分散液液微萃取-氣質聯用法分析尿液中的曲馬多

劉凌云，徐仿敏

（江陰市公安局，江蘇 江陰 214431）

曲馬多（Tramadol）是一種非阿片類中樞性止痛藥，主要作用于血清張力素及μ-阿片類受體和去甲腎上腺素系統，可以用于減輕疼痛。近年來，由于曲馬多與甲基苯丙胺、海洛因等傳統毒品相比，具有獲得方便、便宜等優勢，被一些不法分子用作傳統毒品的替代品來使用。目前，尿液中曲馬多的提取方法主要有液液萃取法[1]、固相萃取法[2]、固相微萃取膜[3]等，但這些方法存在操作繁瑣、不經濟環保等缺點。因此，建立一種簡便、快速的尿液中曲馬多檢驗方法，對打擊此類違法犯罪具有重要意義。

本文建立了分散液液微萃取-氣質聯用法對尿中曲馬多進行檢驗，對影響實驗的參數進行考察優化。最終目的是為了建立一種簡便、快捷、高效的檢驗方法來分析尿液中的曲馬多。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Varian3800 Saturn2200 GC/MS；臺式離心機；移液器；分析天平。甲醇、乙醇、丙酮、乙腈（色譜純，Sigma 公司）；四氯化碳（光譜純）、氯苯（分析純）、四氯乙烯（色譜純）（百靈威公司）；氫氧化鈉、鹽酸、碳酸氫鈉、碳酸鈉（分析純）（上海化學試劑有限公司）。曲馬多（中國藥品生物制品檢定所）。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：VF-5 ms（30 m × 0.25 mm DF＝0.25）；柱溫：80℃，保持1min，20℃/min升至 280℃，保持 9min；載氣：氦氣；流速：1.0 mL/min ；進樣口溫度：280 ℃ ；進樣量1 μL，不分流進樣。

1.2.2 質譜條件

離子阱溫度：150℃；歧管溫度：45℃；傳輸線溫度：220 ℃ ；離子源：EI源；溶劑延遲：3.3 min ；掃描范圍：50～450 amu ；EI電壓：70 ev。

1.2.3 標準溶液的配置

稱取0.01 g曲馬多至10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到1 mg/mL的曲馬多儲備液，置于冰箱中保存，所需不同濃度的工作液均從儲備液得到稀釋。空白尿為近期未服用任何藥物的健康志愿者提供。

1.2.4 分散液液微萃取過程

在離心試管中，加入5 mL尿樣，然后快速注入分散劑和萃取劑混合液，形成乳濁液，靜置片刻后以2325×g離心5 min，直接抽取底部的沉積相，進行GC-MS檢驗。

2 結果與討論

在分散液液微萃取過程中，有多種因素影響著萃取結果。為了得到最優的萃取效果，對以下實驗條件進行考察：分散劑和萃取劑的種類、用量、萃取時間、pH值等。尿液試樣中曲馬多的濃度為0.1μg/mL，萃取過程按照1.2.4的方法進行操作，使用GC-MS進行分析。

2.1 分散劑和萃取劑的選擇

在分散液液微萃取過程中，首先要求分散劑既能與樣品互溶，同時還能與萃取劑互溶，其次，萃取劑的要求是密度必須比水大，同時對目標物具有較好的溶解性。因此，本實驗分別選擇了乙醇、甲醇、乙腈、丙酮作為分散劑，選擇四氯化碳、氯苯、四氯乙烯作為萃取劑，根據曲馬多的回收率來選擇合適的分散劑和萃取劑。

圖1 不同分散劑和萃取劑對曲馬多萃取效果的影響

由圖1可以看出，分散劑和萃取劑分別選擇乙醇和四氯乙烯以及乙醇和氯苯的時候，曲馬多的峰面積均較高，表明在這兩個體系下曲馬多的回收率較高。但是，在乙醇和氯苯體系下，色譜圖中雜峰較多，背景干擾比較明顯，因此，本實驗分別選擇乙醇和四氯乙烯作為分散劑和萃取劑。

2.2 分散劑的用量

本實驗中選擇乙醇作為分散劑，乙醇的體積直接影響著“水-乙醇-四氯乙烯乳濁液”體系的形成，導致四氯乙烯在水中的分散程度發生改變，從而影響萃取效率。本實驗考察了乙醇體積（0.25、0.5、1.0、1.5、2.0 mL）對萃取效率的影響，實驗結果見圖 2。

圖2 分散劑體積對萃取效果的影響

由圖2可以得出，隨著乙醇體積的增加，曲馬多的峰面積也相應增加，在0.5 mL時達到最大值，緊接著又隨著乙醇體積的增加而開始減小。出現這一現象的主要原因是使用少量乙醇的情況下，四氯乙烯不能較好分散在水相中，從而導致回收率較低，曲馬多的峰面積較小；隨著乙醇體積的增大，四氯乙烯逐漸均勻的散在水相中，曲馬多的回收率逐漸增大，相應的峰面積也隨之變大，但是當乙醇體積繼續增大時，會使得曲馬多在水相中的分配比變大，又導致曲馬多的回收率出現下降，因此，選擇乙醇體積為 0.5 mL。

2.3 萃取劑的用量

四氯乙烯的用量不但會影響萃取效率，還會影響沉積相的體積。本實驗中考察了四氯乙烯體積（10、15、20、25、30、40μL）對沉積相以及回收率的影響。

圖3 萃取劑體積對沉積相體積的影響

圖4 萃取劑體積對萃取效果的影響

由圖3和圖4可以看出，隨著四氯乙烯體積的增加，沉積相的體積也隨之增大，但是回收率卻在增大到一定量的時候出現基本無變化或者略有下降趨勢，因此，本實驗選取四氯乙烯的體積為30μL。

2.4 萃取時間考察

分散液液微萃取是一個能快速達到平衡的萃取過程，其優點就是用時少、分散面積大、萃取效率高。萃取時間，即分散劑和萃取劑被快速注入樣品溶液中，整個溶液體系迅速形成乳濁液，萃取劑被分散在整個溶液中，能夠很快達到分配平衡所需的時間。 本實驗中將萃取時間分別設置為 0.5、1、2、4、10 min進行考察，來選擇最優的萃取時間。

由圖5可以看出，隨著萃取時間的增加，萃取過程達到平衡，在2 min就能達到較好的萃取效果，并且隨著時間的延長也無太大變化。因此，本實驗選擇的萃取時間為不小于2 min。

圖5 萃取時間對萃取效果的影響

2.5 pH值考察

樣品的pH值不同直接影響萃取效果，通過調整樣品的pH值能得到最好的萃取效率，本文中分別調整樣品的pH值為8、9、10、11進行優化選擇。

圖6 pH值對萃取效果的影響

由圖6，可以看出在4種pH值案件下峰面積基本沒有太大變化，其中pH＝8的時候峰面積略大，為了得到最優的實驗結果，因此選擇pH為8。

2.6 方法評價

2.6.1 工作曲線

用空白尿液分別配置曲馬多濃度為10、20、40、100、200、400、1 000 μg/L的工作液，在最優的實驗條件下，按照1.2.4的方法進行萃取操作后，直接進行GC-MS檢測。以曲馬多的峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制工作曲線，得出線性回歸方程：y＝39826x-4818.7，相關系數r2＝0.9930，線性范圍：10～1000μg/L。2.6.2 檢出限和定量限

在空白尿液中添加少量的曲馬多進行分析，計算色譜峰高相當于噪音強度3倍和10倍的曲馬多濃度，即為檢出限和定量限。本方法尿液中曲馬多的檢出限為 0.97 μg/L，定量限為 3.22 μg/L。

2.6.3 回收率、準確度和精密度的考察

配制曲馬多濃度為100 μg/L的空白添加尿液，按照“1.2.4”進行操作，并根據工作曲線計算曲馬多的濃度，所得結果與添加值之比為回收率，富集因子EF為沉積相的濃度與空白尿液初始濃度的比值，結果計算得出EF為185，回收率為80.45%±1.98%（n=7）。

2.7 案例應用

2015年11 月，抓獲涉嫌吸食曲馬多的吸毒人員，提取其尿液送來要求進行檢驗。按照優化的實驗方法，由圖7～8可以看出，在嫌疑人的尿液中檢出曲馬多成分。

圖7 嫌疑人尿液的總離子流色譜圖

圖8 曲馬多的質譜圖

3 結論

本文所建立的分散液液微萃取方法-氣質聯用法操作簡單、快捷、高效，該方法實用性強，對尿液中曲馬多的提取回收率達到80%以上，為尿液中其他毒品檢測提供參考。