多柔比星聯(lián)合蛋氨酸腦啡肽對神經(jīng)母細胞瘤SH-SY5Y細胞的生長抑制及Tau蛋白磷酸化的調節(jié)作用

曹振杰

(鄭州大學第三附屬醫(yī)院小兒外科，河南 鄭州 450052)

神經(jīng)母細胞瘤是一種兒童顱外腫瘤疾病，5歲以下的嬰幼兒是其主要發(fā)病人群，抗腫瘤治療藥物的選擇對患兒預后恢復及生長發(fā)育至關重要[1]。作為常用化療藥物多柔比星可有效殺傷腫瘤細胞，但長期應用患兒耐受性差，對正常組織的不良反應亦比較大，因此成為臨床抗腫瘤治療難以克服的瓶頸[2]。蛋氨酸腦啡肽(methionine enkephalin，Met-ENK)屬于阿片類生長因子，除具有免疫調控及鎮(zhèn)痛作用外，還可顯著抑制腫瘤細胞生長，在多種腫瘤體外細胞試驗中具有顯著的抗腫瘤作用[3]。Tau蛋白是重要的中樞神經(jīng)系統(tǒng)蛋白，通過磷酸化進行蛋白功能的調節(jié)，有研究[4]顯示，Tau蛋白磷酸化可加速神經(jīng)細胞的凋亡。本研究主要探討多柔比星聯(lián)合Met-ENK對神經(jīng)母細胞瘤SH-SY5Y細胞的生長抑制作用，以及對Tau蛋白磷酸化的調節(jié)。

1 材料與方法

1.1SH-SY5Y細胞培養(yǎng)、分組及藥物干預神經(jīng)母細胞瘤SH-SY5Y細胞由中山大學附屬腫瘤醫(yī)院饋贈。SH-SY5Y細胞以含體積分數(shù)10%胎牛血清及青、鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)基，于37 ℃、體積分數(shù)5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，取對數(shù)期細胞進行實驗研究。將密度為5.0×104·mL-1的SH-SY5Y細胞接種于96孔板中，培養(yǎng)24 h后，陽性對照組SH-SY5Y細胞以1.25 mg·L-1的多柔比星處理，低、中、高劑量實驗組SH-SY5Y細胞分別以1.25 mg·L-1的多柔比星+10-7、10-5、10-3mol·mL-1Met-ENK處理，陰性對照組細胞以等量生理鹽水處理，各組設8個復孔。

1.2MTT法[4]檢測各組SH-SY5Y細胞增殖情況干預0、24、48、72 h后，各孔加20 μL 5 mg·mL-1MTT溶液，37 ℃孵育4 h，加150 μL二甲基亞砜(DMSO)，采用SpectraMax?M3多功能酶標儀檢測各孔490 nm下吸光光度值OD490 nm，計算細胞存活率=陽性對照組和各實驗組OD490 nm/陰性對照組OD490 nm×100%。……