海爾?？诜簩π∈蠹毙砸认傺椎淖饔醚芯?/h1>
2018-10-16 10:42:48楊鵬陳學繼黃夏詩陳偉潘青青韋儒志馮雪萍肖娟
右江醫(yī)學 2018年4期
楊鵬 陳學繼 黃夏詩 陳偉 潘青青 韋儒志 馮雪萍 肖娟
【摘要】 目的 探討海爾福口服液對急性胰腺炎小鼠的作用。方法 通過對小鼠腹腔注射L精氨酸（LArg）構建急性胰腺炎模型，采用海爾福口服液對模型小鼠進行灌胃，分析比較各組小鼠（生理鹽水組、海爾福組、LArg組、LArg+海爾福組）的血清淀粉酶含量變化及病理組織形態(tài)學變化。結果 與生理鹽水組對比，LArg組的血清淀粉酶含量顯著提高（P<0.05），病理切片出現(xiàn)腺泡明顯水腫、空泡化，小葉間隙增寬等表現(xiàn)；與LArg組相比，海爾福干預組的血清淀粉酶含量顯著降低（P<0.05），病理切片圖表明胰腺小葉結構完整，腺泡水腫程度減輕。結論 海爾?？诜耗軠p輕LArg誘導的急性胰腺炎的炎癥程度，降低血清淀粉酶含量，促進炎癥恢復。
【關鍵詞】 海爾福；L精氨酸；急性胰腺炎；血清淀粉酶
中圖分類號：R576 文獻標識碼：A DOI：10.3969/j.issn.10031383.2018.04.001
【Abstract】 Objective To investigate the effects of Haierful oral liquid on acute pancreatitis in mice.Methods Acute pancreatitis model was established by intraperitoneal injection of Larginine （LArg） in mice，and the model mice were given Haierfu oral liquid by intragastric administration.And then，the changes of serum amylase content and pathological histomorphology of mice in each group（saline group，Haierful group，LArg group and Haierful+ LArg group） were analyzed and compared.Results Compared with the saline group，the serum amylase content significantly increased in the LArg group（P<0.05），and the histopathologic sections showed obvious edema，vacuolation and widening of interlobular septum，etc.Compared with the LArg group，the serum amylase content in the the Haierful group significantly decreased（P<0.05），and the pathological sections showed that the pancreatic lobule structure was intact and the acinar edema degree reduced.Conclusion Haierful oral liquid can reduce the inflammation degree of acute pancreatitis induced by LArg，reduce serum amylase content，and promote the recovery of inflammation.
【Key words】 Haierful oral liquid；LArg；acute pancreatitis；serum amylase
急性胰腺炎（acute pancreatitis，AP）是一種發(fā)病迅速，病情復雜，致死率高，治療費用昂貴的急重癥。全世界的科研工作者對急性胰腺炎進行了大量的研究，但其作用機制尚未完全清楚，治療該種疾病的特異性藥物也尚未研制成功。海爾?？诜菏俏以簭垬淝蚪淌谘兄瞥晒Φ囊环N功能性飲料，可作為抗氧化劑來清除機體的氧自由基，保護炎癥細胞中的細胞膜和線粒體功能，減少線粒體自噬，提供穩(wěn)定的ATP，有利于炎癥恢復。目前為止尚未發(fā)現(xiàn)海爾福對急性胰腺炎作用的相關文獻報道，本實驗擬注射L精氨酸（LArg）構建急性胰腺炎小鼠模型，采用中藥提取液海爾福干預AP小鼠，并分析比較生理鹽水（NS）組、海爾福（Haierful）組、LArg組和LArg+海爾福組的血清淀粉酶（AMS）的變化及胰腺組織病理學變化，探討海爾?？诜簩P小鼠的作用。
1 材料與方法
1.1 實驗動物與分組
實驗動物： SPF級6周齡昆明小鼠40只（由右江民族醫(yī)學院動物實驗中心提供，許可證號：SCXK（桂）20172003，使用許可證號：SYXK（桂）20170004），雌雄各半，體重（20±2）g。分組：SPF級環(huán)境下，適應性飼養(yǎng)一周后將小鼠隨機分為4組：NS組（n=10），海爾福組（n=10）、LArg組（n=10）和LArg+海爾福組（n=10）。
1.2 藥品
海爾?？诜河捎医褡遽t(yī)學院海爾福研制中心提供，該口服液由金銀花、茯苓、甘草、楊桃果等中藥精制而成[1]。
1.3 試劑及儀器
L精氨酸（上海起發(fā)實驗試劑有限公司）；AMS 試劑盒（南京建成生物工程研究所）；低速臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）；電熱恒溫水浴鍋（北京長源實驗設備廠）。
1.4 實驗方法
1.4.1 模型建立
所有小鼠在實驗前禁食12 h，可自由飲水。前14 d，每間隔24 h，NS組和LArg組每天灌胃0.3 ml生理鹽水，海爾福組和LArg+海爾福組每天灌胃0.3 ml海爾?？诜骸５?5天，分兩次間隔1 h生理鹽水組和海爾福組腹腔注射NS （0.01 ml/g體重），LArg組和LArg+海爾福組腹腔注射LArg（0.01 ml/g體重），LArg劑量為2 mg/g，濃度為20%。最后一次注射完成12 h后，行小鼠眼球取血，分離血清，測定血清淀粉酶含量；小鼠頸椎脫臼處死，取胰腺用標本固定液固定后，石蠟包埋、切片，常規(guī)HE染色，光鏡下觀察組織形態(tài)學變化。
1.4.2 小鼠血清淀粉酶含量檢測
取適量制備好的血清，按照試劑盒使用說明書，檢測和計算各血清樣本中血清淀粉酶濃度（碘淀粉比色法）。
1.4.3 胰腺組織病理學檢查
小鼠頸椎脫臼處死后解剖，取胰腺制作病理組織切片，光鏡下觀察胰腺組織形態(tài)學變化。
1.5 統(tǒng)計學方法
采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，進一步兩兩比較采用最小顯著性差異法（LSD），檢驗水準：α=0.05，雙側檢驗。
2 結 果
2.1 各組小鼠的血清淀粉酶含量檢測
血清檢驗結果表明，與生理鹽水組對比，海爾福組的血清淀粉酶含量差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），LArg組的血清淀粉酶含量顯著提升（P<0.05），表明成功誘導急性胰腺炎模型。LArg+海爾福組與生理鹽水組之間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），而與LArg組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。實驗結果表明，LArg會導致急性胰腺炎發(fā)生，血清淀粉酶提升，而海爾福能有效降低AP的血清淀粉酶含量。見表1。
2.2 胰腺病理學檢查
生理鹽水組小鼠胰腺切片提示：光鏡下胰腺組織結構清晰，細胞形態(tài)正常，無水腫，無明顯出血壞死；海爾福組小鼠胰腺切片提示：光鏡下胰腺腺泡結構清晰，細胞形態(tài)正常，無水腫；LArg組小鼠胰腺切片提示：光鏡下可見腺泡明顯水腫、空泡化，腺泡邊界不清，小葉間隙增寬，血管變化不明顯；LArg+海爾福組小鼠胰腺切片提示：胰腺小葉結構完整，腺泡水腫程度減輕。見圖1 A～D。
3 討 論
LArg少量多次重復腹腔注射小鼠誘導急性胰腺炎，方法簡單易操作，重復性好，發(fā)病進程及組織學變化與人類相似，是常用的復制急性胰腺炎的方法[2]。經(jīng)前人研究發(fā)現(xiàn)，AP的發(fā)生與體內自由基的釋放和清除機制紊亂有關[3]，自由基參與 AP 胰腺水腫的形成過程，機體自由基增加會導致胰腺組織的直接損傷[4]，甚至加速胰腺的壞死進程。
海爾?？诜河山疸y花、茯苓、甘草、楊桃果等中藥精制而成，富含鋅、硒、鈣、鎂等微量元素，具有清熱解毒、健脾利濕、清除自由基、穩(wěn)定生物膜、增強機體免疫力、提高機體的抗氧化能力等作用[5～8]，可修復損傷的線粒體膜[9]，促進細胞能量代謝，保護線粒體功能，促進炎癥的恢復。血清淀粉酶活性測定是急性胰腺炎診斷的主要生化指標之一，通過測定血清淀粉酶活性可以了解胰腺炎的炎癥程度。本實驗的小鼠血清淀粉酶濃度檢測結果表明，LArg組的含量與生理鹽水組對比有顯著提升，病理結果顯示腺泡水腫，小葉間隙增寬。從病理切片和血清淀粉酶含量來看，海爾福組與生理鹽水組差異無統(tǒng)計學意義。在LArg+海爾福組中，小鼠的血清淀粉酶與生理鹽水組、海爾福組之間比較差異無統(tǒng)計學意義，與LArg組比較有統(tǒng)計學意義，病理切片圖發(fā)現(xiàn)LArg+海爾福組小葉結構完整，腺泡水腫程度較LArg減輕。
本實驗結果表明，海爾福有一定的修復急性胰腺炎損傷細胞和保護胰腺組織的作用，這與其具有很強的清除自由基能力和提高機體抗氧化能力是吻合的。另外，海爾福富含Mg2+（含量高達164.57 μmol/L），因Mg2+含量的高低直接影響到機體體內多種關鍵酶的活性，如磷酸果糖激酶、己糖激酶、丙酮酸激酶等[5]。通過比較，海爾福能夠有效降低AP的血清淀粉酶含量，修復受損細胞，其作用機理可能與其Mg2+含量豐富，提高體內一系列酶活性，調節(jié)物質代謝過程有關。但海爾福對急性胰腺炎最大的有效給藥劑量、藥物應用間隔時間和作用機制有待進一步深入探索。
參 考 文 獻
[1] 楊海龍，梁偉江，吳 艷，等.中藥海爾福對鋁中毒小鼠模型大腦的乙酰膽堿轉移酶活性的影響[J].環(huán)境衛(wèi)生學雜志，2014，4（6）：509513.
[2] 譚至柔，唐國都，姜海行，等.抗氧化劑對急性胰腺炎大鼠核因子κB和一氧化氮合酶的影響[J].世界華人消化雜志，2004，12（3）：711713.
[3] Schulz HU，Niederau C，KlonowskiStumpe H，et al.Oxidative stress in acute pancreatitis[J].Hepatogastroenterology，1999，46（29）：27362750.
[4] 彭承宏，闕日升，周君富，等.一氧化氮等自由基在急性胰腺炎及并發(fā)SIRS中的作用[J].中國實用外科雜志，2000，20（12）：718720.
[5] 李 韜，張樹球，盧彩珍，等.海爾福微量元素的測定分析[J].右江民族醫(yī)學院學報，1995，17（1）：1416.
[6] 蒙 山，曲德英，張樹球，等.海爾?？诜罕Ｗo砷中毒小鼠肝臟的病理學觀察[J].中國地方病防治雜志，2005，20（1）：1213.
[7] 李 韜，陳菊芳，玉 瑩，等.海爾福對鋁致老年癡呆癥小鼠治療效果的實驗研究[J].工業(yè)衛(wèi)生與職業(yè)病，2012，38（4）：224227.
[8] 何 勝，楊 猛，廖維芳，等.海爾福口服液對自由基清除率影響的實驗研究[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結合雜志，2011，20（26）：32683269.
[9] 李 海，王金花，黎 飚，等.汞對雄性小鼠生殖腺的影響及海爾福的治療作用[J].中國冶金工業(yè)醫(yī)學雜志，2010，27（4）：381382.
（收稿日期：2018-05-07 修回日期：2018-06-15）
（編輯：梁明佩）
楊鵬 陳學繼 黃夏詩 陳偉 潘青青 韋儒志 馮雪萍 肖娟
【摘要】 目的 探討海爾福口服液對急性胰腺炎小鼠的作用。方法 通過對小鼠腹腔注射L精氨酸（LArg）構建急性胰腺炎模型，采用海爾福口服液對模型小鼠進行灌胃，分析比較各組小鼠（生理鹽水組、海爾福組、LArg組、LArg+海爾福組）的血清淀粉酶含量變化及病理組織形態(tài)學變化。結果 與生理鹽水組對比，LArg組的血清淀粉酶含量顯著提高（P<0.05），病理切片出現(xiàn)腺泡明顯水腫、空泡化，小葉間隙增寬等表現(xiàn)；與LArg組相比，海爾福干預組的血清淀粉酶含量顯著降低（P<0.05），病理切片圖表明胰腺小葉結構完整，腺泡水腫程度減輕。結論 海爾?？诜耗軠p輕LArg誘導的急性胰腺炎的炎癥程度，降低血清淀粉酶含量，促進炎癥恢復。
【關鍵詞】 海爾福；L精氨酸；急性胰腺炎；血清淀粉酶
中圖分類號：R576 文獻標識碼：A DOI：10.3969/j.issn.10031383.2018.04.001
【Abstract】 Objective To investigate the effects of Haierful oral liquid on acute pancreatitis in mice.Methods Acute pancreatitis model was established by intraperitoneal injection of Larginine （LArg） in mice，and the model mice were given Haierfu oral liquid by intragastric administration.And then，the changes of serum amylase content and pathological histomorphology of mice in each group（saline group，Haierful group，LArg group and Haierful+ LArg group） were analyzed and compared.Results Compared with the saline group，the serum amylase content significantly increased in the LArg group（P<0.05），and the histopathologic sections showed obvious edema，vacuolation and widening of interlobular septum，etc.Compared with the LArg group，the serum amylase content in the the Haierful group significantly decreased（P<0.05），and the pathological sections showed that the pancreatic lobule structure was intact and the acinar edema degree reduced.Conclusion Haierful oral liquid can reduce the inflammation degree of acute pancreatitis induced by LArg，reduce serum amylase content，and promote the recovery of inflammation.
【Key words】 Haierful oral liquid；LArg；acute pancreatitis；serum amylase
急性胰腺炎（acute pancreatitis，AP）是一種發(fā)病迅速，病情復雜，致死率高，治療費用昂貴的急重癥。全世界的科研工作者對急性胰腺炎進行了大量的研究，但其作用機制尚未完全清楚，治療該種疾病的特異性藥物也尚未研制成功。海爾?？诜菏俏以簭垬淝蚪淌谘兄瞥晒Φ囊环N功能性飲料，可作為抗氧化劑來清除機體的氧自由基，保護炎癥細胞中的細胞膜和線粒體功能，減少線粒體自噬，提供穩(wěn)定的ATP，有利于炎癥恢復。目前為止尚未發(fā)現(xiàn)海爾福對急性胰腺炎作用的相關文獻報道，本實驗擬注射L精氨酸（LArg）構建急性胰腺炎小鼠模型，采用中藥提取液海爾福干預AP小鼠，并分析比較生理鹽水（NS）組、海爾福（Haierful）組、LArg組和LArg+海爾福組的血清淀粉酶（AMS）的變化及胰腺組織病理學變化，探討海爾?？诜簩P小鼠的作用。
1 材料與方法
1.1 實驗動物與分組
實驗動物： SPF級6周齡昆明小鼠40只（由右江民族醫(yī)學院動物實驗中心提供，許可證號：SCXK（桂）20172003，使用許可證號：SYXK（桂）20170004），雌雄各半，體重（20±2）g。分組：SPF級環(huán)境下，適應性飼養(yǎng)一周后將小鼠隨機分為4組：NS組（n=10），海爾福組（n=10）、LArg組（n=10）和LArg+海爾福組（n=10）。
1.2 藥品
海爾?？诜河捎医褡遽t(yī)學院海爾福研制中心提供，該口服液由金銀花、茯苓、甘草、楊桃果等中藥精制而成[1]。
1.3 試劑及儀器
L精氨酸（上海起發(fā)實驗試劑有限公司）；AMS 試劑盒（南京建成生物工程研究所）；低速臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）；電熱恒溫水浴鍋（北京長源實驗設備廠）。
1.4 實驗方法
1.4.1 模型建立
所有小鼠在實驗前禁食12 h，可自由飲水。前14 d，每間隔24 h，NS組和LArg組每天灌胃0.3 ml生理鹽水，海爾福組和LArg+海爾福組每天灌胃0.3 ml海爾?？诜骸５?5天，分兩次間隔1 h生理鹽水組和海爾福組腹腔注射NS （0.01 ml/g體重），LArg組和LArg+海爾福組腹腔注射LArg（0.01 ml/g體重），LArg劑量為2 mg/g，濃度為20%。最后一次注射完成12 h后，行小鼠眼球取血，分離血清，測定血清淀粉酶含量；小鼠頸椎脫臼處死，取胰腺用標本固定液固定后，石蠟包埋、切片，常規(guī)HE染色，光鏡下觀察組織形態(tài)學變化。
1.4.2 小鼠血清淀粉酶含量檢測
取適量制備好的血清，按照試劑盒使用說明書，檢測和計算各血清樣本中血清淀粉酶濃度（碘淀粉比色法）。
1.4.3 胰腺組織病理學檢查
小鼠頸椎脫臼處死后解剖，取胰腺制作病理組織切片，光鏡下觀察胰腺組織形態(tài)學變化。
1.5 統(tǒng)計學方法
采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，進一步兩兩比較采用最小顯著性差異法（LSD），檢驗水準：α=0.05，雙側檢驗。
2 結 果
2.1 各組小鼠的血清淀粉酶含量檢測
血清檢驗結果表明，與生理鹽水組對比，海爾福組的血清淀粉酶含量差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），LArg組的血清淀粉酶含量顯著提升（P<0.05），表明成功誘導急性胰腺炎模型。LArg+海爾福組與生理鹽水組之間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），而與LArg組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。實驗結果表明，LArg會導致急性胰腺炎發(fā)生，血清淀粉酶提升，而海爾福能有效降低AP的血清淀粉酶含量。見表1。
2.2 胰腺病理學檢查
生理鹽水組小鼠胰腺切片提示：光鏡下胰腺組織結構清晰，細胞形態(tài)正常，無水腫，無明顯出血壞死；海爾福組小鼠胰腺切片提示：光鏡下胰腺腺泡結構清晰，細胞形態(tài)正常，無水腫；LArg組小鼠胰腺切片提示：光鏡下可見腺泡明顯水腫、空泡化，腺泡邊界不清，小葉間隙增寬，血管變化不明顯；LArg+海爾福組小鼠胰腺切片提示：胰腺小葉結構完整，腺泡水腫程度減輕。見圖1 A～D。
3 討 論
LArg少量多次重復腹腔注射小鼠誘導急性胰腺炎，方法簡單易操作，重復性好，發(fā)病進程及組織學變化與人類相似，是常用的復制急性胰腺炎的方法[2]。經(jīng)前人研究發(fā)現(xiàn)，AP的發(fā)生與體內自由基的釋放和清除機制紊亂有關[3]，自由基參與 AP 胰腺水腫的形成過程，機體自由基增加會導致胰腺組織的直接損傷[4]，甚至加速胰腺的壞死進程。
海爾?？诜河山疸y花、茯苓、甘草、楊桃果等中藥精制而成，富含鋅、硒、鈣、鎂等微量元素，具有清熱解毒、健脾利濕、清除自由基、穩(wěn)定生物膜、增強機體免疫力、提高機體的抗氧化能力等作用[5～8]，可修復損傷的線粒體膜[9]，促進細胞能量代謝，保護線粒體功能，促進炎癥的恢復。血清淀粉酶活性測定是急性胰腺炎診斷的主要生化指標之一，通過測定血清淀粉酶活性可以了解胰腺炎的炎癥程度。本實驗的小鼠血清淀粉酶濃度檢測結果表明，LArg組的含量與生理鹽水組對比有顯著提升，病理結果顯示腺泡水腫，小葉間隙增寬。從病理切片和血清淀粉酶含量來看，海爾福組與生理鹽水組差異無統(tǒng)計學意義。在LArg+海爾福組中，小鼠的血清淀粉酶與生理鹽水組、海爾福組之間比較差異無統(tǒng)計學意義，與LArg組比較有統(tǒng)計學意義，病理切片圖發(fā)現(xiàn)LArg+海爾福組小葉結構完整，腺泡水腫程度較LArg減輕。
本實驗結果表明，海爾福有一定的修復急性胰腺炎損傷細胞和保護胰腺組織的作用，這與其具有很強的清除自由基能力和提高機體抗氧化能力是吻合的。另外，海爾福富含Mg2+（含量高達164.57 μmol/L），因Mg2+含量的高低直接影響到機體體內多種關鍵酶的活性，如磷酸果糖激酶、己糖激酶、丙酮酸激酶等[5]。通過比較，海爾福能夠有效降低AP的血清淀粉酶含量，修復受損細胞，其作用機理可能與其Mg2+含量豐富，提高體內一系列酶活性，調節(jié)物質代謝過程有關。但海爾福對急性胰腺炎最大的有效給藥劑量、藥物應用間隔時間和作用機制有待進一步深入探索。
參 考 文 獻
[1] 楊海龍，梁偉江，吳 艷，等.中藥海爾福對鋁中毒小鼠模型大腦的乙酰膽堿轉移酶活性的影響[J].環(huán)境衛(wèi)生學雜志，2014，4（6）：509513.
[2] 譚至柔，唐國都，姜海行，等.抗氧化劑對急性胰腺炎大鼠核因子κB和一氧化氮合酶的影響[J].世界華人消化雜志，2004，12（3）：711713.
[3] Schulz HU，Niederau C，KlonowskiStumpe H，et al.Oxidative stress in acute pancreatitis[J].Hepatogastroenterology，1999，46（29）：27362750.
[4] 彭承宏，闕日升，周君富，等.一氧化氮等自由基在急性胰腺炎及并發(fā)SIRS中的作用[J].中國實用外科雜志，2000，20（12）：718720.
[5] 李 韜，張樹球，盧彩珍，等.海爾福微量元素的測定分析[J].右江民族醫(yī)學院學報，1995，17（1）：1416.
[6] 蒙 山，曲德英，張樹球，等.海爾?？诜罕Ｗo砷中毒小鼠肝臟的病理學觀察[J].中國地方病防治雜志，2005，20（1）：1213.
[7] 李 韜，陳菊芳，玉 瑩，等.海爾福對鋁致老年癡呆癥小鼠治療效果的實驗研究[J].工業(yè)衛(wèi)生與職業(yè)病，2012，38（4）：224227.
[8] 何 勝，楊 猛，廖維芳，等.海爾福口服液對自由基清除率影響的實驗研究[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結合雜志，2011，20（26）：32683269.
[9] 李 海，王金花，黎 飚，等.汞對雄性小鼠生殖腺的影響及海爾福的治療作用[J].中國冶金工業(yè)醫(yī)學雜志，2010，27（4）：381382.
（收稿日期：2018-05-07 修回日期：2018-06-15）
（編輯：梁明佩）
