傷科解毒顆粒的薄層色譜研究

廣西壯族自治區玉林市中西醫結合骨科醫院藥劑科，廣西 玉林

傷科解毒顆粒是我院正在研制的院內制劑，由金銀花、野菊花、桃仁、紅花、延胡索、柴胡等藥組成，在我院臨床使用多年，用于防治骨折術后感染和下肢靜脈血栓療效確切。方中金銀花為君藥，清熱解毒，可防治術后感染；延胡索具有活血行氣止痛之功效，可以有效的緩解術后疼痛，柴胡具有疏散退熱，疏肝解郁，升舉陽氣的功效，協同各藥發揮療效。為了更好地控制制劑的質量，參考《中藥藥典》(2015版)[1]以及查閱文獻[2-6]，制定傷科解毒顆粒中金銀花、延胡索、柴胡的專屬性薄層色譜鑒別方法。

1 儀器與試藥

梅特勒電子分析天平(型號：AB204-S)；JJ1000型電子天平(常熟市雙杰測試儀器廠)；800型離心機(上海碩光電子科技有限公司)；KQ-50E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；定量點樣毛細管；聚酰胺薄膜(浙江省臺州市路橋四甲生化塑料廠)；傷科解毒顆粒樣品及相應陰性對照為本院制劑室自制，對照品和對照藥材均購自中國藥品生物制品鑒定所，金銀花對照藥材(批號：121060-201608)；綠原酸對照品(批號：110753-201716)；延胡索(元胡)對照藥材(批號：120928-201609)；延胡索乙素對照品(批號：110726-201718)；柴胡(北柴胡)對照藥材(批號：120992-201509)，其余試劑均為分析純。

2 方法與試藥

2.1 金銀花的薄層鑒別 稱取四個不同批號傷科解毒顆粒15 g，加石油醚(60～90℃)30 mL，加熱回流1 h，棄去石油醚，殘渣揮干溶劑，加入甲醇30 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加水溶解，用氯仿萃取2次，每次25 mL，棄去氯仿層，水層用乙酸乙酯萃取2次，每次25 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇2 mL溶解，作為供試品。另按相同工藝和比例制備缺金銀花的陰性對照樣品，取缺金銀花的陰性對照樣品15 g，同法制成陰性對照品溶液。金銀花對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。綠原酸用甲醇制成濃度為1 mg/mL的對照品溶液。吸取上述四種溶液1 μL，點于同一塊聚酰胺薄膜上，于36%醋酸溶液中展開，展距約為8～9 cm，取出，晾干，于紫外365 nm下檢視，供試品溶液于對照品、對照藥材在相同位置顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照不得在相同位置顯相同顏色的熒光斑點。實驗結果如圖1所示。

2.2 延胡索的薄層鑒別 傷科解毒顆粒15 g，加甲醇50 mL，超聲30 min，3500 r/min離心5 min，上清液水浴蒸干，殘渣加水20 mL溶解，加入約2 mL稀鹽酸調溶液至pH2以下，3500 r/min離心5分鐘，上清液用氨試液調節pH值至9以上，用乙酸乙酯提取3次，每次10 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL溶解，作為供試品溶液。取醋延胡索陰性對照顆粒15 g，同法制成醋延胡索陰性對照溶液。取延胡索對照藥材1 g同法制成延胡索對照藥材溶液。取延胡索乙素對照品，加甲醇制成濃度為0.5 mg/mL的延胡索乙素對照品溶液。吸取上述四種溶液15 μL，點于同一塊1%NaOH硅膠G板上，于甲苯-丙酮(9∶2)中展開，展距約為8～9 cm，取出，晾干，噴以新鮮配制的碘化鉍鉀溶液，熱風吹至顯色，日光下檢視，供試品溶液于對照藥材、對照品溶液在相同位置顯相同顏色的斑點。陰性對照不得在相同位置顯相同顏色的斑點。實驗結果如圖2所示。

2.3 柴胡的薄層鑒別 傷科解毒顆粒15 g，加沸水50 mL溶解，濾過，濾液加水飽和的正丁醇萃取3次，每次25 mL，用氨試液洗滌兩次，每次25 mL，用正丁醇飽和的水洗2次，每次25 mL，正丁醇層水浴蒸干，殘渣加甲醇2 mL溶解，作為供試品。取柴胡陰性顆粒15 g，同法制成柴胡陰性溶液。柴胡對照藥材2 g，加水100 mL，煎煮1 h，放冷，濾過，濾液同法制成柴胡對照藥材溶液。吸取上述三種溶液15 μL，點于同一塊硅膠 g板上，于氯仿-甲醇-水(7∶3∶1)10℃下放置5 h以上的下層液中展開，展距約為8～9 cm，取出晾干，噴以2%對二甲基苯甲醛的40%硫酸溶液，熱風吹至顯色，日光和紫外365 nm下分別檢視，都不得少于3個相同顏色的對應斑點。陰性對照不得在相同位置顯相同顏色的斑點。實驗結果如圖3所示。

3 討論

在金銀花的鑒別試驗中，比較了甲醇超聲、乙酸乙酯萃取的方法，均不能有效分離雜質，綠原酸斑點都有干擾，所以采取了加熱回流提取后再萃取純化，效果較好。比較了①乙酸丁酯-甲酸-水(7∶2.5∶2.5)[1]、②乙酸乙酯-甲醇-水(10∶4∶6)10℃以下放置過夜的下層液[9]、③36%醋酸[10]3種展開系統，①拖尾嚴重；②有邊緣效應；③斑點清晰，分離度較好，無陰性干擾。試驗還比較了硅膠g板、硅膠h板、聚酰胺薄膜[11]的展開效果，聚酰胺薄膜點樣量少，斑點分離清晰，展開效果較好。綠原酸對照品色譜中有2個斑點，與本課題相關試驗中的高效液相色譜行為一致，可能是綠原酸極性較大，易分解的緣故[12]。

延胡索的鑒別按《中國藥典》[1]中的方法進行鑒別時，斑點較淡，不易觀察。本試驗調整提取方法，中間用酸調過濾后再加氨試液進行萃取[13]，以去除雜質干擾。比較1%氫氧化鈉的硅膠g板、普通硅膠g板氨蒸汽飽和展開、1%氫氧化鈉的硅膠g板氨蒸汽飽和展開，以1%氫氧化鈉的硅膠g板展開效果最佳。顯色方法比較了放置碘缸和碘化鉍鉀試液[14]，放置碘缸的顯色方法斑點不清晰，噴以新鮮配置的碘化鉍鉀試液后斑點顯色迅速，清晰。

柴胡在《中國藥典》中的提取方法較為簡單，但是筆者用此方法制備供試液進行鑒別供試品呈一條光帶，斑點沒有分離出來，于是對提取方法進行純化精制[15]。雖然方法繁復，但是供試品色譜斑點清晰，適合于復方制劑中柴胡皂苷的檢出。本試驗也用乙酸乙酯-乙醇-水(8∶2∶1)、氯仿-甲醇-水(6.5∶3.5∶1)10℃以下放置的下層液為展開劑[14]，效果均不理想，斑點分離不夠清晰。試驗也比較了60℃烘干、熱風吹干、105℃烘干3種三色方法，發現60℃烘干顯色速度較慢，時間不易控制，105℃烘干易糊化，熱風吹干顯色速度快，易于觀察和控制。

傷科解毒顆粒的輔料為糖粉和糊精，所以用水溶解的過程中，糖的干擾會很大，所以去除糖分干擾，純化供試品溶液成為提取的關鍵。本試驗的提取方法步驟雖較多較繁雜，但是比較適合復方制劑中藥材的鑒別。