崔英俊,于廣璞,湯云飛,孫 喆,張 莉
(東北農業大學生命科學學院,哈爾濱 150030)
乳房腺體由具有分支形態的腺體小葉構成。妊娠早期乳腺分支階段短側枝形成,為分泌腺泡提供發育平臺[1]。妊娠期腺泡細胞數量和功能分化決定后續產奶能力,分支形態發生是腺泡發育和泌乳前提。
乳腺分支體外研究普遍使用三維培養,有利于研究乳腺組織體內發育、形態發生和細胞外基質信號傳導。Ⅰ型膠原是細胞外基質主要成分,在三維培養時為組織提供力學環境,參與細胞信號傳導,增加相關乳蛋白合成持續性,還可保存和運輸細胞外基質分泌的生長因子以應對組織損傷修復[2]。堿性成纖維細胞生長因子(Fibroblast growth factor 2,FGF2)作為公認的誘導分支形態發生的細胞因子,廣泛用于三維培養。
20世紀90年代,學者利用雌性小鼠乳腺類器官,使用I型膠原并添加相關細胞因子作三維培養,在體外重現乳腺導管發育后,該培養模型廣泛用于研究肺、唾液腺、腎臟、血管和乳腺導管發育[3]。在國內研究中,該培養模型多應用于肺[4]、胰腺[5]、骨髓間充質干細胞培養[6],關于乳腺組織應用鮮有報道。以往乳腺分支研究多以小鼠為主,無法代替反芻動物乳腺分支情況。為明確FGF2誘導奶牛乳腺分支過程中涉及信號通路,本文利用青春期奶牛乳腺類器官作三維培養,利用FGF2誘導類器官分支,確定FGF2在奶牛乳腺分支過程中起作用的信號通路。
1.1.1 乳腺組織
采集無菌新鮮健康青春期荷斯坦奶牛乳腺組織,無菌生理鹽水保存并迅速帶回實驗室?!?br>