遂寧市種豬場偽狂犬病的監測及凈化

尹念春 ，李春 ，魯志平 ，黃平全 ，鐘飛 ，譚春青

（1.四川省遂寧市農業局，四川 遂寧 629000；2.四川省動物疫病預防控制中心，四川 成都 610041；3.成都農業科技職業學院，四川 溫江 611130；4.四川省蓬溪縣畜牧食品局，四川 蓬溪 629100）

豬偽狂犬病（PR）是由豬偽狂犬病毒（PRV）引起的一種高度接觸性傳染病，是危害全球養豬業的重大傳染病之一。成年豬多呈隱性感染，通常引起妊娠母豬流產、死胎、木乃伊胎，產弱仔，新生仔豬伴有嘔吐、腹瀉及震顫等神經癥狀，15日齡內的仔豬死亡率高達100%[1-2]。為了有效控制PR流行，特別是從源頭控制PR，我們在前期PR流行病學調查研究的基礎上，在遂寧地區選擇7個規模化種豬場開展PR免疫凈化試驗。

1 材料

1.1 儀器 扁桃體活體采樣器；10 mL一次性采血管；美國Bio-Rad iMarkerTM酶標儀；德國Eppendorf微量移液器；凱達TDZ4-WS和TGL20MB低速、高速冷凍離心機；美國BIO-RAD T100 PCR儀，美國BIO-RAD SUB-CELL電泳儀，美國BIO-RAD GEL DOC EZ凝膠成像系統。

1.2 試劑盒 武漢科前PRV抗體檢測試劑盒；北京世紀元亨PRV PCR檢測試劑盒。

2 方法

2.1 現場調查 在遂寧地區選擇7個規模化種豬場，重點調查豬場規模、豬場基礎設施建設（動物防疫條件）、飼養管理、防疫制度建設、防疫措施落實情況，重點了解本場后備種豬的健康狀況等。

2.2 采樣 采集已免疫PR疫苗3周的仔豬（對應于檢測中的生產母豬）的血清和扁桃體，檢測PR病原及免疫抗體水平；全群采集免疫后的種公豬和后備母豬的血清和扁桃體，檢測PR病原及免疫抗體水平，每半年采集一次，全群連續檢測3次；空懷期生產母豬在免疫后分三期全群采樣檢測PR抗原及免疫抗體水平，優先選擇有過產死胎、弱胎或仔豬成活率低的母豬進行采樣檢測。先后在7個種豬場累計采集血清樣品7126份，扁桃體樣品5176份，應用ELISA試劑盒檢測3批（次），應用PCR檢測組織樣品3批（次）。

2.3 實驗室檢測

2.3.1 PRV抗體檢測 按照武漢科前PRV抗體檢測試劑盒說明書操作。

2.3.2 PRV病原檢測 按照北京世紀元亨PRV PCR試劑盒說明書操作，提取DNA，配制PCR反應液，電泳后觀察結果。

2.4 制定凈化方案 按照前期調查及實驗室檢測結果，綜合評價豬場PR流行的影響因素及流行強度，制定科學的凈化方案。

3 結果

3.1 豬場基本情況 所選7個規模化種豬場的養殖規模適中（母豬存欄小于1000頭），豬場建設符合動物防疫法規定要求，飼養管理和防疫制度運行較規范，后備種豬健康狀況良好（表1）。

表1 豬場基本情況表

3.2 凈化期間的檢測

3.2.1 PRV抗體ELISA檢測結果 結果顯示：經過一年半的免疫程序調整和加強免疫，7個種豬場的PR抗體平均合格率為90.48%。其中，種公豬和生產母豬的抗體水平明顯高于仔豬和后備母豬（表2）。

3.2.2 PRV病原PCR檢測結果 結果顯示：經過一年半的檢測凈化，共淘汰感染帶毒豬105頭，7個種豬場4個豬群的PRV平均感染率由凈化實施前的3.8%（67/1 762） 逐漸降到 1.38%（27/1 952）、0.75%（11/1462）；種公豬、后備母豬、仔豬的感染率由凈化實施前的 0.46%（1/219）、5.14%（18/350）、30%（15/50）逐漸降低到0（表3）；仔豬成活率由71.14%提高到92.43%。

表3 偽狂犬病病原PCR檢測結果

3.3 凈化方案的制定

3.3.1 完善生物安全措施 制定自繁自養、全進全出的養殖模式，嚴防疫病傳入。制定豬場參考消毒程序，通過對MIC/MBC值的測定選擇最適合的消毒劑，比較紫外燈和超聲波霧化對空氣消毒的差異性。

3.3.2 規范調整免疫程序 仔豬1～3日齡滴鼻免疫；后備母豬在145日齡和186日齡免疫；經產母豬和種公豬每季度（2月、5月、8月、11月）免疫一次。采用PRV gE基因缺失弱毒疫苗按照使用說明進行全群免疫，以達到有效控制偽狂犬病的目的。其他主要動物疫病如口蹄疫、豬瘟、圓環病毒、藍耳病的免疫均按照常規進行。

3.3.3 示范場PR病毒和血清的流行病學調查 生產母豬免疫抗體陽性率如低于15%，則一次性全部淘汰；如出現疑似病例，則淘汰病原學檢測陽性個體。PR抗體不合格的豬應及時補免，經多次免疫仍不合格的予以淘汰。后備母豬抗體檢測呈陽性、病原學檢測呈陰性方可混群飼養；新引進種豬應先隔離觀察并檢測PR抗體和病原，對于病原檢測陽性豬予以淘汰。

3.3.4 建立無偽狂犬病階段 通過以上措施不斷地凈化豬群，從源頭切斷病毒的傳播途徑，后期連續兩年跟蹤調查無臨床病例出現，群體免疫抗體合格率均大于90%，即表明已有效控制PR，成功建立無偽狂犬病階段。

4 分析與討論

4.1 規模化養殖中，對免疫抑制性疾病的控制是穩定養殖生產的關鍵因素。常年來，受免疫抑制性因素的影響，PRV、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、豬圓環病毒（PCV-2）及霉菌毒素等對豬的免疫系統造成了嚴重損害，從而導致免疫失敗[3]。疫苗免疫失敗、引種不當和生產管理不當是引起PRV暴發的主要原因[4]，且生產母豬、后備母豬和仔豬群的無癥狀持續感染帶毒現象明顯。通過嚴格的檢測凈化，能有效提高群體免疫抗體水平和仔豬的存活率。PRV可通過消化道和呼吸道水平傳播，也可通過交配、精液、胎盤垂直傳播。被PRV感染的規模豬場中，尤其是耐過的呈隱性感染的成年豬是PRV的主要傳染源[5]。通過胎盤傳播給胎兒時，由于母豬免疫球蛋白不能通過胎盤屏障，所以，病毒對胎兒的感染是致命的。一旦規模豬場被PRV感染，這種水平傳播和垂直傳播就會導致豬場PRV感染的惡性循環。目前，對PRV尚無有效治療藥物，采用疫苗免疫和凈化淘汰帶毒豬群是預防和控制該病的根本措施[6-7]。因此，規模豬場開展PR凈化勢在必行，尤其是對種豬群的凈化。

4.2 扁桃體是豬感染PRV后含毒量最多的器官之一，也是檢測最穩定的器官之一[8]。婁高明等[9-10]證明，用PCR方法檢測PR的敏感性明顯高于病毒分離和ELISA方法。因此，本試驗采集活體扁桃體樣品進行PCR檢測，以準確診斷與凈化PRV。

4.3 本試驗首先全群逐頭采集試驗場的種公豬和混群前后備母豬的扁桃體和血清，進行PRV篩查，防止配種時交叉感染；其次，對表現出臨床癥狀的個體進行采樣檢測，以提高檢出率，加快凈化進程。經過一年半對7個種豬場4個豬群定期開展PRV血清學和病原學檢測，結合嚴格的生物安全措施，共淘汰病原檢測陽性豬105頭，種公豬和后備母豬的病原陽性率由0.46%、5.14%降到0，仔豬成活率由凈化前的71.14%提高到92.43%，有效控制了種豬的帶毒感染，達到了凈化要求，為后期申請凈化評估、建立非免疫凈化場奠定了基礎。