鍵是減輕莖段基部褐化現象[8-10]，適量加入抗壞血酸（0.01～0.02 mg/L）和活性炭（40 mg/L）可以有效抑制褐化。

建立無菌芽誘導和無菌體系是組培快繁的核心技術環節。隨著桉樹種植規模的不斷擴大，對桉樹組織培養技術的要求也不斷提高[11]，如何加快優良無性系分化速度、縮短培養周期、降低生產成本，有待進一步的研究。

4 參考文獻

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