正交設(shè)計法優(yōu)化木瓜果實多糖提取工藝

陳向陽 王恒 劉勤

摘 要：通過熱水浸提法和醇沉法對木瓜果實的多糖進行提取，探討熱水提取溫度、料液比、熱水提取時間以及醇沉時乙醇濃度4個因素對木瓜果實多糖提取的影響，并以多糖含量為指標，蒽酮-硫酸比色法為測定方法，采用正交試驗法確定木瓜果實多糖提取的最佳工藝條件。結(jié)果表明，提取溫度80℃，料液比1：60g/mL，提取時間60min，乙醇濃度80%，在此條件下多糖的提取率達到5.6%，工藝條件最佳，具有可行性和可靠性。

關(guān)鍵詞：木瓜；多糖提取；正交試驗；蒽酮-硫酸比色法

中圖分類號 S661.6 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2018）13-0018-03

Abstract：In this study，polysaccharides was isolated from papaya fruit by hot water extraction and alcohol deposit.In hot water extraction，extraction temperature，the ratio of material to solution，extraction time and the concentration of ethanol as the factors affecting extraction ratio were studied.The content of the polysaccharide was determinated by phenol sulfuric acid method.Orthogonal test was conducted to select the optimal conditions for the determination of polysaccharide from papaya fruit.The optimum conditions of papaya fruit were：the optimal temperature for 80℃ baptized mention，best liquid ratio for 1：60g/mL，best extraction time for 60 minutes，best ethanol concentration is 80%.Under these conditions，the extraction efficiency of polysaccharide was 5.6%.The feasibility and reliability of this optimum conditions were verified through experiments.The experiments had provided the strongest assurance on the study of polysaccharides content of Chaenomeles sinensis.

Key words：Papaya fruit；Extraction of polysaccharides；Orthogonal test；Anthrone-sulphuric acid colorimetry

1 引言

木瓜（Chaenomeles sinensis（Thouin）Koehne），又稱皺皮木瓜、貼梗海棠，屬薔薇科木瓜屬，主要產(chǎn)于山東、安徽、湖北等地[1]。木瓜具有多種功效，可以增強體質(zhì)，降低血壓，有一定作用腸胃，有效預防中暑[2]，改善腳氣問題，治療風濕病，還可以有效防治霍亂等疾病。木瓜含有許多有益于人體健康的成分，如維生素、糖類、礦物質(zhì)、黃酮、蛋白酶類、多種有機酸等，有很高的藥用價值和營養(yǎng)價值[3]。

木瓜多糖（stauntonia chinensis polysaccharides，SCP）是從藥食兩用植物木瓜中分離提取的重要活性成分，研究表明SCP具有顯著的抗氧化活性，對實驗性小鼠肝損傷有保護作用，而且木瓜多糖還能顯著降低血小板的聚集，起到抗凝血的作用[4-7]。當前對多糖研究很多，但對木瓜多糖的提取工藝還缺乏系統(tǒng)的研究，本文通過熱水浸提法和醇沉法提取多維1號木瓜果實多糖，利用正交設(shè)計法優(yōu)化多維1號木瓜果實多糖的提取工藝，確定其多糖提取的最佳工藝條件，提高木瓜的經(jīng)濟價值和綜合開發(fā)價值。

2 材料與方法

2.1 材料 多維1號木瓜的果實，2016年7月采購于安徽省黃山市休寧縣多維科技有限公司。于烘箱中60℃烘制24h取出，粉碎，待用。

2.2 試劑 無水乙醇（江蘇鎮(zhèn)江長興酒精有限公司），分析純；蒽酮（上海科豐化學試劑有限公司），分析純；濃硫酸（95%～98%，西隴化工股份有限公司），葡萄糖（中國醫(yī)藥集團上海化學試劑公司），分析純。

2.3 主要儀器 DGX-9073B-2型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海福瑪實驗設(shè)備有限公司）；TJ-2型組織搗碎機（金壇市杰瑞爾電器有限公司）；AE224型電子天平（上海舜宇恒平科學儀器有限公司）；UV-765型紫外可見分光光度計（上海元析儀器有限公司）；TGL-16A臺式高速冷凍離心機（長沙平凡儀器儀表有限公司）；HH-6S型水浴鍋（金壇市杰瑞爾電器有限公司）；電子萬用電爐（天津市泰斯特儀器有限公司）。

2.4 試驗方法

2.4.1 木瓜果實多糖溶液的制備[8-11] 取干燥粉碎的多維1號木瓜粉1g，放入三角燒瓶中進行熱水提取，隔一段時間進行振蕩，然后倒入離心管中，在10℃，3500r/min條件下離心10min，取上清液過濾，過濾液加入3倍過濾體積的乙醇（不同濃度）沉淀，靜置過夜，將其倒入蒸發(fā)皿中于電子萬用電爐中蒸干，逐盡酒精，將蒸干的含糖殘留物用蒸餾水復溶并轉(zhuǎn)移至1000mL容量瓶中，定容搖勻，備用。

2.4.2 木瓜果實木瓜多糖含量測定[8-11] 每種樣品精密稱取2mL于25mL試管中，沿管壁緩慢加入8mL蒽酮試劑，邊加邊振蕩，接著將試管連同試管架一起放入100℃水浴鍋中進行加熱10min，拿出來放入冷水中降溫，溫度接近室溫即可，以加入蒸餾水的試管作為空白對照，利用分光光度計于620mm波長下測定吸光度。按下式計算多維1號木瓜多糖提取率：

[多糖提取率（%）=提取液中的多糖多量多維一號木瓜粉樣品質(zhì)量×100]

2.4.3 單因素試驗 考察熱水提取溫度（60℃、70℃、80℃、90℃、100℃）、熱水提取時間（30min、40min、50min、60min、70min）、料液比（1：50、1：60、1：70、1：80、1：90g/mL）、醇沉時乙醇濃度（50%，60%，70%，80%，90%）對多維1號木瓜多糖提取率的影響。

2.4.4 正交試驗 通過單因素試驗結(jié)果，選取熱水提取溫度、熱水提取時間、料液比和醇沉時乙醇濃度4個因素最佳的水平，進行4因素3水平的正交試驗，見表1。

3 結(jié)果與分析

3.1 單因素試驗

3.1.1 不同料液比 由圖1可知，在其他因素的水平不變的條件下，增加料液比，多維1號木瓜果實多糖的提取率也不斷增加，當料液比為1：70g/mL時，多維1號木瓜果實多糖的提取率達到最大值5.19%，繼續(xù)增加料液比，提取率下降，表明提取料液比過高會導致后續(xù)工作能耗增加、提取效率降低，在之后的單因素試驗中控制料液比為1：70g/mL進行試驗。選擇料液比1：60g/mL、1：70g/ml、1：80g/mL作為正交試驗的3個水平。

3.1.2 提取溫度 由圖2可知，在固定提取提取料液比1：70g/mL、提取時間30min、乙醇濃度50%的條件下，通過改變提取溫度，多維1號木瓜果實多糖的提取率也不斷改變，當提取溫度達到80℃時，多維1號木瓜果實多糖的提取率達到最大值5.28%，當提取溫度高于80℃時多維1號木瓜果實多糖提取率，現(xiàn)象表明提取溫度過高造成了木瓜果實多糖的變性。在之后的單因素試驗中控制提取溫度為80℃進行試驗。選擇提取溫度70℃、80℃、90℃作為正交試驗的3個水平。

3.1.3 提取時間 由圖3可知，在其他3個因素的水平不變的條件下，通過改變提取時間，多維1號木瓜果實多糖的提取率也不斷改變，當提取時間達到60min時，多維1號木瓜果實多糖的提取率達到最大值5.42%，提取時間繼續(xù)加長，木瓜果實多糖提取率有下降趨勢，但是趨勢不明顯，考慮到提取時間過長會加長試驗時間，拖延實驗進程，因此熱水提取時間不宜過長。在之后的單因素試驗中控制提取時間為60min進行試驗。選擇提取時間50min、60min、70min作為正交試驗的3個水平。

3.1.4 乙醇濃度 由圖4可知，在其他3個因素的水平不變的條件下，通過改變乙醇濃度，多維1號木瓜果實多糖的提取率也在變化，當乙醇濃度達到80%時，多維1號木瓜果實多糖的提取率達到最大值5.47%，此后隨著乙醇濃度的繼續(xù)增大，木瓜果實多糖的提取率不斷減小，說明乙醇濃度是影響木瓜果實多糖提取率的一個重要因素。選擇乙醇濃度70%、80%、90%作為正交試驗的3個水平。

3.2 正交試驗

3.2.1 正交試驗設(shè)計及其結(jié)果 正交試驗結(jié)果如表2所示。

由表2可知，對多維1號木瓜果實多糖提取率的影響最顯著的是提取溫度，其次是料液比和提取時間，影響最小的是乙醇濃度。對多糖提取的各影響因素3個水平間優(yōu)勢為：A1>A2>A3，B2>B1>B3，C2>C1>C3，D2>D1>D3，得到用熱水浸提法和醇沉法提取多維1號木瓜果實多糖的最佳工藝條件是：提取溫度80℃，料液比1：60g/mL，提取時間60min，乙醇濃度80%。

3.2.2 正交試驗結(jié)果的驗證 由正交試驗優(yōu)選得提取木瓜多糖最佳工藝條件：提取溫度80℃，料液比1：60g/mL，提取時間60min，乙醇濃度80%，在此條件下重復進行3次試驗，試驗結(jié)果見表3。

由表3可得3次平行試驗多糖平均提取率為5.597%，與正交試驗結(jié)果理論值接近，說明正交試驗結(jié)果可靠。

4 結(jié)論與討論

通過設(shè)計正交試驗確定了木瓜果實多糖提取的最佳工藝條件：提取溫度80℃，料液比1：60g/mL，提取時間60min，乙醇濃度80%，并對正交試驗結(jié)果進行了3次平行試驗驗證，得出用正交設(shè)計法優(yōu)化多維1號木瓜果實多糖的提取工藝具有可行性，結(jié)果具有可靠性，為木瓜多糖臨床研究提供更有力工藝保證，并提高了多維1號木瓜的經(jīng)濟和綜合開發(fā)價值。

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（責編：王慧晴）