亞臨床甲狀腺功能減退癥稽留流產患者絨毛蛻膜組織中MMP—9、TSP—1的表達及臨床意義分析

文麗　楊小燕　張桂麗　張漢英

[摘要]目的 探討亞臨床甲狀腺功能減退癥稽留流產患者絨毛蛻膜組織中基質金屬蛋白酶-9（MMP-9）、血小板反應蛋白-1（TSP-1）的表達及臨床意義。方法 選擇2016年7月～2017年7月在我院婦產科門診就診的亞臨床甲狀腺功能減退稽留流產患者25例為研究組，選擇同期于我院就診的正常妊娠并自愿行人工流產的早孕患者25例為對照組。回顧性分析兩組的臨床資料，比較兩組絨毛蛻膜組織中MMP-9陽性表達情況和TSP-1陽性區的積分光密度值（IOD）差異。結果 研究組絨毛蛻膜組織中MMP-9表達陽性率為64.00%，低于對照組（88.00%），TSP-1陽性區IOD值（165.48±8.69），高于對照組（123.71±6.23），差異均有統計學意義（P<0.05）。結論 亞臨床甲狀腺功能減退癥稽留流產患者絨毛蛻膜組織中MMP-9表達明顯下降，TSP-1表達明顯升高，上述兩指標變化抑制新生血管形成，降低滋養細胞侵襲力，影響胚胎種植，進而導致稽留流產發生。

[關鍵詞]亞臨床甲狀腺功能減退癥；稽留流產；絨毛蛻膜；基質金屬蛋白酶-9；血小板反應蛋白-1

[中圖分類號] R737.9 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2018）6（a）-0108-03

[Abstract]Objective To investigate the expression and clinical significance of matrix metalloproteinase-9（MMP-9） and thrombospondin-1 （TSP-1） in chorionic and decidual tissues in missed abortion patients with subclinical hypothyroidism.Methods 25 cases of missed abortion patients with subclinical hypothyroidism treated in Department of Obstetrics and Gynecology clinic of our hospital from July 2016 to July 2017 were selected in the study group，and other 25 cases of early pregnant patients for voluntary induced abortion at the same period in our hospital were enrolled in the control group.The clinical data of two groups were retrospectively analyzed，and the MMP-9 positive expression in chorionic and decidual tissues and the integral optical density （IOD） in TSP-1 positive region were compared between the two groups.Results The MMP-9 positive expression rate in the chorionic and decidual tissues in the study group was lower than that in the control group，while the IOD value in TSP-1 positive region was higher than that in the control group，the differences were statistically significant （P<0.05）.Conclusion In missed abortion patients with subclinical hypothyroidism，the expression of MMP-9 in chorionic and decidual tissues decreases significantly while the expression of TSP-1 increases significantly.The above two indexes can inhibit the neovascularization，reduce the invasiveness of trophoblasts and affect the embryo implantation，leading to the occurrence of missed abortion.

[Key words]Subclinical hypothyroidism；Missed abortion；Chorionic and decidual；MMP-9；TSP-1

稽留流產指妊娠20周內子宮內出現死胎或胎兒死亡后未能及時排出體外的現象，是一種特殊的流產類型[1]。造成稽留流產的常見原因包括宮內感染、內分泌紊亂、染色體異常、免疫抗體等因素。妊娠期亞臨床甲狀腺功能減退癥患者存在代謝異常，可增加不良妊娠結局的發生風險，與流產有一定關聯[2]。相關文獻報道[3]，基質金屬蛋白酶-9（MMP-9）低表達會影響胚胎正常著床和生長發育。而血小板反應蛋白-1（TSP-1）高表達則影響胚胎種植，兩者在絨毛蛻膜組織中的表達與流產密切相關。本研究旨在探究亞臨床甲狀腺功能減退癥稽留流產患者絨毛蛻膜組織中MMP-9、TSP-1的表達水平和臨床意義，現報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇2016年7月～2017年7月在我院婦產科門診就診的亞臨床甲狀腺功能減退稽留流產患者25例為研究組，選擇同期于我院就診的正常妊娠并自愿行人工流產的早孕患者25例為對照組。納入標準：年齡24～35歲，月經基本規律，妊娠天數49～70 d；均為單胎妊娠；經宮腔鏡或子宮輸卵管造影證實宮腔形態正常，無宮腔粘連等器質性疾病；自愿簽署知情同意書。排除標準：合并糖尿病、甲亢、腎上腺功能異常等全身疾病者；合并衣原體、支原體等宮腔感染者。研究組年齡（28.46±5.47）歲；孕齡（7.36±2.48）周。對照組年齡（27.86±5.82）歲；孕齡（7.13±2.27）周。兩組的年齡、孕周等資料比較，差異無統計學意義（P﹥0.05），具有可比性。

1.2方法

①標本采集及處理：兩組均在行人工流產手術時收集絨毛蛻膜組織，用0.9%氯化鈉溶液沖洗后即刻放置于10%的甲醛溶液中，12～36 h后包埋于石蠟中，4 μm厚度切片，常規HE染色。②免疫組化法：將組織切片置于60℃恒溫箱中烤片20 min，用二甲苯將切片脫蠟；梯度乙醇脫水后用蒸餾水浸泡，行抗原修復；滴加3%過氧化氫室溫孵育20 min以消除內源性過氧化物酶活性；二抗使用免疫組化試劑盒，進行DAB顯示，蘇木素復染，常規脫水，透明封片。③MMP-9陽性評判標準[4]：顯微鏡下拍照，每張切片于400倍鏡下隨機選擇5個視野，每個視野計數100個細胞；以細胞質中出現明顯棕黃色顆粒為陽性細胞，無著色或背景顏色一致則判定為陰性細胞；計算陽性細胞數目，換算成百分數取平均值；根據百分比計分，0%為0分，1%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，76%～100%為4分；根據細胞著色強度計算強度得分，無著色為0分，淺棕色為1分，棕褐色為2分，深棕褐色為3分；陽性得分和強度得分相乘得總分，0分為陰性（-），1～3分為弱陽性（+），4～8分為中度陽性（++），9～12分為強陽性（+++）。④TSP-1水平測定：計算機圖文系統隨機選擇切片的10個視野（400倍鏡下），分析陽性區積分光密度值（IOD）。

1.3觀察指標[5]

比較兩組絨毛蛻膜組織中MMP-9陽性表達情況和TSP-1陽性區的IOD值。

1.4統計學方法

用統計學軟件SPSS 21.0進行數據分析，計量資料以均數±標準差（x±s）表示，采用t檢驗；計數資料以率表示，采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1兩組絨毛蛻膜組織中MMP-9表達陽性率的比較

研究組絨毛蛻膜組織中MMP-9表達陽性率為64.00%，低于對照組（88.00%），差異有統計學意義（P<0.05）（表1）。

2.2兩組TSP-1在絨毛蛻膜組織中表達的比較

采用計算機圖文系統隨機選擇絨毛蛻膜組織切片的10個視野（400倍鏡下），發現研究組TSP-1陽性區IOD值為165.48±8.69，高于對照組的123.71±6.23，差異有統計學意義（t=19.532，P<0.05）。

3討論

妊娠期亞臨床甲狀腺功能減退癥患者由于發生內分泌、代謝紊亂可導致流產等不良妊娠結局發生。隨診斷技術的發展，流產的發現和報道逐漸增多，稽留流產作為一種特殊的流產類型，其發生率也呈上升趨勢。近年來，對于MMP-9、TSP-1與胚胎植入、胚胎發育的關聯逐漸引起了臨床重視，本研究也就此展開了探討。

相關文獻表明[6-7]，MMP-9作為一種可參與組織創傷修復、促進新生血管形成的蛋白酶，在人體內分布較為廣泛。其作為一種活性物質，可與TIMPs這類抑制物結合，共同維持一個動態平衡，參與胎盤形成、植入、宮頸擴張等一系列生殖過程[8]。胚胎植入過程與滋養層細胞對子宮內膜的侵入作用息息相關，而MMP-9可降解內膜組織中細胞外基質（ECM），促進胚胎順利種植[9]。ECM組分中存在不同類型的糖蛋白、膠原蛋白等，MMP-9即通過對其的消化作用達到降解ECM，并加強滋養細胞侵襲能力[10]。本研究結果顯示，研究組絨毛蛻膜組織中MMP-9表達陽性率低于對照組，與蔣德菊等[11]的研究結果基本一致。該學者認為，MMP-9及其抑制物均在胚胎滋養層及蛻膜組織合成，兩者的平衡和相互調控對基質重建和侵入控制有關鍵作用。相關文獻報道稱，稽留流產患者的MMP-9在絨毛蛻膜組織中的低表達可降低滋養細胞侵襲力，不利于胚胎著床[12-13]。

TSP-1作為粘附蛋白家族的成員之一，在抑制血管生成中有重要作用[14-15]。胚胎種植及妊娠維持過程中，血管生成素和血管內皮生長因子（VEGF）通過促進血管生成達到穩定妊娠的作用[16]。而TSP-1可通過對VEGF合成的抑制作用破壞妊娠過程，影響胚胎種植[17]。在正常子宮內膜組織中，TSP-1主要存在于血管內皮細胞、腺上皮細胞的胞漿中，在妊娠第1～3 天持續表達，通過激活TGF-β1推動蛻膜化和胚胎種植；至妊娠第6天，TSP-1分泌減少，對血管生成的抑制作用也降低[18]。本研究中，研究組TSP-1陽性區IOD值高于對照組，提示稽留流產患者絨毛蛻膜組織中TSP-1表達明顯升高，通過抑制血管生成，破壞胚胎植入，進而增加流產風險。

綜上所述，亞臨床甲狀腺功能減退癥稽留流產患者絨毛蛻膜組織中MMP-9表達明顯下降，TSP-1表達明顯升高，上述兩指標變化抑制新生血管形成，降低滋養細胞侵襲力，影響胚胎種植，進而增加稽留流產發生的風險。

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（收稿日期：2018-02-08 本文編輯：崔建中）