遵義地產藥材白及與知母HPLC指紋圖譜識別

1.遵義市食品藥品檢驗所，貴州 遵義 563002；2.貴陽中醫學院藥學院，貴州 貴陽 550001

白及為蘭科植物白及Bletillastriata(Thunb.)Reichb.f.干燥的塊莖[1]，具有收斂止血、消腫生肌功效、用于咯血、吐血、外傷出血、瘡瘍腫毒。知母為為百合科植物知母AnemarrhenaasphodeloidesBge.干燥的塊莖，白及和知母藥材外形極為相似，特別炮制為飲片后，由于白及與知母在價格上有極大的差異，在民間人們用知母冒充白及藥材和白及飲片銷售的例子越來越多。筆者采用白及對照藥材作為參照，建立HPLC指紋圖譜共有模式，為白及藥材快速識別提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent LC-1260高效液相色譜議(包括四元泵，DAD，柱溫箱，自動進樣器，工作站)，AB204-S型梅特勒電子天平，KQ-500DV型數控超聲波清洗機(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試劑與材料 乙睛色譜純，娃哈哈純凈水，硅膠G薄層板(購于青島海洋化工有限公司)，其它試劑均為分析純，白及對照藥材(批號：121262-201405，中國食品藥品檢檢驗研究院)。白及和知母藥材，采集于貴州省遵義各地區，白及經遵義市食品藥品檢驗所鄧順超副主任中藥師鑒定為蘭科植物白及(Bletillastriata(Thunb.)Reichb.f.干燥的塊莖，知母為為百合科植物知母AnemarrhenaasphodeloidesBge.干燥的塊莖，樣品來源見表1。

2 方法和結果

2.1 指紋圖譜建立[3-6]

2.1.1 色譜條件 色譜柱：Aglent C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈(A)-0.2%磷酸水溶液(B)進行線性梯度洗脫，0～10 min，5%A～10% A，10～15 min，10%A～20%A，15～35 min，20%A～30% A，35～45 min，30%A～10% A；45～50 min，10%A～5% A，體積流量：1.0 mL·min-1；柱溫：25 ℃；檢測波長：225 nm；運行時間：50 min；進樣量為10 μL。所有組分在50 min內出峰完畢。

表1 樣品來源

2.1.2 對照藥材溶液制備 取對照藥材約1.0 g，精密稱定，加甲醇20 mL，稱其重量，超聲處理50 min，取出，放置室溫，用甲醇補足重量，取續濾液，即得。

2.1.3 供試品溶液的制備 精密稱取白及藥材粉末(過2號篩)1.0 g，按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，即得。

2.1.4 方法學考察

2.1.4.1 精密度 取同一供試品溶液，按上述色譜條件連續進樣6次，測得各共有指紋峰相對保留時間的RSD為1.0%，結果表明儀器精密度好。

2.1.4.2 重復性 取同一批樣品6份，制備供試品溶液，分別進樣，以對照藥材為參照，共有特征峰相對保留時間的RSD為1.8%，結果表明重復性良好。

2.1.4.3 穩定性 取同一供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、12 h進樣，測得各共有特征峰相對保留時間的RSD為1.3%，結果表明供試品溶液在12 h內穩定。

2.1.5 共有指紋圖譜峰的標定 根據11批白及供試品溶液和1批對照藥材溶液和3批混淆品知母溶液的HPLC法測定結果，以白及對照藥材為參照，比較其色譜圖(見圖2、圖3、圖4)，以對照藥材為參照，共有峰的保留時間和共有峰面積標定共有峰13個，結果表明共有峰的保留時間RSD小于1.0%，符合指紋圖譜的要求。HPLC指紋圖譜13個共有峰保留時間和峰面積，見表2。

表2 白及共有峰保留時間和峰面積

3.6 相似度計算 采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價軟件2004年A版計算出10批次的白及與1批對照藥材和3批知母HPLC指紋圖譜的相似度，與共有模式相比較，結果見表3。

表3 10批不同產地白及和1批對照藥材和3批知母HPLC指紋圖譜的相似度

樣品號相似度S10.995S20.993S30.990S40.991S50.977S60.962S70.964S80.980S90.975S100.971S110.969S120.125S130.134S140.146

3 討論

通過建立該指紋圖譜，對10批白及和1批對照藥材和3批混淆品知母藥材HPLC圖譜進行比較，結果發現10批白及藥材HPLC圖譜的共有峰保留時間、相對峰面積非常吻合，與對照藥材共有模式R比較，相似度均大于0.95。由此可以確定這10批見白及藥材質量較為一致，這與藥材來源相吻合。共有峰峰面積相差較大外，這可能是藥材生長環境因素影響，而3批知母藥材相似度均小于0.20。

本法簡便、快速，準確度高，特征性強等特點，可用于白及藥材的質量控制和識別，同時為遵義白及藥材和混淆品知母藥材鑒別和質控制提供科學依據。