香玲核桃組培褐化控制的研究

何九軍 趙淑玲 朱迎春 張少飛

摘要 通過組織培養香玲核桃，對其滅菌方法、褐變、培養基選擇、培養條件、組織培養苗生根技術等方面進行了探討和研究。

關鍵詞 香玲核桃；組織培養；營養價值；褐化

中圖分類號：Q813.1+2；S664.1 文獻標識碼：A 文章編號：2095-3305（2018）05-010-02

DOI： 10.19383/j.cnki.nyzhyj.2018.05.005

組織培養在植物離體快繁、無病毒苗木培育，遺傳育種及種質資源保存等方面取得了許多成就和進展。然而，在植物的組織培養中易出現外植體或培養物的褐化、枯死現象[1]。褐變是由組織中的酚類物質經多酚氧化酶（PPO）氧化后產生棕褐色的醌類物質所造成的[2]。

核桃自古以來深受隴南廣大農民喜愛，經濟效益尤被看好。作為食療佳果，核桃含有大量脂肪和易被人體吸收的蛋白質，其所含蛋白質中有對人體極為重要的賴氨酸，對大腦神經十分有益。中醫認為核桃可溫肝、補腎、健腦、強筋、壯骨，還能治療性功能減退、神經衰弱、記憶衰退、潤腸通便、腎結石，有防癌、防心腦血管疾病、防輻射、抗衰老等作用。文中通過組織培養香玲核桃，就其滅菌方法、褐變、培養基選擇、培養條件、組織培養苗生根技術等方面進行了探究。

1 材料與方法

1.1 材料

材料：香玲核桃在甘肅成縣核桃科技示范園采集。

儀器：燒杯，天平，滅菌培養皿，外植體剪刀，濾紙，酒精燈，計時器，紗布，托盤，錐形瓶（3個），廢液罐（3個），一次性手套，玻璃棒，鑷子；超凈工作臺（上海躍進醫療器械有限公司），LDZX？鄄50KBS立式壓力蒸汽滅菌器（上海申安醫療器械廠）。

試劑：無菌水，升汞，酒精（75%），注射用青霉素鈉（哈藥集團），蔗糖（天津市永大化學試劑有限公司），PVP 聚乙烯吡咯烷酮，瓊脂粉，抗壞血酸（天津市大茂化學試劑廠），6？鄄BA，I？鄄BA，I？鄄AA。

1.2 方法

1.2.1 核桃外植體的處理 ①先用紗布包裹外植體，用流水沖洗30 min；②用浸有酒精（75%）的紗布輕輕擦拭初步消毒；③用植體剪裁剪外植體，除去植體兩端，將有分叉的枝干裁剪至約2～3 cm長，平均放入3個錐形瓶中；④用75%酒精消毒30 s，需搖晃錐形瓶，以保證消毒徹底。消毒后放入指定的廢液酒精罐中；⑤用升汞分別消毒5、7、10 min。用計時器準確記錄時間。消毒同須搖晃錐形瓶，以起到徹底消毒的作用。消毒后將廢液升汞倒入指定的廢液罐中；⑥用無菌水沖洗3～5次。沖洗需要徹底搖晃，達到徹底清洗消毒液的作用。將廢水倒入指定的廢水罐中；⑦將無菌的濾紙在酒精燈上灼燒后，平鋪于培養皿底部，兩外植體依次按5、7、10 min吸干多余水分，進行接種，并且標記。

1.2.2 核桃外植體的接種 在超凈工作臺上，用250 mg/L的PVP浸泡消毒后的外植體5 min，用無菌紗布擦干表面水分；打開培養基，用無菌鑷子和剪刀將外植體剪切成帶芽的莖端（1.5～2.5 cm），置于培養基中，將外植體與培養基平面成45°角斜插入培養基中（芽尖向上）；瓶口火焰消毒后，蓋上瓶塞，置于培養室中培養。7 d后開始觀察。

1.2.3 核桃外植體的培養條件 光照條件12 h/d，光照強度2 000-2 500 LX，溫度25/18℃。

1.3 試驗過程

稱取瓊脂12 g，蔗糖50 g，將其加入盛有500 ml的大盆中，放到電爐上加熱，邊加熱邊用玻璃棒攪拌，按表1配置基本培養基（DKW）并加入相應激素，再將其加入裝有300～400 ml蒸餾水的燒杯中，待瓊脂完全溶解后，倒入大盆中，繼續攪拌，調pH后，再將盆中的物質倒入前期準備好的錐形瓶中，蓋上塞子，分別標記為H1、H5與H6。獲得H1，H5，H6各30瓶。

2 結果與分析

從表2可以看出，H1、H5和H6 3種培養基中，H6的培養基中的核桃苗的褐變數最少，故H6（改良的DKW+6？鄄BA 10 g/L+I？鄄AA 50 g/L+PVP+抗生素）的培養基效果最好。

3 結論與討論

褐化現象是果樹組織培養中的普遍現象，桃、 杏、 櫻桃、 李等均有關于褐變的報道，核桃的褐化表現更為明顯。褐化是由于酚類物質被氧化成醌，醌聚合后形成深色物質而產生的。培養材料的種類與品種、 外植體材料的生理狀態、營養狀況、生長部位等是內因，培養基成分、添加激素的種類和濃度、培養條件等為外因，均會導致褐變的產生。在培養基中添加抗氧化劑或酚類吸附劑是防止外植體褐變的常用方法，對于減少香玲核桃的褐變還有待進一步的研究。

參考文獻

[1] 趙寶軍，宮永紅. 遼寧省核桃優良品種及主要栽培技術[J].遼寧林業科技，2002（4）：40-41.

[2] 姚紅軍，羅曉芳，田硯亭. 植物組織培養褐變的研究進展[J].北京林業大學學報，1999，21（3）：78-84.

[3] 劉淑蘭. ‘薄殼香核桃組培中的褐化及防止措施研究[J]. 園藝學報，2009，29（2）：171-172.

[4] 張小紅，代侃韌，馬兆平，等. 核桃離體培養中外植體褐化的研究[J]. 陜西林業科技，2005（5）：7-9.

[5] 張建成. 吳國良. 屈紅征，等. 培養基及培養條件對核桃試管芽苗繼代增殖的影響[J]. 山西農業大學學報，2005（1）：45-48.

[6] 江虎軍， 潘季淑， 孟新法. 桃莖尖培養技術研究[J]. 北京農業大學學報， 1993，19（1）：49-52.

[7] 馬鋒旺，張軍科，李嘉瑞.杏離體繁殖的研究[J].西北農業大學學報， 1999， 27（4）：12-15.

[8] 鄒英寧，李國懷，樊青峰，等.等不同抗氧化劑對中國李莖段培養的影響[J].華中農業大學學報， 2006， 25（1） ：84-86.

責任編輯：劉赟