鴨致病性大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗

張 代 趙耀光

（商丘職業技術學院動物工程系 河南 商丘 476000）

鴨大腸桿菌病是養鴨生產中較為常見的細菌病[1]，它是由某些致病性大腸桿菌引起的。該病可發生在任何年齡的鴨群，其中雛鴨最易感染，發病率和死亡率較高[2]。主要癥狀是精神萎靡、食欲不振，呼吸困難，腹瀉，拉黃綠色或黃白色稀糞。臨床剖檢表現為纖維性心包炎，包心、包肝，氣囊炎、輸卵管炎等[3]。由于大腸桿菌血清型復雜，很難依靠疫苗進行控制，抗生素的大量使用又極易產生耐藥性，已逐漸成為人類的健康潛在的威脅。本試驗對商丘市某鴨場發病雛鴨分離的細菌進行了實驗室診斷和藥敏實驗，以期望為臨床上進行有效地預防和治療提供理論依據。

1 試驗材料

1.1 儀器。高壓滅菌器、生化培養箱、冰箱、顯微鏡。

1.2 培養基及試劑。普通瓊脂培養基、肉湯培養基、麥康瓊脂凱培養基、細菌生化鑒定管、藥敏試紙片。

1.3 試驗動物。健康小白鼠12只，購于鄭州大學試驗動物中心，體重20～24 g。

2 方法

2.1 病料的采集。剖檢鴨為商丘市某鴨場送往市動物疫病防控中心的臨床病例，病鴨臨床表現和剖檢結果與大腸桿菌病的典型特征吻合，疑似致病性大腸桿菌引起。無菌采取病鴨肝臟病料接種于普通瓊脂培養基上，置于37℃的生化培養箱培養18～24 h，觀察菌落形態。

2.2 細菌的分離、純化。根據菌落形態，挑取單個疑似菌落進行涂片、革蘭氏染色、鏡檢，后接種于麥康凱瓊脂培養基上，置于37℃的生化培養箱培養18～24 h，觀察菌落生長特點。

2.3 細菌的生化試驗。根據中國農業出版社出版的獸醫微生物試驗指導(姚火春主編)進行細菌生化試驗。

2.4 藥敏試驗。藥敏試驗采用瓊脂紙片擴散法，取細菌純培養物密集劃線接種于整個普通瓊脂平板上，將藥敏片依次均勻貼放到平板上，每個平板放5片，各紙片中心相距約24 mm，紙片距平板邊緣約15 mm，各紙片間距離相等，將平板倒置于37℃溫箱培養24 h，然后觀察藥物的抑菌情況，并測定各種藥物抑菌圈的大小。

2.5 動物試驗。取分離菌接種于營養肉湯中，37℃培養18 h，將12只小白鼠隨機分成2組(試驗組和對照組)，每組6只，試驗組采用腿部肌肉注射的方法，每只注射純培養物0.2 ml(約含細菌0.7億/只)，對照組每只腿部肌肉注射生理鹽水0.2 ml，接種24 h后觀察試驗動物的發病及死亡情況。

3 結果

3.1 病理剖檢結果。肝臟腫大且有出血點，表面附有白色的纖維素樣炎性滲出物。腹腔、胸腔及心包積液嚴重，心包膜明顯增厚，纖維素性心包炎、腹膜炎特征明顯。

3.2 培養特性結果。該細菌能在普通肉湯中生長良好，管底沉淀呈灰白色，輕搖呈云霧狀均勻渾濁；接種于麥康凱瓊脂培養基上生長呈現紅色的菌落。革蘭氏染色后鏡檢可見該菌較小，呈陰性，桿狀，兩端鈍圓，符合大腸桿菌的培養及染色的典型特點。

3.3 生化試驗結果。該菌能分解多數碳水化合物，即葡萄糖、麥芽糖、乳糖及甘露醇等，并且在發酵的過程中產酸產氣；不發酵蔗糖；吲哚試驗和MP試驗結果呈陽性反應；硫化氫試驗、檸檬酸鹽利用試驗以及尿素分解試驗結果呈陰性反應(見表1)。

表1 分離菌株的生化試驗結果

3.4 藥敏試驗結果。對丁胺卡那霉素高度敏感，對氯霉素、四環素、慶大霉素、鏈霉素、強力霉素、卡拉霉素、頭孢拉定及頭孢唑啉等中度敏感，對其他藥物不敏感(具有一定的耐藥性)。

表2 分離菌株的藥敏試驗結果

3.5 動物試驗結果。接種細菌的試驗組小白鼠均出現了呼吸急促、精神不振、厭食等癥狀，48 h內全部死亡，尸體剖檢結果顯示死亡小鼠心臟有少量的片狀出血位點，心包內有積液。接種生理鹽水的對照組則無任何異常現象，即小鼠能夠正常生存。

4 分析與討論

4.1 通過對分離菌株進行分離培養、染色鏡檢、生化鑒定、藥敏及動物試驗，可以確診分離株為鴨致病性大腸桿菌，并且致病性較強。

4.2 大腸桿菌病是一種常見病、多發病，其血清型眾多，控制難度極大。血清型不同，地區不同，大腸桿菌對藥物敏感性也各不相同。藥敏試驗結果表明，分離菌對丁胺卡那霉素藥物高度敏感，對氯霉素、四環素、慶大霉素、鏈霉素、強力霉素、卡拉霉素、頭孢拉定及頭孢唑啉等中度敏感，對阿莫斯林、氟哌酸、利福平、環丙沙星及左氧沙星等其他藥物已經產生了一定的耐藥性。

4.3 大腸桿菌是條件性致病菌，發病主要與環境條件有著極大的關系，因此為了減少大腸桿菌病的發生，我們應盡可能的搞好鴨舍清潔衛生，勤掃糞便，定期消毒，做好通風，飼喂優質飼料及清潔水，采用全進全出飼養方式，減少各種不良應激[4]。