人二倍體細(xì)胞狂犬病疫苗免疫8年后加強(qiáng)免疫效果研究

朱加宏 吳小紅 李玉華 朱鳳才 胡月梅

在狂犬病暴露后預(yù)防處置(post-exposure prophylaxis,PEP)中接種狂犬病疫苗可以提供被動(dòng)免疫保護(hù)。現(xiàn)階段市售狂犬病疫苗根據(jù)細(xì)胞基質(zhì)不同分為人二倍體細(xì)胞狂犬病疫苗(human diploid cell rabies vaccine,HDCV)和動(dòng)物細(xì)胞(原代地鼠腎細(xì)胞、雞胚細(xì)胞或傳代 Vero細(xì)胞)狂犬病疫苗。HDCV是采用健康人胚肺成纖維細(xì)胞為基質(zhì)來(lái)培養(yǎng)狂犬病病毒疫苗株,無(wú)潛在致瘤DNA殘留和外源蛋白過(guò)敏風(fēng)險(xiǎn),具有良好的安全性和免疫持久性［1］。世界衛(wèi)生組織(World Health Organization,WHO)推薦有效狂犬病疫苗的最低效價(jià) ≥2.5 IU/劑,接種狂犬病疫苗后血清狂犬病病毒中和抗體(rabies virus neutralizing antibody,RVNA)≥ 0.5 IU/ml被認(rèn)為達(dá)到保護(hù)性水平［2］。HDCV由美國(guó)Wistar研究所首創(chuàng),采用人胚肺成纖維細(xì)胞WI-38培養(yǎng)狂犬病病毒PM疫苗株,法國(guó)采用人胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5培養(yǎng)狂犬病病毒PM疫苗株,HDCV在接種后不良反應(yīng)及免疫效果方面被視為狂犬病疫苗的金標(biāo)準(zhǔn)［3］。國(guó)產(chǎn)HDCV于2014年上市,其臨床安全性及有效性良好［4-5］。本研究采用WHO推薦的檢測(cè)RVNA的標(biāo)準(zhǔn)方法快速熒光灶抑制試驗(yàn)(rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT)［6-7］,對(duì)國(guó)產(chǎn)HDCV免疫8年后加強(qiáng)免疫效果進(jìn)行研究,為指導(dǎo)HDCV正確免疫提供參考,報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 狂犬病疫苗 凍干HDCV,5支/份,成都康華生物制品有限公司生產(chǎn),效價(jià) ≥ 4.0 IU/劑,批號(hào)20160101,使用方法按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.2 觀察對(duì)象 按照知情、自愿原則在江蘇省淮安市漣水縣疾病預(yù)防控制中心門診共篩選60例參加過(guò)凍干HDCV臨床Ⅲ期試驗(yàn)(五針?lè)庖?受試者。所有受試者自臨床Ⅲ期試驗(yàn)全部觀察結(jié)束至本臨床試驗(yàn)篩查入組期間,未再次接種過(guò)狂犬病疫苗,也未發(fā)生過(guò)狂犬病暴露。受試者在HDCV初次免疫8年后進(jìn)行加強(qiáng)免疫。研究獲得所在單位醫(yī)學(xué)倫理審查通過(guò)。

1.3 接種反應(yīng)觀察 單臂三角肌部位肌肉注射1劑進(jìn)行加強(qiáng)免疫。現(xiàn)場(chǎng)觀察并記錄60名受試者接種HDCV后30 min內(nèi)的不良反應(yīng),隨訪15 d,記錄隨訪期間不良反應(yīng)情況。不良反應(yīng)評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局《預(yù)防用疫苗臨床試驗(yàn)不良反應(yīng)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)指導(dǎo)原則》的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)［8］。

1.4 RVNA檢測(cè) 受試者在HDCV初次免疫8年后,于加強(qiáng)免疫前(＋0 d)和加強(qiáng)免疫后14 d(＋14 d)分別肘靜脈采血5 ml,分離血清,-20℃保存?zhèn)溆谩Ｋ醒鍢悠肺兄袊?guó)食品藥品檢定研究院采用RFFIT檢測(cè)RVNA。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用Excel表整理數(shù)據(jù)并繪制柱狀圖。

2 結(jié)果

2.1 加強(qiáng)免疫后不良反應(yīng)情況 60例受試者進(jìn)行了HDCV加強(qiáng)免疫,合計(jì)接種60劑,疫苗加強(qiáng)免疫后30 min內(nèi)未觀察到局部和全身不良反應(yīng),6例受試者失訪,54例完成15 d隨訪的受試者在隨訪期間未報(bào)告不良反應(yīng)。

2.2 加強(qiáng)免疫前后RVNA變化情況 60例受試者加強(qiáng)免疫前RVNA水平0.0 IU/ml～12.2 IU/ml,RVNA的GMT值為1.31 IU/ml,其中 RVNA水平≥0.5 IU/ml的有28例(46.67%,28/60)。完成隨訪和 RFFIT檢測(cè)的54例受試者,加強(qiáng)免疫前RVNA水平0.0 IU/ml～12.2 IU/ml,RVNA的GMT值為1.42 IU/ml,其中RVNA水平 ≥0.5 IU/ml的有26例(48.15%,26/54)；加強(qiáng)免疫后RVNA水平0.1 IU/ml～399.9 IU/ml,RVNA的GMT值為30.6 IU/ml,其中 RVNA水平 ≥ 0.5 IU/ml的有52例(96.30%,52/54)。見(jiàn)圖1。

2.3 加強(qiáng)免疫后RVNA檢測(cè)值分布 54例受試者加強(qiáng)免疫后RVNA檢測(cè)值分布情況見(jiàn)表1。5.55%(3/54)受試者加強(qiáng)免疫后RVNA水平高于100 IU/ml；85.19%(46/54)受試者加強(qiáng)免疫后RVNA水平2.0 IU/ml～100.0 IU/ml；5.55%(3/54)受試者加強(qiáng)免疫后 RVNA水平 0.5 IU/ml～2.0 IU/ml；3.70%(2/54)受試者加強(qiáng)免疫后RVNA水平低于0.5 IU/ml。

2.4 個(gè)體RVNA改變特殊情況 54例完成加強(qiáng)免疫后RFFIT檢測(cè)者中,2例RVNA水平維持0.1 IU/ml不變,52例RVNA水平不同程度升高,其中3例RVNA水平 ≥100.0 IU/ml,這3例對(duì)加強(qiáng)免疫應(yīng)答顯著的個(gè)體在加強(qiáng)免疫前的RVNA水平并不是最高的。

圖1 人二倍體細(xì)胞狂犬病疫苗加強(qiáng)免疫后狂犬病病毒中和抗體幾何均值Fig.1 Geometric mean titer of rabies virus neutralizing antibody after booster immunization by human diploid cell rabies vaccine

表1 54例受試者人二倍體細(xì)胞狂犬病疫苗加強(qiáng)免疫后狂犬病病毒中和抗體檢測(cè)值分布Tab.1 Distribution of the values of rabies virus neutralizing antibodies of 54 subjects received booster immunization of human diploid cell rabies vaccine

3 討論

錢曉華等［8］研究顯示國(guó)產(chǎn)Vero細(xì)胞狂犬病疫苗五針?lè)ū┞逗竺庖?周、6月、1年、2年、3年后受試者 RVNA陽(yáng)性率為 100%、97.5%、73.9%、21.1%、20%。本研究中國(guó)產(chǎn)HDCV五針?lè)ū┞逗竺庖?年后受試者RVNA陽(yáng)性率為46.67%,表現(xiàn)出良好的免疫持久性。Rodrigues FM等［9］研究顯示HDCV三針?lè)ū┞肚懊庖?年后進(jìn)行單劑加強(qiáng)免疫,所有受試者RVNA在第14天均達(dá)到保護(hù)性水平。Fayaz等［10］研究顯示26例觀察對(duì)象在HDCV五針?lè)ū┞逗竺庖?2年后進(jìn)行單劑加強(qiáng)免疫,所有觀察對(duì)象 RVNA水平達(dá)到2.6 IU/ml～20 IU/ml。本研究中54例完成隨訪和RFFIT檢測(cè)的受試者中,HDCV單劑加強(qiáng)免疫后第14天96.30%受試者RVNA達(dá)到保護(hù)性水平。HDCV免疫學(xué)效果肯定,在全球范圍內(nèi)被廣泛應(yīng)用［11］。

本研究中未發(fā)生和HDCV加強(qiáng)免疫相關(guān)的不良反應(yīng),證實(shí)國(guó)產(chǎn)HDCV免疫效果好,副反應(yīng)發(fā)生率低。通常情況下,兒童、老年人和免疫力低下人群對(duì)狂犬病疫苗免疫應(yīng)答較弱,HDCV在兒童、老年人和免疫力低下人群中應(yīng)用價(jià)值較高［12-13］。同已經(jīng)報(bào)道的100%有效的HDCV加強(qiáng)免疫效果相比［9-10］,本研究中2例受試者進(jìn)行HDCV單劑加強(qiáng)免疫后RVNA未陽(yáng)轉(zhuǎn),由于缺乏對(duì)這2例受試者深入細(xì)致的調(diào)查研究,對(duì)其RVNA未陽(yáng)轉(zhuǎn)的原因還無(wú)法解釋。本研究對(duì)HDCV加強(qiáng)免疫后的RVNA水平進(jìn)行了分段,這種劃分細(xì)化了RVNA陽(yáng)性區(qū)間分段,能夠反應(yīng)HDCV免疫后機(jī)體不同程度的免疫應(yīng)答強(qiáng)度。對(duì)于在大量人用狂犬病疫苗免疫實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)的免疫應(yīng)答強(qiáng)度極高(RVNA≥100.0 IU/ml)的特殊個(gè)例,同樣由于缺乏后續(xù)研究而難以解釋其具體原因。

國(guó)產(chǎn)HDCV的免疫效果數(shù)據(jù)在逐步積累。2015年發(fā)生的一起一犬傷13人狂犬病暴露事件,所有傷者經(jīng)HDCV五針?lè)ū┞逗竺庖?并在首劑免疫后第15天血清RVNA全部陽(yáng)轉(zhuǎn),隨訪6個(gè)月,所有傷者均未發(fā)生狂犬病,且血清RVNA仍然陽(yáng)性,證實(shí)國(guó)產(chǎn)HDCV免疫效果肯定［14］。本研究進(jìn)一步積累了國(guó)產(chǎn)HDCV免疫持久性和加強(qiáng)免疫的數(shù)據(jù)。個(gè)體狂犬病疫苗暴露后免疫0.5～1年內(nèi)再次暴露者,應(yīng)當(dāng)于0 d、3 d各加強(qiáng)免疫1劑；1～3年內(nèi)再次暴露者,應(yīng)當(dāng)于 0 d、3 d、7 d 各加強(qiáng)免疫 1 劑［15］。本研究結(jié)果顯示規(guī)定的狂犬病疫苗加強(qiáng)免疫方案對(duì)于絕大多數(shù)已經(jīng)接受HDCV暴露后免疫的個(gè)體不適用,即使對(duì)于1劑加強(qiáng)免疫后無(wú)應(yīng)答的2例個(gè)體,再加強(qiáng)1～2劑是否會(huì)起效也還有待深入研究。本研究將在后續(xù)進(jìn)一步深化國(guó)產(chǎn)HDCV的相關(guān)基礎(chǔ)和應(yīng)用研究。

利益沖突:無(wú)