尼美舒利對膽管癌細胞Th1/Th2細胞因子分泌的影響

孔 琦，黃 強，陳 斌，王道明，朱家勝，夏亞斌

(1.皖南醫學院弋磯山醫院胃腸外科，安徽 蕪湖 241001;2.安徽省立醫院普外科，安徽 合肥 230001)

正常機體免疫功能需Th1、Th2細胞因子維持一定的動態平衡，當平衡失調造成Th1或Th2轉化時，稱之為Th1/Th2偏移[1]，而Th1/Th2偏移與腫瘤的發生、發展密切相關[2-3]，進一步研究Th1/Th2偏移如何影響惡性腫瘤的發生、發展成為目前研究重點，我們用白介素-2(interleukin-2，IL-2)、干擾素-γ(interferon-γ，IFN-γ)作為Th1細胞因子代表，Th2細胞因子用IL-4、IL-6代表，觀察尼美舒利對人膽管癌細胞Th1/Th2偏移的逆轉作用，進一步探討其對膽管癌細胞生長的影響，為選擇性環氧合酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)抑制劑抗腫瘤作用提供一定的理論依據。

1 材料與方法

1.1材料與試劑人肝內膽管癌細胞系HCCC-9810購白中國科學院上海生命科學研究院細胞庫；RPMI-1640培養基購自美國Gibco公司；IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-6酶聯免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent adsorption ，ELISA)試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司；異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate，FITC)標記的抗IFN-γ和熒光素(phycoerythrin，PE)標記的抗IL-4單抗均購自美國Biolegend公司。尼美舒利相對分子質量為308.3，購自美國Sigma公司。

1.2實驗方法

1.2.1 細胞培養及藥物準備 于RPMI-1640培養基中接種人肝內膽管癌細胞系HCCC-9810，飽和濕度培養箱內常規傳代培養，每2～3 d進行傳代1次。收集對數生長期細胞進行實驗。取308.3 mg尼美舒利溶于1 mL的二甲亞砜(dimethylsulfoxide，DMSO)中，加入9 mL的培養基配成100 mmol·L-1母液，實驗時用RPMI-1640培養基進行稀釋，將其配成終濃度分別為25、50、100、200 μmol·L-1的尼美舒利備用。采用質量分數0.25%胰蛋白酶消化對數生長期的膽管癌細胞,制成細胞密度為1×106·mL-1的單細胞懸液，以每孔2 mL接種于6孔板內，于恒溫培養箱中培養細胞24 h，設立實驗組與對照組進行實驗，實驗組加入不同濃度的尼美舒利，對照組不加藥，檢測相關指標。……