慢病毒介導E型鈣黏附蛋白表達抑制對胃癌SGC-7901細胞5-氟尿嘧啶作用的影響

張自森，王夢丹，劉世佳，馬子涵，陳發帥，巴 楠，夏興洲

(1.鄭州大學第五附屬醫院腫瘤內科，河南 鄭州 450052；2.鄭州大學第五附屬醫院普通外科，河南 鄭州 450052；3.鄭州大學第五附屬醫院消化內科，河南 鄭州 450052)

胃癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，其發病率居于第2位[1]。E-鈣黏附蛋白(E-cadherin)與胃癌發生發展關系密切，可通過調節多個信號傳導通路影響胃癌細胞增殖[2]。本實驗采用慢病毒介導方法抑制胃癌SGC-7901細胞中E-cadherin表達，觀察了基因抑制效果和對5-Fu作用的影響，為進一步探討E-cadherin為靶點的胃癌個體化精準治療的可行性提供參考。

1 材料與方法

1.1材料與試劑人胃癌細胞株SGC-7901購自上海中國科學院典型培養物保藏委員會細胞庫。Annexin V-FICT/PI雙染細胞凋亡試劑盒購自上海美季生物技術公司；人E-cadherin單克隆抗體(sc-8008)、人β-actin單克隆抗體(sc-1610R)購自美國Santa Cruz公司；RNA提取試劑盒和cDNA第1鏈合成試劑盒購自美國Invitrogen公司；CDH1-siRNA設計合成和GV248慢病毒載體(元件順序：hU6-MCS-Ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin)構建由上海吉凱基因化學技術有限公司完成。

1.2實驗方法

1.2.1 細胞培養 用含體積分數10%小牛血清、100 u·mL-1青霉素以及100 μg·mL-1鏈霉素的RPMI-1640培養基常規培養胃癌SGC-7901細胞，置于37 ℃、體積分數5% CO2、飽和濕度環境中培養。

1.2.2 CDH1-siRNA感染細胞和有效siRNA篩選 取對數期生長的待感染的胃癌SGC-7901細胞，消化細胞計數，制成細胞懸液。感染前1 d將細胞接種到6孔細胞培養板中，每孔接種5×105個細胞，放于37 ℃、體積分數5% CO2培養箱培養24 h后，細胞密度為80%～90%時，進行感染。加入培養基1 mL/孔，再分別加入稀釋病毒液各100 μL(感染復數值相當于50)，培養24 h后換液,繼續培養72～96 h后進行后續實驗。……