牛初乳類產(chǎn)品免疫調(diào)節(jié)作用的動(dòng)物試驗(yàn)研究

文/王青云 楊曉波* 李凱鋒 梁 超

（ 黑龍江省完達(dá)山乳業(yè)股份有限公司）

牛初乳富含具有調(diào)節(jié)機(jī)體生理功能的活性物質(zhì),其中免疫因子主要是高含量、具有抗原結(jié)合特性的IgG[1]，具有豐富的營養(yǎng)價(jià)值。初乳中常規(guī)營養(yǎng)成分（蛋白質(zhì)、脂肪、維生素、礦物質(zhì)）和生物活性物質(zhì)（免疫因子、激素、生長因子等）的含量比常乳高數(shù)倍,具有極高的開發(fā)利用價(jià)值[2]。本文主要用完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品喂食小鼠，對(duì)細(xì)胞免疫功能、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)、體液免疫功能、單核—巨噬細(xì)胞吞噬功能和NK細(xì)胞活性進(jìn)行檢測，驗(yàn)證產(chǎn)品具有免疫調(diào)節(jié)作用。

1 材料與方法

1.1 樣品

完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品，由黑龍江省完達(dá)山乳業(yè)股份有限公司提供，樣品為乳黃色粉末，感官檢查未見異常。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

由黑龍江省腫瘤研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，編號(hào)為醫(yī)動(dòng)字第09-2-7號(hào)。將健康雌性小鼠隨機(jī)分為5 組，分別進(jìn)行遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)和小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)（免疫Ⅰ組）、碳廓清試驗(yàn)（免疫Ⅱ組）、脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)和NK細(xì)胞活性測定（免疫Ⅲ組）、半數(shù)溶血值（HC50）測定和抗體生成細(xì)胞檢測（免疫Ⅳ組）。

1.3 劑量設(shè)計(jì)

完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品的人體推薦量為每人每日2 g（含IgG 2.26%)，如成人體重以60 kg計(jì)，則相當(dāng)于0.033 g/kg·bw。小鼠的等效劑量為人體推薦量的10 倍，即每日0.33 g/kg·bw（中劑量），上、下各設(shè)一個(gè)劑量組：0.99 g/kg·bw（高劑量）和0.17 g/kg·bw（低劑量）。同時(shí)設(shè)清潔水（20 mL）和普通奶粉（0.33 g/kg·bw）分別作為陰性對(duì)照組和普通奶粉對(duì)照組。各組動(dòng)物則按20 mL/kg·bw灌胃容積進(jìn)行灌胃，連續(xù)灌胃30 d后測定各項(xiàng)免疫指標(biāo)。

1.4 儀器與試劑

動(dòng)物天平、分析天平、冰箱、離心機(jī)、722型分光光度計(jì)、顯微鏡、二氧化碳培養(yǎng)箱等。

無菌手術(shù)器械、游標(biāo)卡尺（精密度0.01 mm）、微量注射器（25 μL）、細(xì)胞計(jì)數(shù)器、紗布、試管、計(jì)時(shí)器、血色素吸管、24孔培養(yǎng)板等。

綿羊紅細(xì)胞（SRBC）、雞紅細(xì)胞、生理鹽水、補(bǔ)體（豚鼠血清）、SA緩沖液、都氏試劑、印度墨汁、Na2CO3、Hank's液（pH值7.2～7.4）、RPMI 1640培養(yǎng)液、小牛血清、青鏈霉素、氧化型輔酶I等。

表1 完達(dá)山牌乳珍對(duì)小鼠體重的影響

表2 完達(dá)山牌乳珍對(duì)小鼠臟器／體重比值的影響

表3 完達(dá)山牌乳珍對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（DTH）的影響（免疫Ⅰ組）

1.5 數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定

用方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)小鼠體重的影響

小鼠喂食完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d后的體重變化見表1。由表1可見，各劑量組與對(duì)照組相比，初始體重和終末體重均無顯著性差異（p＞0.05），說明本試驗(yàn)條件下完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)小鼠體重增長無影響。

2.2 完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)小鼠臟器/體重值的影響

喂食小鼠完達(dá)山牌乳珍30 d對(duì)臟器/體重值的影響見表2。由表2可見，經(jīng)口給予小鼠不同劑量的完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d后，低、中、高劑量組與對(duì)照組相比，脾臟/體重值和胸腺/體重值均無顯著性差異（p＞0.05），即完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)小鼠的臟器/體重值無影響。

2.3 完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（D TH）的影響

喂食小鼠完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（DTH）的影響見表3。由表3可見，經(jīng)口給予小鼠不同劑量的完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d后，高劑量組與普通奶粉對(duì)照組相比，注射SRBC 24 h后的小鼠足跖腫脹度（足跖厚度）差異極顯著（p＜0.01)，即完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品能增強(qiáng)小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。

表4 完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬紅細(xì)胞功能的影響（免疫Ⅰ組）

表5 完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)小鼠單核—巨噬細(xì)胞碳廓清功能的影響（免疫Ⅱ組）

2.4 完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞功能的影響

喂食小鼠完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞功能的影響見表4。由表4可見，經(jīng)口給予小鼠不同劑量的完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d后，各劑量組與普通奶粉對(duì)照組相比，吞噬百分?jǐn)?shù)和吞噬指數(shù)均無顯著性差異（p＞0.05），即完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品不能增強(qiáng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能。

2.5 完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)小鼠單核—巨噬細(xì)胞碳廓清功能的影響

喂食小鼠完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d對(duì)小鼠單核—巨噬細(xì)胞碳廓清功能的影響見表5。由表5可見，經(jīng)口給予小鼠不同劑量的完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d后，中、高劑量組與對(duì)照組相比，碳廓清功能差異顯著（p＜0.05），即完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品能夠顯著增強(qiáng)小鼠單核—巨噬細(xì)胞的碳廓清功能。

2.6 完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的影響

喂食小鼠完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的影響見表6。由表6可見，經(jīng)口給予不同劑量的完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d后，各劑量組與陰性對(duì)照組相比，小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能均無顯著性差異（p＞0.05），說明完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品不能影響小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能。

2.7 完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)小鼠NK細(xì)胞活性的影響

喂食小鼠完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d對(duì)小鼠NK細(xì)胞活性的影響見表7。由表7可見，經(jīng)口給予小鼠不同劑量的完達(dá)山牌乳珍30 d后，各劑量組與普通奶粉對(duì)照組相比，小鼠NK細(xì)胞活性均無顯著性差異（p＞0.05），說明完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品不能增強(qiáng)小鼠NK細(xì)胞活性。

2.8 完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)小鼠半數(shù)溶血值（HC50）的影響

喂食小鼠完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d對(duì)小鼠半數(shù)溶血值（HC50）的影響見表8。由表8可見，經(jīng)口給予小鼠不同劑量的完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d后，高、中劑量組與普通奶粉對(duì)照組相比，小鼠半數(shù)溶血值差異分別極顯著（p＜0.01）和顯著（p＜0.05），表明完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品能顯著提高小鼠半數(shù)溶血值。

表6 完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的影響（免疫Ⅲ組）

表7 完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)小鼠NK細(xì)胞活性的影響（免疫Ⅲ組）

表8 完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品對(duì)小鼠半數(shù)溶血值（HC50）的影響（免疫Ⅳ組）

表9 完達(dá)山牌乳珍對(duì)小鼠抗體生成細(xì)胞的影響（免疫Ⅳ組）

2.9 完達(dá)山牌乳珍對(duì)小鼠抗體生成細(xì)胞的影響

喂食小鼠完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d對(duì)小鼠抗體生成細(xì)胞的影響見表9。由表9可見，經(jīng)口給予不同劑量的完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d后，高、中劑量組與普通奶粉對(duì)照組相比，抗體生成細(xì)胞差異顯著（p＜0.05），表明完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品能增強(qiáng)小鼠抗體生成細(xì)胞功能。

3 小結(jié)

經(jīng)口給予小鼠不同劑量的完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品30 d，進(jìn)行了4 類、7項(xiàng)試驗(yàn)，即細(xì)胞免疫功能檢測（小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)和遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)）、體液免疫功能檢測（抗體生成細(xì)胞檢測和半數(shù)溶血值測定）、單核—巨噬細(xì)胞吞噬功能檢測（小鼠單核—巨噬碳廓清功能試驗(yàn)和小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)）以及NK細(xì)胞活性檢測。結(jié)果表明，完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品可顯著增強(qiáng)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)、碳廓清功能、半數(shù)溶血值及抗體生成細(xì)胞功能。由此可見，完達(dá)山牌乳珍產(chǎn)品可增強(qiáng)體液免疫功能、細(xì)胞免疫功能和單核—巨噬細(xì)胞吞噬功能，即具有免疫調(diào)節(jié)作用。