膠滴腫瘤藥敏檢測技術與結直腸癌預后之間的關系

路萬林，張宏

中國醫科大學附屬盛京醫院第四普通外科結直腸腫瘤病房，遼寧沈陽 110004

結直腸癌是全世界最常見的惡性腫瘤之一，在世界范圍內其發病率居所有癌癥的第3位[1]。化學治療在結直腸癌綜合治療中占有舉足輕重的地位。近年來發現在腫瘤治療中，由于患者之間存在著較大的個體差異，并且腫瘤本身也存在著異質性，同一種化療藥物對于不同患者的有效性截然不同。不當的化療導致患者生活質量下降，更重要的是有可能誘發多重耐藥，導致治療失敗。因此在結直腸癌的術后輔助化學治療中，需要針對不同的患者選擇不同的藥物，實施“個體化治療”。1997年Kobayashi H等[2]報道了膠滴腫瘤藥敏檢測技術 （collagen gel droplet embedded culture drug sensitivity test，CD-DST）。 該技術利用膠原凝膠形成的三維立體結構，在體外模擬了腫瘤細胞體內生長的微環境，通過對體外培養的腫瘤細胞進行不同化療藥物敏感性檢測，來幫助患者選擇最合適的化療藥物，提高臨床療效以及延長患者的生存期。目前該技術已在結直腸癌，肺癌，乳腺癌，婦科腫瘤等多領域取得了較大進展[3-5]。然而，目前對患者開展腫瘤體外藥敏試驗后預后效果研究較少。因此，該院室回顧性分析了從2012年6月—2017年6月間共311例結直腸癌患者藥敏試驗信息，術后抗腫瘤治療情況，隨訪患者的預后情況，擬探討不同藥敏試驗結果與患者術后的生存狀態之間的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

統計從就診于中國醫科大學附屬盛京醫院結直腸腫瘤外科,進行結直腸癌手術且完成術后全部化療周期的患者311例。分為實驗組進行藥敏試驗并根據試驗結果指導完成化療患者132例（根據檢測結果又分為藥物高敏感組89例，低敏感組43例），對照組未進行藥敏試驗，并根據美國國立綜合癌癥網絡指南完成化療患者179例，所有患者均經病理學證實，同意入組實驗研究，并通過該院倫理委員會批準。統計患者年齡性別臨床分期等基線特征如表1。回顧性分析不同分期結直腸癌患者藥敏試驗狀態與患者預后的關系，電話隨訪確定患者生存時間，末次隨訪時間為2018年2月。

表1 311例患者基線資料特征

1.2 藥敏試驗操作流程

取新鮮腫瘤組織，經消化酶分解成細胞混懸液后，采用膠原凝膠滴三維立體培養法進行腫瘤細胞原代培養。培養后的腫瘤細胞與不同抗癌藥物接觸后，經中性紅染色固定，通過計算機分析吸光度，計算不同抗癌藥物作用下腫瘤細胞的存活率。實驗組抗癌藥物包括a氟尿嘧啶b卡培他濱c奧沙利鉑+卡培他濱d氟尿嘧啶+奧沙利鉑e替吉奧。觀測不同抗腫瘤藥物下的腫瘤細胞存活率：若存活率≤50%，判定腫瘤細胞對特定化療藥物高敏感，若存活率＞50%，判定腫瘤細胞對特定化療藥物低敏感。

1.3 觀察指標

統計各組患者生存狀態；總生存時間以月份為單位；3年生存率以百分比為單位。

1.4 統計方法

采用SPSS 22.0統計學軟件進行數據分析,計數資料用百分率（%）表示，使用χ2檢驗，患者藥敏試驗情況與總生存期關系采用Kaplan-Meier法擬合生存曲線，進行生存分析。

2 結果

實驗組與對照組之間的年齡（χ2=0.651，P=0.42），性別（χ2=1.225，P=0.268），T 分期（χ2=2.684，P=0.261）差別無統計學意義（P＞0.05），見表 1。

2.1 藥敏實驗是否執行與患者總生存期的關系

整體實驗組患者相對于對照組，總生存期無明顯延長（P=0.289），實驗組3年存活率91.0%，對照組3年存活率83.2%。我們進一步將全部患者根據TNM分期詳細劃分為I、II期和III期。

I、Ⅱ期實驗組與對照組之間OS差異無統計學意義（P=0.677），實驗組3年存活率92.8%，對照組3年存活率93.5%。

Ⅲ期患者實驗組與對照組相比，生存期顯著延長，差異有統計學意義（P=0.029），實驗組3年存活率88.4%，對照組3年存活率60.2%，見圖1。

圖1 Ⅲ期患者藥敏檢測（實驗組）與非藥敏檢測組（對照組）患者OS比較

2.2 藥物高敏感組和低敏感組患者總生存期的關系

根據藥敏試驗腫瘤細胞存活率，將實驗組患者分為高敏感組與低敏感組。分析結果表明高敏感組患者相對于低敏感組患者，總生存期明顯延長（P=0.035），高敏感組3年存活率94.2%，低敏感組3年存活率81.2%，見圖2。

圖2 藥敏檢測（實驗組）中高敏感組與低敏感組患者OS比較

3 結論

通過以上分析可以得出結論：①整體患者觀察，藥敏實驗組相對于非藥敏試驗組生存率無明顯提高（P=0.289），實驗組3年存活率91.0%，對照組3年存活率83.2%。其中I、II期藥敏實驗組相對于非藥敏試驗組生存率亦無明顯提高（P=0.677），實驗組3年存活率92.8%，對照組3年存活率93.5%。而針對Ⅲ期患者，藥敏實驗組相對于非藥敏試驗組生存率明顯提高，差異有統計學意義（P=0.029），實驗組3年存活率88.4%，對照組3年存活率60.2%。②行藥敏實驗患者中，高敏感組相對于低敏感組生存率明顯提高，差異有統計學意義 （P=0.035），高敏感組3年存活率94.2%，低敏感組3年存活率81.2%。

4 討論

根據以上結果，可以適度指導臨床實踐：①對于Ⅲ期結直腸癌患者，按照藥敏試驗結果進行術后化療，相較于傳統的術后根據NCCN指南完成化療周期能延長患者的總生存期。因此可以通過術前合理對患者進行分期，存在較多淋巴結轉移且無明顯其他臟器轉移的患者推薦進行藥敏試驗并合理進行術后化療治療。②藥敏試驗結果為高敏感組相較于低敏感組亦是擁有較長的生存期。據此，推薦藥敏試驗結果為高敏感的結直腸癌患者根據藥敏試驗結果有針對性地化療。在該次分析中，也得出了一些陰性結論：在I、II期腫瘤患者中，腫瘤發現相對較早，浸潤深度較淺，分化程度較好，淋巴結轉移相對也較少，藥敏試驗起到的指導性作用相對不明顯。

有學者[6]曾先后回顧性分析了CD-DST方案的應用對于一般結直腸癌與進展期結直腸癌[7]的術后化療，均可改善患者預后：①針對于一般結直腸癌，43例患者中分別存在26例與15例對于FOLFOX與FOLFIRI敏感，其余2例為共同敏感。②針對于120例進展期結直腸癌患者，CD-DST敏感組較非敏感組預后更好，敏感組中是否適合化療藥物于患者預后影響不大（P=0.793），非敏感組中是否選擇適合的化療藥物對患者幫助更大（P=0.036）。相較于以上，該研究在同樣應用CD-DST技術的基礎上，樣本量更大，分組更明確，劃分更加細致，且術后化療患者完全采用藥敏實驗推薦的適合方案，更加明確了不同臨床分期結直腸癌患者對CD-DST的敏感性區別。同時也存在著一些不足，如未包含Ⅳ期患者，且未進一步地針對低敏感組進行詳細亞組分析，需要在未來的研究中進一步完善。

隨著社會的發展,結直腸癌的發病率逐年升高,是人類健康的巨大隱患。術后輔助化療是結直腸癌治療中不可或缺的一環，對于抑制腸癌術后的復發，轉移起到舉足輕重的作用，化療藥物選擇不當會產生嚴重的不良反應甚至耐藥性的產生，導致患者經過手術的打擊之后再次承受病痛之苦。Takebayashi等[8]研究證實在結直腸癌，肝癌，肺癌中CD-DST指導多藥化療方案較單一用藥敏感性更高。有學者[9]研究證實CD-DST技術對于選擇肝細胞癌化療方案具有一定優勢。Sakuma等[10]亦證實通過CD-DST技術有助于選擇口腔鱗狀細胞癌的多藥聯合化療方案。作為一種先進的體外腫瘤藥敏檢測技術,CD-DST技術可對常見化療藥物殺傷腫瘤細胞進行合理評價、對化療方案的進行篩選,減少了耐藥性的發生，從而避免了不必要的損失。然而目前，它仍還存在著一定的缺陷，如細胞體外生長環境無法做到完全模擬體內環境，化療藥物濃度的掌控，化療藥物在人體內的代謝變化等等，這些都無法通過簡單的體外環境重現，需要進一步的探索與發展。