全自動生化儀檢測高同型半胱氨酸血癥大鼠血漿同型半胱氨酸及葉酸濃度

周肈魁 王 捷 時建國 閔 沛 秦慶君

在急癥治療中，生化檢驗發(fā)揮著極為重要的作用，包括電解質(zhì)檢測、腎功能檢測等多個項目，檢驗報告能夠?qū)⒂行б罁?jù)提供給臨床的治療工作。快速、準確的生化檢驗報告能夠?qū)⒏嗟闹委煏r間爭取給急癥患者，促進臨床治療成功率的提升[1]。本研究旨在對高同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)血癥大鼠血漿Hcy及葉酸濃度的全自動生化儀檢測進行研究。

1 材料與方法

1.1 設(shè)備與材料

AU-680型全自動生化儀(美國貝克曼庫爾特公司)。健康斷乳Wistar大鼠24只(購自蘭州大學(xué)實驗動物中心)。AIN-93動物飼料和AIN-93G配方飼料均購自北京科奧協(xié)力有限公司。

1.2 實驗方法

選用健康斷乳Wistar大鼠24只，全部為雄性，6周齡，體質(zhì)量150～170 g，平均體質(zhì)量(160±10)g。進行1周的適應(yīng)性喂養(yǎng)后依據(jù)隨機數(shù)表法將24只大鼠分為研究組(高Hcy血癥組)與對照組，每組12只。兩組采用不同飲食飼養(yǎng)。研究組大鼠食用AIN-93飼料，含1.7%L-蛋氨酸，對照組大鼠食用AIN-93G配方飼料。在寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院外科實驗中心封閉式飼養(yǎng)籠中飼養(yǎng)兩組大鼠，控制飼養(yǎng)溫度為18～22℃，平均(20±2)℃，讓大鼠自由飲水，進行18周的連續(xù)飼養(yǎng)。

1.3 大鼠Hcy和葉酸濃度的測定

飼養(yǎng)18周后大鼠進行1 d禁食，對其進行腹腔麻醉，在此過程中將3%水合氯醛充分利用起來，取10 ml左右心臟血，對其進行10 min的離心，轉(zhuǎn)速為3000 r/min，取血清分裝在微量離心(Eppendorf，EP)管中，凍存在-80 ℃溫度下。以較快的速度向髂動脈分叉處分離主動脈，方向為沿著主動脈弓，將主動脈取下，在10%甲醛固定液中放置胸主動脈上段1 cm左右，在液氮中放置其他主動脈部分，最后凍存在-80 ℃溫度下。采用貝克曼AU-680型全自動生化儀對兩組大鼠的血漿Hcy和葉酸濃度進行測定。

1.4 觀察評價指標

觀察記錄兩組大鼠血漿Hcy及葉酸濃度測定值，并進行比較分析。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，兩組大鼠的血漿Hcy和葉酸濃度等計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示，采用t檢驗，檢驗水準α=0.05，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

研究組大鼠的血漿Hcy和葉酸濃度分別為(22.3±4.9)μmol/L和(121.3±14.1)ng/ml；對照組大鼠的血漿Hcy和葉酸濃度分別為(4.8±0.4)μmol/L和(110.3±12.2)ng/ml，研究組大鼠血漿Hcy濃度顯著高于對照組，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=4.303，P＜0.05)，但兩組大鼠的血漿葉酸濃度之間差異不顯著，無統(tǒng)計學(xué)意義(t=1.886，P＞0.05)，見表1。

表1 兩組大鼠血漿Hcy及葉酸濃度比較(±s)

表1 兩組大鼠血漿Hcy及葉酸濃度比較(±s)

注：表中Hcy為同型半胱氨酸。

組別 只數(shù) Hcy(μmol/L） 葉酸(ng/ml）研究組 12 22.3±4.9* 121.3±14.1對照組 12 4.8±0.4 110.3±12.2 t值 4.303 1.886 P值 ＜0.05 ＞0.05

3 討論

紀鐵梅[2]研究表明，心血管疾病的一個重要獨立危險因素為高Hcy血癥。動物模型研究結(jié)果表明，Hcy能夠通過損傷內(nèi)皮及其功能、提升氧化應(yīng)激、對脂質(zhì)代謝造成影響等各種機制致病，促使心腦血管疾病發(fā)病危險性的提升。高Hcy血癥能夠為血液高凝狀態(tài)提供良好的前提條件，增加膽固醇合成，減少載脂蛋白A1合成，進而減少高密度脂蛋白生成，將粘附分子表達上調(diào)，對鈣離子進行誘導(dǎo)，使其作為第二信使在平滑肌細胞中將作用充分發(fā)揮出來。高Hcy血癥損傷內(nèi)皮功能的機制為，為內(nèi)皮細胞凋亡提供良好的前提條件，減少一氧化氮合成，增加非對稱性二甲基精氨酸生成，增多內(nèi)皮素釋放。高Hcy血癥在動物模型中能夠促進動脈粥樣硬化的形成。Scott等[3]研究表明，在促進動脈斑塊進展速度加快、擾亂內(nèi)皮功能以及促進血栓形成的過程中，高膽固醇血癥與高Hcy血癥具有協(xié)同作用。

近年來，臨床研究中逐漸闡明了細胞內(nèi)致動脈粥樣硬化機制，包括內(nèi)質(zhì)網(wǎng)氧化應(yīng)激、L-高半胱氨酸在細胞內(nèi)金屬硫蛋白上作用促進混合二硫共軛化合物的形成、金屬硫蛋白同型半胱氨酸活性功能在酰化后喪失，擾亂氧化還原穩(wěn)態(tài)，促進血管疾病發(fā)生速度的加快。Liu等[4]研究表明，血管內(nèi)皮細胞功能紊亂可能極易在高Hcy細胞致病作用下發(fā)生。總體而言，高Hcy血癥影響心血管疾病發(fā)生的機制可能為細胞內(nèi)外多種機制。

He等[5]研究表明，心血管疾病的一個重要獨立危險因素為血漿Hcy濃度提升，心血管風(fēng)險會隨著血漿Hcy濃度的提升而提升，服用0.5～5.0 mg/d葉酸能夠在一定程度上降低血漿Hcy濃度。但是現(xiàn)階段，臨床尚未明確心血管疾病是否能夠在口服葉酸的作用下得到有效預(yù)防。

目前，全自動生化分析儀、血氣分析儀是臨床通常采用的生化檢驗設(shè)備。Zhang等[6]研究表明，全自動生化分析儀不同于血氣生化儀，臨床可以適當調(diào)整檢測標準參考范圍，在參考范圍內(nèi)對結(jié)果進行科學(xué)合理分析。Li等[7]研究表明，在鉀、鈉、氯的檢測中，AU-680型全自動生化儀與PL2000PLUS血氣生化儀相比，具有較好的結(jié)果，發(fā)生這一現(xiàn)象的原因為二者具有不同的檢測原理，AU-680型全自動生化儀運用間接離子選擇電極法。同時，二者具有不同的檢測樣本[8]。此外，鉀、鈉、氯三種離子在細胞內(nèi)外具有不同的含量[9-11]。相關(guān)醫(yī)學(xué)學(xué)者[12-16]采用AU-680型全自動生化儀與ABL80型血氣分析儀檢測了202例急診患者的鉀、鈉、氯三種離子含量，以對其電解質(zhì)進行了解，發(fā)現(xiàn)和血氣生化儀相比，AU-680型全自動生化儀的檢測含量顯著較高。本研究結(jié)果表明，研究組大鼠的血漿Hcy濃度顯著高于對照組，但兩組大鼠的血漿葉酸濃度之間的差異不顯著，與上述相關(guān)醫(yī)學(xué)研究結(jié)果一致。

全自動生化儀檢測高Hcy血癥大鼠血漿Hcy濃度提升，葉酸濃度提升不顯著，臨床中可以依據(jù)血漿Hcy濃度對高Hcy血癥進行診斷。