淺析水產品中硝基呋喃類代謝物能力驗證

邰曉亮 ，張建平 ，魏 麗 ，劉淑華 ＊

1.烏魯木齊市農產品質量安全檢測中心，烏魯木齊 830000 2.奇臺縣農業技術推廣中心，新疆昌吉 831800

關鍵字：水產品；硝基呋喃；代謝物；驗證

能力驗證是按照預先制訂的準則，通過實驗室間的比對來評價參加者的能力[1]，也是為確保實驗室維持較高的檢測水平而對其能力進行考核、監督和確認的一種驗證活動，它可以補充實驗室內部的質量控制程序，增加實驗室客戶對實驗室能力的信任，有利于實驗室整體水平的提高[2]。每年各級農業部門下達相應監測任務時，除了考察農產品質量安全檢測機構必須具備的資質外，能力驗證結果也成為政府做出選擇的重要參考，通過參加能力驗證，發現機構自身在質量控制過程中的問題和漏洞，得以及時制定相應的糾正措施，進行糾正和改進，進入良性循環，持續提高機構的管理水平。

自2004年起，農業部組織開展了水產品中藥物殘留、重金屬及貝類毒素等3大方面檢測能力驗證，涉及的考核的項目為硝基呋喃類代謝物、孔雀石綠、磺胺類和氯霉素等。農業部歷年來考核項目如下表1，可以看出硝基呋喃類代謝物項目是水產品藥物殘留檢測能力驗證的重點[3]。

表1 水產品藥物殘留檢測能力驗證考核項目

農業部硝基呋喃類代謝物能力考核采用 《水產品中硝基呋喃類代謝物殘留量的測定 液相色譜－串聯質譜法》（農業部783號公告-1-2006），考核方式為集中制樣、定點發樣。由能力驗證參加單位至指定地點隨機抽取包括考核樣品、基質樣品后，在96小時內上報檢測結果[4]。檢測結果須報3個平行樣的結果、平均值和相對標準偏差，并附原始記錄、譜圖和標準曲線、加標記錄表，采用真值法進行評判，檢測結果回收率在70.0%～120.0%之間為合格，有任1項結果超過上述范圍及存在定性錯誤的，判為不合格。

1 能力驗證前的準備工作

1.1 標準溶液的配制

重新配制標準溶液或購置有證標準物質，確認標準物質的有效期、純度、結構和分子量，使用移液管配制至所需濃度。SEM、AHD標準品因是鹽酸鹽，稱取時，應根據分子量和純度進行折算，配制時可借助超聲波助溶，標準儲備液低溫放置后應恢復至室溫。混合標準工作液和混合內標標準工作液現配現用。

1.2 選擇合適的標準溶液線性范圍

線性范圍過寬影響定量結果的準確性，過窄影響線性系數。通常選擇做5～7個濃度點，具體跨度則根據需要檢測的樣品濃度決定，建議標準曲線的最低點為檢出限濃度點附近為宜，待測樣品的濃度最好在曲線的中間左右位置，同時必須保證標準曲線相關系數在0.999以上。硝基呋喃類代謝物的標準曲線需要衍生化，因此要與測試樣品同時進行前處理。

1.3 儀器條件的優化

對實驗過程中涉及的儀器設備進行核查，檢測設備的準確性是影響能力驗證結果的關鍵因素之一，必須確保在檢定或校準有效期內，并且滿足實驗要求，如達不到檢測要求，需查找原因并優化儀器和檢測條件，包括更換色譜柱，清洗質譜儀的離子源、噴霧傳輸管。可將新配置的標準溶液與以前的標準溶液同時上機測定，比較響應值，正常情況下響應值應一致，或有所提高，如果新配的標準溶液靈敏度不如以前，需要查找原因。

1.4 實驗器皿的清洗

所用的實驗器皿在使用前按照規定要求進行洗滌，必要時用甲醇潤洗，對于進樣瓶等較難清洗的器皿，建議使用甲醇等試劑超聲清洗，盡量減少外來污染因素的引入。為確保實驗過程中對所用試劑的控制，必須做試劑空白，除不加樣品外，所有的試劑都必須參與前處理過程，包括添加內標等，并且確保試劑空白中待測物的檢出值在方法檢出限以下。

2 領樣及樣品前處理

檢查編號是否準確，包裝是否完整、無破損，填寫領樣記錄表，領考核細則及證明文件。將樣品裝入加干冰的泡沫箱中。開始實驗前嚴禁用微波等加熱方式對樣品解凍，應在室溫下自然解凍后再進行前處理。樣品前處理過程中，應盡量避光操作。提取過程如下：

（1）加入衍生試劑之前需用玻璃棒將樣品分散，以提高酸解效率，有利于衍生。

（2）將鹽酸溶液濃度提高至0.3 mol/L（移取27 mL濃鹽酸，用水定容至1 000 mL），調節pH約為1。

（3）衍生化后加入磷酸氫二鉀濃度為1.0 mol/L（加入25 mL 30%的氫氧化鈉溶液），調節PH值至7.0～7.5，只需每個品種調試1個樣品即可。

（4）乙酸乙酯提取時要充分振蕩，提高萃取效率，如發生乳化可將離心轉速提高至10 000 r/min，或者增加離心時間。

（5）氮吹濃縮后若溶解液渾濁，可以加2 mL正己烷混勻后放入冰箱中冷凍0.5～1 h，高速（8 000～10 000 r/min）離心6 min，直接取下層溶液過0.22 μm濾膜測定。

空白實驗包括試劑空白和對應的基質空白，除不加標準溶液外，其他步驟按照已確定的前處理方法進行，上機比較本底是否在目標物出峰處有干擾。

質控樣品和待測樣品必須在相同條件下進行前處理并測定[5]。添加濃度通常為2～5倍定量限，盡量與待檢樣品的濃度保持一致。質控樣品可以選擇在空白樣品的基礎上進行加標，也可把已知量值的陽性樣品當作質控樣品，包括以往實驗室參加能力驗證多余的陽性樣品、多家實驗室進行比對過的樣品或可購買的有證標準樣品。同時確保質控樣品和待檢樣品檢測時每個步驟操作的一致性，降低誤差。

采用C18色譜柱進行測試，推薦進樣量為10 μL。流動相中的有機相推薦使用甲醇，因為其靈敏度和分離效果更好。不同廠家的儀器對水相的選擇有差別，通常采用2 mmol/L醋酸銨或者0.1%甲酸。SEM是呋喃西林藥物的特征性代謝產物，但是它作為內源性物質在甲殼類產品中普遍存在，因此在對這類樣品進行測試時，應考查該藥物的帶入途徑。

3 結果分析

3.1 平均值法計算檢測結果

取平均值的目的是避免偶然誤差、降低操作誤差、提高可信度。在檢測過程中有時會發現3個能力驗證樣品中有2個的結果平行性較好，有1個數值偏離，無法確認哪個數值更接近真值，建議取數據的平均值，減少誤差[6]。忌諱人為剔除平行性差的樣品結果，將自認為平行性好的樣品重復測定多次后取平均值上報，有時反將真實結果排除在外。

3.2 質控樣品數據的分析

根據質控樣品的回收率和精密度數據，分析此次檢驗過程的質量控制情況，必要時對比質量控制圖進行分析，明確此次能力驗證檢測結果的整體水平是偏低還是偏高，對數據的把控做到心中有數。

3.3 檢測結果的上報

仔細分析樣品檢測過程、譜圖、計算及結果數據，特別是對于能力驗證樣品中添加濃度含量低的化合物，著重比較試劑空白和樣品空白的譜圖，盡量防止出現漏判、誤判的可能性。

結果計算按照標準進行，根據能力驗證文件中對回收率的要求，決定是否對回收率進行校準，三個平行樣檢測結果全部上報并嚴格按照通知日期輸入到網上系統，上報結果與原始記錄一致，原始記錄手工填寫和簽字，原始記錄中包含工作曲線和空白圖譜。

4 小結

掌握檢測方法的的操作要領和關鍵點，減少方法對檢測結果的影響，提高水產品獸藥殘留檢測水平和能力驗證的通過率，保證檢測質量。加強水產品能力驗證工作的規范性和公正性，使實驗室的檢測能力快速提高，水產品質量安全監管水平也會不斷提升，有利于保障中國的水產品質量安全。